THẠCH SÔ CÔ LA: CƠ SỞ, CÔNG DỤNG VÀ CÁCH CHUẨN BỊ - SINH HỌC - 2026

Các thạch sô cô la là một môi trường nuôi cấy rắn, làm giàu, không - có chọn lọc và phi - khác biệt. Nó được sử dụng chủ yếu để phân lập các vi sinh vật đòi hỏi theo quan điểm dinh dưỡng, mặc dù bất kỳ loại vi khuẩn nào cũng có thể phát triển trong đó.

Vì lý do này, tính hữu dụng của nó tăng lên đặc biệt là trong việc cấy các mẫu thường vô trùng, chẳng hạn như dịch não tủy và dịch khớp. Mặc dù nó cũng được bao gồm trong các phương tiện được lựa chọn để gieo các mẫu vi sinh vật, nhưng trong những trường hợp này, cần bổ sung các loại kháng sinh có tác dụng ức chế hệ thực vật đồng thời.

Thạch sô cô la với sự phát triển của vi khuẩn

Môi trường này có màu nâu đặc trưng rất giống với sô cô la, do đó có tên như vậy. Việc chuẩn bị rất giống với thạch máu, chỉ trong trường hợp này, máu phải được làm nóng để các tế bào hồng cầu phân hủy.

Việc chuẩn bị nó, giống như thạch máu, rất tinh vi, vì nó dễ bị nhiễm bẩn. Vì lý do này, nhiều phòng thí nghiệm thích mua phương tiện này đã được chuẩn bị bởi các công ty thương mại đảm bảo chất lượng của nó.

Nền tảng

Môi trường này bao gồm một cơ sở thạch giàu chất dinh dưỡng và máu được làm nóng. Sự tan máu của các tế bào hồng cầu cung cấp yếu tố X (hemin) và yếu tố V (NAD), cần thiết cho sự phát triển của một số vi sinh vật, chẳng hạn như chi Haemophilus. Nó cũng rất hữu ích cho việc phân lập Neisserias sp.

Giống như thạch máu, các môi trường khác nhau có thể được sử dụng làm thạch gốc tùy theo nhu cầu. Trong số các môi trường được sử dụng là truyền tim não và thạch đậu nành trypticase, mặc dù được khuyến nghị nhiều nhất là thạch Columbia, Müeller Hinton, thạch GC và thạch Thayer Martin.

Một số biến thể của thạch sô cô la bao gồm một chất bổ sung tăng cường có sẵn trên thị trường được gọi là Isovitalex hoặc Polivitex.

Những chất bổ sung này chứa vitamin B ₁₂ , L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, axit p-aminobenzoic, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), thiamine pyrophosphate, nitrat sắt, thiamine hydrochloride, cysteine ​​hydrochloride, L-cystine và glucose.

Điều quan trọng cần lưu ý là thạch sô cô la được làm giàu hơn thạch máu, nhưng nó không cho phép quan sát các mô hình tan máu.

Các ứng dụng

Nguồn: pixnio.com. Tác giả:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Thạch sô cô la được chế biến với thạch Columbia

Môi trường này chứa dịch tiêu hóa casein và tim của tuyến tụy, dịch tiêu hóa qua đường tiêu hóa thịt, natri clorua, thạch, chiết xuất men và bột ngô. Nó cũng rất giàu vitamin, khoáng chất và các axit amin thiết yếu.

Cơ sở máu được làm nóng này rất lý tưởng để phân lập vi khuẩn thuộc giống Neisseria. Mặt khác, nếu bổ sung thêm Brucella vào môi trường, vi sinh vật được đề cập có thể được phân lập. Kết quả được cải thiện khi sử dụng máu ngựa.

Thạch sô cô la được chế biến với thạch gốc GC (cho gonococci)

Môi trường này chứa pepton, bột ngô, chất đệm một bazơ và bazơ, natri clorua và thạch.

Hầu hết các bài trình bày thạch sô cô la được chế biến thương mại đều đi kèm với nền này và không chứa máu đun nóng, mà là một hỗn hợp tổng hợp của hemin và chất bổ sung hóa học của các yếu tố tăng trưởng, vitamin, khoáng chất, axit amin, yếu tố V và glucose.

Thạch sô cô la được chế biến với thạch Müeller Hinton

Nó được sử dụng để kiểm tra tính kháng khuẩn của các vi sinh vật khó tính, chẳng hạn như Streptococcus pneumoniae bằng cách sử dụng 5% máu cừu đun nóng.

Nó cũng được sử dụng để phân lập chính Neisserias và Haemophilus, nhưng trong trường hợp cụ thể là phân lập Haemophilus, việc sử dụng máu ngựa được ưu tiên hơn, vì nó là một nguồn giàu yếu tố X và V.

