Các agar Biggy là một môi trường chọn lọc rắn và văn hóa khác biệt. Nó được thiết kế để cô lập và hỗ trợ xác định các loài Candida chính. Cái tên BIGGY của nó xuất phát từ từ viết tắt trong tiếng Anh Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Công thức ban đầu được tạo ra bởi Nickerson, đó là lý do tại sao môi trường này còn được gọi là Nickerson agar. Hiện tại nó bao gồm chiết xuất nấm men, glycine, dextrose, ammonium citrate, bismuth citrate, sodium sulphite và agar.
Biểu diễn đồ họa của thạch BIGGY. Nguồn: Flickr.com
Thạch BIGGY được pha chế để phân biệt các loài Phức hợp C. albicans, C. Tropicalis, C. krusei và C. kefyr, nhưng các loài khác cũng phát triển như Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum và Saccharomyces cerevisiae.
Nó có độ nhạy và độ đặc hiệu tốt, tuy nhiên, khi so sánh với các phương tiện khác có chức năng tương tự, nó đứng ở vị trí thứ hai, bị CHROMagar vượt qua. Vì lý do này, nhiều phòng thí nghiệm thích cái sau hơn, mặc dù nó đắt hơn nhiều.
Cần phải nói rõ rằng việc sử dụng thạch BIGGY, cũng như các phương tiện tương tự khác, giúp xác định giả định nhanh chóng, nhưng không bao giờ khẳng định được. Do đó, các phương pháp nhận dạng bổ sung phải có sẵn; ví dụ, hệ thống nhận dạng Vitek 32 và API 20.
Nền tảng
Thạch BiGGY được coi là môi trường chọn lọc một phần để phân lập các loại nấm men, đặc biệt là nấm Candida, mặc dù các chi khác có thể phát triển.
Nó cũng là một môi trường khác biệt bởi vì tùy thuộc vào loài liên quan, các đặc điểm khác nhau sẽ được quan sát về hình dáng, màu sắc, hình dạng và kích thước. Nó được coi là một môi trường sinh màu, do sự phát triển của các màu sắc khác nhau trong các khuẩn lạc.
Màu sắc của khuẩn lạc nấm men là do sự hiện diện của bismuth sulfit trong thạch. Nickerson nhận ra rằng nấm men thuộc giống Candida thực hiện quá trình khử bismuth sulfit ngoại bào, biến nó thành bismuth sulfit (một chất màu đen không hòa tan). Điều này dẫn đến các khuẩn lạc màu nâu nhạt đến đen.
Loại thạch này chứa chiết xuất men và dextrose, cung cấp nguồn dinh dưỡng cơ bản và năng lượng cho sự phát triển của nấm men. Glycine là một chất kích thích tăng trưởng nấm men, trong khi nó ức chế sự phát triển của một số vi khuẩn.
Theo ý nghĩa này, amoni và bismuth xitrat, cũng như natri sulfit hoạt động như chất ức chế sự phát triển của vi khuẩn. Agar là tác nhân tạo độ đặc vừa phải.
Sự chuẩn bị
Cân 45 g môi trường nuôi cấy đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Lắc và đun hỗn hợp, đun sôi trong 1 phút cho đến khi hòa tan hoàn toàn. Môi trường nuôi cấy này không tiệt trùng được.
Sau khi làm nguội đến khoảng 45 ° C trong nồi cách thủy, đổ 20 ml lên đĩa Petri vô trùng.
Màu của môi trường khử nước là xám vàng và tạo thành gel trắng vàng, có thể quan sát thấy kết tủa keo tụ nhẹ.
Độ pH phải là 6,8 ± 0,2.
Môi trường đã chuẩn bị cần được bảo quản trong tủ lạnh (4 ° C) và tránh ánh sáng. Vì đây là môi trường không thể hấp tiệt trùng nên cần sử dụng càng sớm càng tốt. Việc sử dụng nó được khuyến khích trước 3 ngày sau khi chuẩn bị.
