MEDIO VỀ: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CHUẨN BỊ, SỬ DỤNG VÀ HẠN CHẾ - SINH HỌC - 2026

Các CÁC hoặc glucose lên men vừa là một agar bán kiên cố thiết kế đặc biệt cho việc nghiên cứu của oxy hóa và trao đổi chất lên men của các carbohydrate trong một nhóm quan trọng của các vi sinh vật khác ngoài Enterobacteriaceae, được gọi là phi đường ruột Gram âm trực khuẩn.

Nó được tạo ra bởi Hugh và Leifson; những nhà nghiên cứu này nhận ra rằng các phương tiện nghiên cứu sản xuất axit từ cacbohydrat thông thường không phù hợp với nhóm vi khuẩn cụ thể này.

A. Môi trường OF bazơ thương mại. B. Ống có hạt giống trung gian OF. Nguồn: A và B Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Điều này là do các que Gram âm không qua ruột thường tạo ra một lượng axit thấp, không giống như Enterobacteriaceae.

Theo nghĩa này, môi trường OF có các đặc điểm đặc biệt có thể phát hiện một lượng nhỏ axit được tạo thành, cả bằng con đường oxy hóa và lên men. Những khác biệt này liên quan đến lượng peptone, carbohydrate và agar.

Môi trường này chứa ít pepton hơn và nồng độ cacbohydrat cao hơn, do đó làm giảm các sản phẩm kiềm hoá môi trường do kết quả của quá trình chuyển hoá protein và tăng sản xuất axit do sử dụng cacbohydrat.

Mặt khác, việc giảm lượng thạch tạo điều kiện cho sự phổ biến của axit được tạo ra khắp môi trường, ngoài ra còn cho phép chúng ta quan sát được tính chuyển động.

Môi trường OF bao gồm peptone, natri clorua, bromothymol blue, dipotassium phosphate, agar, và một carbohydrate. Carbohydrate phổ biến nhất là glucose nhưng những loại khác có thể được sử dụng theo thứ mà người ta muốn nghiên cứu, chẳng hạn như lactose, maltose, xylose, trong số những loại khác.

Nền tảng

Giống như tất cả các môi trường nuôi cấy, môi trường OF phải chứa các chất dinh dưỡng đảm bảo sự phát triển của vi khuẩn; các chất này là pepton.

Về phần mình, carbohydrate cung cấp năng lượng và đồng thời dùng để nghiên cứu hành vi của vi sinh vật chống lại nó, tức là, nó cho phép phân loại vi khuẩn là sinh vật oxy hóa, lên men hoặc không đường hóa.

Môi trường OF chứa tỷ lệ peptone / carbohydrate 1: 5 so với môi trường thông thường 2: 1. Điều này đảm bảo rằng số lượng các amin kiềm được hình thành từ sự phân hủy của pepton không trung hòa sự hình thành của các axit yếu.

Mặt khác, môi trường chứa natri clorua và dipotassium phosphate. Các hợp chất này ổn định thẩm thấu môi trường và điều chỉnh độ pH tương ứng. Bromothymol blue là chất chỉ thị pH, chuyển màu của môi trường từ xanh lục sang vàng khi tạo ra axit.

Một số vi sinh vật có thể sử dụng carbohydrate thông qua con đường oxy hóa hoặc lên men, trong khi những vi sinh vật khác không sử dụng một trong hai con đường.

Điều này phụ thuộc vào đặc tính của từng loại vi sinh vật. Ví dụ, một số vi sinh vật hiếu khí nghiêm ngặt có thể oxy hóa một số carbohydrate nhất định và vi khuẩn kỵ khí dễ sinh có thể oxy hóa và lên men tùy thuộc vào môi trường xung quanh chúng, trong khi những vi sinh vật khác không oxy hóa hoặc lên men carbohydrate (asacarolytic).

Cuối cùng, có một sự thay đổi môi trường OF được CDC khuyến nghị có chứa một cơ sở OF đặc biệt với màu đỏ phenol làm chất chỉ thị.

Quá trình oxy hóa

Quá trình oxy hóa glucose không yêu cầu quá trình phosphoryl hóa glucose, cũng như quá trình lên men. Trong trường hợp này, nhóm anđehit bị oxy hóa thành nhóm cacboxyl, tạo ra axit gluconic. Điều này lần lượt bị oxy hóa thành 2-ketogluconic.

Chất sau cùng tích tụ hoặc phân hủy thành hai phân tử axit pyruvic. Hệ thống này yêu cầu sự hiện diện của oxy hoặc một số hợp chất vô cơ làm chất nhận electron cuối cùng.

Việc tạo ra axit bằng con đường này yếu hơn so với con đường lên men.

Quá trình lên men

Để quá trình lên men glucose xảy ra bằng bất kỳ con đường nào có sẵn, trước tiên nó phải được phosphoryl hóa, trở thành glucose-6-phosphate.

Quá trình lên men glucose có thể diễn ra theo một số con đường, con đường chính là con đường Embden-Meyerhof-Parnas, nhưng chúng cũng có thể đi theo con đường Entner-Doudoroff, hoặc con đường Warburg-Dickens hexose monophosphate, còn được gọi là về sự suy thoái của hoa ngũ sắc.

Con đường được chọn sẽ phụ thuộc vào hệ thống enzym mà vi sinh vật sở hữu.

Via Embden-Meyerhof- Parnas

Trong quá trình lên men glucose thông qua con đường Embden-Meyerhof-Parnas, nó được tách thành hai phân tử triose, sau đó được phân giải thành các hợp chất carbon khác nhau, cho đến khi hình thành glyceraldehyde-3-phosphate. Từ đó một chất trung gian bắt nguồn, đó là axit pyruvic.