Mặt khác, nếu mẫu được gieo đến từ một khu vực không được vô trùng, thì việc bổ sung kháng sinh được khuyến khích để ức chế hệ thực vật bình thường của khu vực đó.

Ví dụ đối với các mẫu hô hấp nghi ngờ sự hiện diện của vi khuẩn thuộc giống Haemophilus, bacitracin được sử dụng để ức chế sự phát triển của Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus và Neisserias hoại sinh.

Trong trường hợp lấy mẫu săng sinh dục, nơi nghi ngờ có Haemophilus ducreyi, thạch sô cô la được chuẩn bị như sau đã được sử dụng thành công: thạch Müeller - Hinton với 5% máu ngựa sô cô la hóa, 1% làm giàu Isovitalex và 3 µg / ml vancomycin.

Thạch sô cô la được chế biến với thạch Thayer Martin

Môi trường này đặc biệt để phân lập Neisseria gonorrhoeae. Nó phải chứa kháng sinh để ức chế hệ thực vật đi kèm. Máu cừu được sử dụng.

Sự chuẩn bị

Bạn nên xem chỉ dẫn chuẩn bị thạch gốc sẽ được sử dụng. Chúng được tìm thấy ở mặt sau của thùng chứa môi trường khử nước. Chúng thường mô tả bạn phải cân bao nhiêu để chuẩn bị một lít môi trường nuôi cấy.

Lượng chính xác cần thiết có thể được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm, nó có thể nhiều hơn hoặc ít hơn một lít.

Tính toán

Quy tắc ba được sử dụng để tính toán khối lượng cần cân để chuẩn bị khối lượng mong muốn. Thí dụ:

Nếu đối với 1 lít cần cân 40 gr và phòng thí nghiệm yêu cầu 800 ml thì người ta nói:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Công thức sẽ như sau:

X = 32 gr (lượng cần cân 800 ml).

Cân và hòa tan

Khối lượng cần thiết được cân và cho vào bình cùng với nước.

Đun ở nhiệt độ vừa phải và trộn nhẹ nhàng theo chuyển động quay cho đến khi môi trường khô nước hòa tan hoàn toàn, để sôi trong 1 phút.

Triệt sản

Bình được đặt vào nồi hấp để khử trùng môi trường ở 121 ° C trong 20 phút.

Tổng hợp máu

Khi ra khỏi nồi hấp phải để yên cho đến khi nhiệt độ của môi trường xấp xỉ từ 56 đến 70 ° C mới cho máu vào trộn đều cho đến khi môi trường chuyển sang màu nâu.

Nếu bạn đang bổ sung các chất bổ sung, đây là lúc để làm điều đó. Sau đó trộn và cho 20 ml vào mỗi đĩa Petri vô trùng.

Toàn bộ quy trình phải được thực hiện trong tủ hút phân tầng hoặc xung quanh đầu đốt Bunsen.

Để yên cho đến khi chúng đông lại và cất ngược lại trong tủ lạnh.

Một cách khác để chuẩn bị thạch sô cô la mà không cần dùng máu

Môi trường cơ sở được chuẩn bị như mô tả ở trên, haemoglobin khử nước thu được thương mại được hòa tan và khử trùng trong nồi hấp.

Cả hai dung dịch đều được để nguội đến 50 ° C, được nối và bổ sung. Trộn trong điều kiện vô trùng và sau đó cho vào đĩa Petri vô trùng.

QA

Điều quan trọng là máu phải được đặt ở nhiệt độ chỉ định, vì đây là nhiệt độ lý tưởng để làm đông lạnh các tế bào hồng cầu và đồng thời duy trì yếu tố V, vốn nhạy cảm với nhiệt.

Không được để lại bọt trên bề mặt thạch. Từ mỗi lô 100 đĩa, một hoặc hai đĩa phải được ủ trong tủ sấy ở 37 ° C trong 24 giờ để xác minh tính vô trùng của chúng.

Để có kết quả tốt nhất, thạch sô cô la nên được sử dụng ngay sau khi chuẩn bị.

Các chủng vi khuẩn đối chứng nên được giữ trong phòng thí nghiệm để đánh giá hiệu quả của môi trường tươi đối với sự phát triển của các vi sinh vật khó tính chính có tầm quan trọng lâm sàng.

Người giới thiệu

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Thực hành vi sinh lâm sàng. Đại học Cadiz, tái bản lần thứ 2. Dịch vụ xuất bản UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Xuất bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Tính khả thi khi sử dụng môi trường nuôi cấy cơ sở GC-Biocen Agar trong Phòng thí nghiệm vi sinh. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Có sẵn tại: scielo.sld.
5. Những người đóng góp Wikipedia. Thạch sô cô la. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 17 tháng 12 năm 2018, 19:54 giờ UTC. Có tại: en.wikipedia.org.