Sử dụng
Các đĩa được ủ ở nhiệt độ phòng (25 ° C) trong 24, 48 và 72 giờ, thời gian ủ có thể kéo dài đến 5 ngày.
Mỗi loài Candida phát triển một số đặc điểm nhất định khiến chúng có thể phân biệt được loài này với loài khác. Các nhà sản xuất môi trường mô tả các đặc điểm sau cho từng loài:
-Candida albicans complex: phát triển trên thạch này dưới dạng khuẩn lạc nhẵn, tròn, màu nâu hoặc đen, có viền sợi nhỏ. Ngoại trừ màu tối không khuếch tán đến giữa.
-Candida Tropicalis: khuẩn lạc màu nâu sẫm, nhỏ, sáng với tâm màu đen và viền sợi nấm nhẹ. Màu sẫm khuếch tán về phía giữa, một đặc điểm đặc trưng của loài này, sau khi được ủ trong 72 giờ.
-Candida krusei phát triển các khuẩn lạc lớn, phẳng, trông thô với đường viền màu nâu đến hơi đen.
-Candida parakrusei: khuẩn lạc có kích thước trung bình, phần lớn thời gian thô, phẳng. Màu sắc có thể thay đổi từ nâu đỏ đậm tươi đến nâu đỏ nhạt. Biên giới của các khuẩn lạc có các sợi nấm màu vàng, rộng.
-Candida stellatoidea: phát triển các khuẩn lạc trung bình, phẳng, màu nâu sẫm, gần như đen. Phát triển sợi nấm rất khan hiếm.
Một nghiên cứu được thực hiện bởi Yücesoy và Marol vào năm 2003, cho thấy môi trường CHROMagar có độ nhạy và độ đặc hiệu tốt hơn để phân biệt và xác định các loài Candida khác nhau so với thạch BIGGY.
QA
Để kiểm soát độ vô trùng, các đĩa chưa cấy được ủ ở 25 ° C, trong bóng tối từ 24 đến 48 giờ, dự kiến sẽ không có bất kỳ loại nào phát triển hoặc thay đổi màu sắc.
Các chủng ATCC được khuyến nghị để kiểm soát chất lượng môi trường là:
Phức hợp Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Ở tất cả chúng, sự phát triển dự kiến như mô tả ở trên.
Các chủng sau cũng có thể được sử dụng:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 và Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Trong hai lần đầu tiên, dự kiến sẽ ức chế toàn bộ, nhưng trong trường hợp phát triển một phần, các khuẩn lạc sẽ có màu kem.
Trong trường hợp S. aureus, nó được cho là sẽ bị ức chế hoàn toàn, nhưng nếu nó phát triển một phần, các khuẩn lạc của nó có màu trắng.
Hạn chế
Một số vi khuẩn có khả năng phát triển trong môi trường này và thậm chí có thể chuyển sang màu sẫm, mô phỏng khuẩn lạc Candida, nhưng khi bôi khuẩn lạc và quan sát dưới kính hiển vi, chúng dễ dàng bị loại bỏ.
Bảng: Đặc điểm khuẩn lạc của một số nấm men trên thạch BIGGY theo công trình của Yücesoy M và Marol S.
Nguồn: Yücesoy M, Marol S. Hiệu suất của CHROMAGAR candida và thạch BIGGY để xác định các loài nấm men. Ann Clin Microbiol Kháng khuẩn. Năm 2003; 2 (8): 1-7
Người giới thiệu
- Yücesoy M, Marol S. Hiệu suất của CHROMAGAR candida và thạch BIGGY để xác định các loài nấm men. Ann Clin Microbiol Kháng khuẩn. Năm 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Bảng thông số kỹ thuật BIGGY Agar. Có tại: mcdlab.net/
- Phòng thí nghiệm Neogen. BIGGY Agar. Có tại: Foodsafety.neogen.com
- Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. BIGGY agar. Có tại: condalab.com
- Phòng thí nghiệm BD. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Agar). 2011. Có sẵn tại: bd.com