Từ đó các loại axit hỗn hợp sẽ được hình thành có thể thay đổi từ loài này sang loài khác.

Hệ thống này xảy ra trong điều kiện không có oxy và cần một hợp chất hữu cơ làm chất nhận electron cuối cùng.

Con đường Entner-Doudoroff

Trong quá trình lên men glucose thông qua con đường Entner-Doudoroff, glucose 6-phosphate trở thành glucono-ᵼ-lactone-6-phosphate và từ đó nó bị oxy hóa thành 6-phosphogluconate và 2-keto-3-deoxy-6- phosphogluconate, cuối cùng tạo thành axit pyruvic. Con đường này cần oxy để quá trình đường phân xảy ra.

Con đường phân hủy Pentoses hoặc con đường Warburg-Dickens Hexoxa monophosphate

Tuyến đường này là sự kết hợp của 2 tuyến trên. Nó bắt đầu tương tự như con đường Entner-Doudoroff, nhưng glyceraldehyde-3-phosphate sau đó được hình thành như một tiền chất của axit pyruvic, như xảy ra trong con đường Embden-Meyerhof-Parnas.

Sự chuẩn bị

Cân:

2 g peptone

5 g natri clorua

10 g D-glucose (hoặc carbohydrate cần chuẩn bị)

0,03 g bromothymol xanh lam

3 gr thạch

0,30 g kali photphat

1 lít nước cất.

Trộn tất cả các hợp chất trừ cacbohydrat và hòa tan trong 1 lít nước cất. Vừa đun vừa lắc cho đến khi tan hoàn toàn.

Khi làm lạnh đến 50 ° C, 100 ml glucose 10% (đã lọc) được thêm vào.

Phân phối vô trùng 5 ml môi trường OF vào các ống nghiệm có nút bông và hấp tiệt trùng ở 121 ° C, áp suất 15 pound trong 15 phút.

Cho phép đông đặc ở vị trí thẳng đứng.

Độ pH của môi trường phải là 7,1 Màu của môi trường đã chuẩn bị là xanh lục.

Bảo quản trong tủ lạnh.

Các ứng dụng

Môi trường OF là một môi trường đặc biệt để xác định hành vi trao đổi chất của vi sinh vật chống lại carbohydrate. Đặc biệt là đối với những axit tạo thành ít, yếu hoặc không có axit.

Gieo

Đối với mỗi vi sinh vật, cần 2 ống OF, cả hai đều phải cấy vi sinh vật cần nghiên cứu. Khuẩn lạc được lấy bằng tay cầm thẳng và chọc thủng ở giữa ống mà không chạm đáy; Có thể thực hiện một số lỗ thủng, miễn là không quan tâm đến việc quan sát chuyển động.

Một lớp thạch dầu hỏa vô trùng hoặc parafin nóng chảy vô trùng (khoảng 1 đến 2 ml) được thêm vào một trong các ống và được dán nhãn bằng chữ "F". Ống còn lại được để nguyên bản và có nhãn "O". Cả hai ống đều được ủ ở 35 ° C và quan sát hàng ngày trong tối đa 3 đến 4 ngày.

Diễn dịch

Trao đổi chất và sản xuất khí

Bảng: Phân loại vi sinh vật theo hành vi của chúng trong ống OF mở (oxy hóa) và kín (lên men)

Nguồn: Thực hiện bởi tác giả ThS. Marielsa gil

Khí được quan sát với sự tạo thành bọt hoặc sự dịch chuyển của thạch.

Cần lưu ý rằng một sinh vật chỉ oxy hóa glucose mà không lên men nó, sẽ không thể lên men các carbohydrate khác, trong mọi trường hợp nó sẽ chỉ oxy hóa nó. Do đó, trong tình huống này, ống kín để nghiên cứu các cacbohydrat khác sẽ bị bỏ qua.

Động lực

Ngoài ra, tính di động có thể được nhìn thấy trong môi trường OF.

Khả năng vận động tích cực : sự tăng trưởng không giới hạn ở khu vực cấy. Có sự phát triển về phía các cạnh của ống.

Khả năng di chuyển âm tính : chỉ phát triển trong chất cấy ban đầu.

QA

Các chủng sau đây có thể được sử dụng để kiểm tra chất lượng: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa và Moraxella sp. Kết quả mong đợi là:

1. coli: Chất lên men glucozơ (cả ống màu vàng và ống sủi tăm).
2. aeruginosa: Chất oxy hóa glucoza (mở ống màu vàng và đóng dấu màu xanh lá cây hoặc xanh lam).
3. Moraxella sp: Không đường hóa (ống mở màu xanh lá cây hoặc xanh lam, ống kín màu xanh lá cây).

Hạn chế

-Một số vi sinh vật không thể phát triển trong môi trường OF. Trong những trường hợp này, thử nghiệm được lặp lại nhưng 2% huyết thanh hoặc 0,1% chiết xuất nấm men được thêm vào môi trường.

-Phản ứng oxy hóa thường chỉ được quan sát ở gần bề mặt và phần còn lại của môi trường có thể vẫn xanh, giống như cách nó được coi là dương tính.

Người giới thiệu

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Ấn bản thứ 3. Biên tập Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Phòng thí nghiệm Francisco Soria Melguizo. 2009. Môi trường của Glucose. Có tại: http://f-soria.es
5. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Môi trường OF glucozơ. Có tại: condalab.com
6. Phòng thí nghiệm BD. 2007. CỦA Phương tiện Cơ bản. Có tại: bd.com