PHƯƠNG TIỆN STUART: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC

Các Stuart vừa là một thạch nửa rắn hoặc nước dùng mà không cần chất dinh dưỡng, được sử dụng cho việc vận chuyển các mẫu sinh học. Mục đích của nó là giữ cho các chủng có trong mẫu có thể tồn tại trong một thời gian nhất định, nhưng không làm tăng quần thể vi sinh vật.

Nó được tạo ra bởi Moffet, Young và Stuart vào năm 1948 và sau đó được sửa đổi bởi Toshach và Patsula. Nó bao gồm natri glycerophosphat, natri thioglycolat, canxi clorua và thạch agar. Chất sau có trong môi trường bán rắn và không có trong chất lỏng. Một số phòng thí nghiệm thêm xanh methylen vào nó.

Culturette với vận chuyển Stuart. Nguồn: Bởi: CDC / Dr. Gilda Jones, Lịch sự: Thư viện Hình ảnh Y tế Công cộng

Chúng thường được sử dụng khi không thể gieo mẫu ngay. Trong trường hợp này, mẫu được đặt trong môi trường vận chuyển, trong khi mẫu được chuyển đến phòng thí nghiệm sẽ xử lý nuôi cấy.

Bằng cách này, đảm bảo rằng các vi sinh vật hiện diện vẫn còn sống cho đến khi chúng được cấy vào môi trường nuôi cấy tương ứng.

Ban đầu, việc sử dụng nó nhằm mục đích vận chuyển các mẫu niệu đạo hoặc âm đạo nơi nghi ngờ sự hiện diện của Neisseria gonorrhoeae. Sau đó, họ nhận ra rằng tính hữu dụng của nó có thể rộng hơn.

Môi trường Stuart hóa ra rất hiệu quả trong việc bảo tồn các vi sinh vật khó tính và không bền như Neisseria meningitidis, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Corynebacterium diphteriae, Bordetella pertusis, trong số những loại khác. Ngoài các vi sinh vật không gây khó chịu khác như Enterobacteria.

Môi trường Stuart về cơ bản ngăn cản sự hút ẩm của mẫu, duy trì sự cân bằng thẩm thấu và bảo tồn vi sinh vật ở độ pH lý tưởng. Mặt khác, về mặt chiến lược, môi trường này không chứa các chất dinh dưỡng, do đó ngăn vi sinh vật sinh sôi.

Trên thị trường có các thiết bị vận chuyển mẫu đặc biệt có chứa phương tiện vận chuyển này hoặc phương tiện vận chuyển khác, được gọi là máy cấy. Chúng cũng có thể được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm.

Nền tảng

Mục đích của phương thức vận chuyển Stuart là giữ cho các mẫu gần như nguyên trạng cho đến khi chúng được xử lý.

Natri glycerophosphat và canxi clorua là một hệ thống đệm hoạt động bằng cách duy trì độ pH và độ thẩm thấu.

Trong khi đó, natri thioglycollat hoạt động như một chất khử và trong trường hợp có chứa thạch, nó tạo cho nó độ nhất quán bán rắn, để làm chậm quá trình oxy hóa của môi trường. Cuối cùng, xanh methylen là một chất chỉ thị oxy hóa, tức là nó phát hiện sự hiện diện của oxy.

Môi trường bán rắn với chất chỉ thị oxy hóa khử là lý tưởng để vận chuyển các mẫu ở nơi nghi ngờ có sự hiện diện của vi khuẩn kỵ khí.

Đặc điểm của các phương tiện vận tải

Phương tiện Stuart, giống như tất cả các phương tiện giao thông, đáp ứng các đặc điểm nhất định, bao gồm:

- Duy trì các chủng vi sinh vật tồn tại mà không cần nhân lên.

-Không chứa chất dinh dưỡng; Các hợp chất của nó nhằm mục đích giữ cho mẫu ngậm nước, trong điều kiện pH và độ thẩm thấu thích hợp.

- Ức chế quá trình tự phân giải của một số vi sinh vật nhạy cảm như Pneumococcus.

-Sử dụng của nó là tạm thời, nó không nên quá lâu.

Sự chuẩn bị

Môi trường Stuart bán rắn với chất chỉ thị oxy hóa khử

Chuẩn bị nhà

Thành phần

Natri glycerophosphat 10 gr

Natri thioglycollate 1,0 gr

Canxi clorua 0,1 gr

Xanh metylen 0,002 gr

Agar-agar 3 gr

Nước cất 1 L

Trộn các thành phần và đun nóng cho đến khi hòa tan hoàn toàn. Đổ vào ống hoặc gạc đặc biệt. Chúng được đưa vào nồi hấp tiệt trùng ở 121ºC trong 15 phút. Để các ống nguội theo phương thẳng đứng (theo hình khối). Giữ ở nhiệt độ phòng.

Chuẩn bị với môi trường thương mại

Cân 14,1 g môi trường trong 1 lít nước cất. Đun sôi lắc thường xuyên cho đến khi tan hoàn toàn, có thể đun sôi. Phần còn lại của thủ tục như đã được mô tả.

Môi trường khử nước có màu kem và được chuẩn bị phải có màu xanh lam trên bề mặt của nó. Điều này là do sự hiện diện của xanh methylen.

PH của môi trường phải được điều chỉnh đến 7,4 ± 0,2

Chất lỏng biến đổi Stuart Medium (tự chế)

Thành phần

Natri glycerophosphat 10 gr

Natri thioglycollate 1 gr

Canxi clorua dihydrat 0,1 gr

Nước cất 1000 ml

Nó có các thành phần tương tự như chất bán rắn, nhưng nó không có thạch, hoặc xanh methylen. Trong trường hợp này, các thành phần được trộn mà không cần đun nóng và 0,5 ml được phân phối trong các ống 16 x 125 mm có nắp vặn.

Nó được khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 10 phút. Để lấy mẫu, nên sử dụng tăm bông dacron nếu mẫu dùng cho PCR hoặc rayon nếu là mẫu nuôi cấy.

Các ống được bảo quản ở nhiệt độ phòng.

Các ứng dụng

Về mặt thương mại có các thiết bị vận chuyển mẫu đặc biệt gọi là máy cấy; Thiết bị này là một ống dài, mỏng, có một miếng gạc bên trong và ở cuối có một đoạn chứa môi trường Stuart bán rắn hoặc lỏng.

Thiết bị được mở và lấy mẫu bằng tăm bông. Sau đó, nó được đưa trở lại vào ống cho đến khi đầu tăm bông được đưa vào môi trường vận chuyển bán rắn; Một số mang theo miếng bọt biển polyurethane được ngâm tẩm với môi trường Stuart lỏng để bảo quản mẫu khi nó được giữ ướt.

Trong trường hợp nghi ngờ sự hiện diện của các vi sinh vật nhạy cảm, nên sử dụng tăm bông có tẩm than để lấy mẫu.

Các mẫu có thể được lấy bằng gạc hoặc tăm bông và chuyển trong môi trường này là dịch tiết hầu họng, gạc trực tràng và các chất tiết khác nhau, bao gồm: âm đạo, niệu đạo, vết thương, mắt, tai và áp xe.

Trong quá trình chuyển mẫu trong môi trường vận chuyển đến phòng thí nghiệm, phải tránh để môi trường ở điều kiện môi trường khắc nghiệt (quá lạnh hoặc quá nóng). Cũng nên tránh những thay đổi đột ngột về áp suất khí quyển.

Thời gian mà môi trường có khả năng giữ cho vi sinh vật sống sót sẽ phụ thuộc vào chủng được đề cập. Ví dụ, đối với vi sinh vật thuộc giống Neisserias và Haemophilus, chúng có thể tồn tại đến 24 giờ, nhưng các chủng như Salmonella hoặc Shigella có thể tồn tại trong nhiều ngày và thậm chí vài tuần.

Nếu người ta ước tính rằng quá trình xử lý mẫu có thể mất hơn 4 ngày, thì nên làm đông lạnh mẫu ở -70 ° C.

Nhận dạng mẫu trong phương tiện vận chuyển

Phương tiện vận chuyển đã chuẩn bị hoặc dụng cụ nuôi cấy thương mại phải có nhãn ghi các thông tin sau:

Họ và tên bệnh nhân: tránh nhầm lẫn mẫu.

Số báo danh: thuận tiện để giữ trật tự tại nơi làm việc.

Nguồn thu mẫu: giúp nhà vi khuẩn học lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp.

Bác sĩ tham dự: Đôi khi cần thiết để có thể tham khảo ý kiến.

Ngày và thời gian thu thập mẫu: cần thiết cho việc chấp nhận hoặc loại bỏ mẫu theo thời gian trôi qua giữa việc thu thập mẫu và tiếp nhận trong phòng thí nghiệm.

Thông tin khác sẽ rất hữu ích để đính kèm là:

Chẩn đoán xác định: hướng dẫn bổ sung môi trường nuôi cấy đặc biệt theo chẩn đoán nghi ngờ.

Điều trị bằng kháng sinh: rất hữu ích khi được phụ lục trong biểu đồ kháng sinh.

Tất cả thông tin này rất quan trọng để đảm bảo xử lý mẫu thích hợp.

QA

Để đánh giá hoạt động của môi trường Stuart, các chủng đã biết có thể được cấy và giữ ở 25 ° C, chẳng hạn như: Bordetella pertussis ATCC 9340, Haemophilus influenzae ATCC 19418, Neisseria gonorrhoeae ATCC 19424, Neisseria meningitidis ATCC 13090, Streptococcus pneumoniae ATCC 6301.

Trong mọi trường hợp, dự kiến sẽ thu hồi vi sinh vật được đề cập, bảo quản trong 24 giờ.

Mặt khác, có thể sử dụng các chủng khác như: Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Streptococcus pyogenes ATCC 12344, Enterococcus faecalis ATCC 33186, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 và Escherichia coli ATCC 11775.

Trong mọi trường hợp, khả năng phục hồi dồi dào dự kiến lên đến 96 giờ.

Hạn chế

Một số nghiên cứu đảm bảo rằng glycerophosphat có trong môi trường Stuart có thể được chuyển hóa bởi một số coliform, trong số các vi khuẩn Gram âm khác, và do đó nhân lên trong môi trường này.

Nguy cơ này càng tăng khi quá trình xử lý mẫu bị trì hoãn lâu hơn. Tương tự, sự tiếp xúc của môi trường Stuart với nhiệt độ cao trong quá trình vận chuyển ảnh hưởng đến điều này.

Người giới thiệu

"Phương tiện vận chuyển (vi sinh)." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 13 tháng 4 năm 2018, 10:36 giờ UTC. Ngày 1 tháng 4 năm 2019. Có sẵn tại: es.wikipedia.org
Phòng thí nghiệm Microkit: Truyền thông Văn hóa. Vận tải Stuart. Có tại: Có tại: Medioscultivo.com
LabLisan. Phương tiện di chuyển của Stuart. Có tại: lablinsan.cl
MDM khoa học. Những ưu điểm khi có giá thể vận chuyển vi sinh Stuart. Có tại: mdmcientifica.com
Phòng thí nghiệm Metrix. Stuart. 2017. Có sẵn tại: metrixlab.mx
Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

PHƯƠNG TIỆN STUART: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026