THẠCH ESCULIN MẬT: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CÁCH BÀO CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các mật esculin agar là một chọn lọc và văn hóa rắn vừa khác biệt. Nó được sử dụng như một xét nghiệm chẩn đoán để xác định khả năng phát triển của một vi sinh vật nhất định trong môi trường có chứa mật và cũng phân hủy glucoside esculin thành esculetin và glucose.

Xét nghiệm chẩn đoán này được sử dụng để phân biệt các loài thuộc giống Streptococcus thuộc nhóm D (esculin mật dương tính), với các nhóm Streptococcus khác phản ứng tiêu cực với xét nghiệm này.

Đĩa thạch esculin mật, được cấy chủng Enterococcus (thử nghiệm dương tính). Nguồn: Không cung cấp tác giả có thể đọc bằng máy. Philippinjl giả định (dựa trên yêu cầu bản quyền).

Cần lưu ý rằng một số Streptococci thuộc nhóm viridans có thể thủy phân esculin, nhưng chúng không có khả năng phát triển khi có mật ở nồng độ 40%, do đó, trong môi trường này, phản ứng đối với nhóm này là âm tính.

Mặt khác, môi trường esculin mật cũng rất hữu ích để chẩn đoán vi khuẩn Listeria monocytogenes hoặc các loài Aerococcus sp, vì các vi sinh vật này dương tính với esculin mật.

Esculin Bile Agar bao gồm peptone, chiết xuất từ ​​thịt, mật bò, esculin, sắt citrate, thạch và nước cất. Một số nhà thương mại bao gồm natri azit trong thành phần của môi trường.

Môi trường có thể được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm nếu bạn có tất cả các hợp chất riêng biệt hoặc nó có thể được chuẩn bị từ môi trường khử nước thương mại.

Nền tảng

Môi trường esculin mật chứa pepton và dịch chiết thịt, cả hai hợp chất này đều cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của vi sinh vật.

Nó cũng chứa esculin; Hợp chất này là một glycoside được hình thành bởi sự liên kết của một monosaccharide đơn giản (glucose) với một hợp chất gọi là 6,7-dihydroxycoumarin hoặc esculetin (aglucone), được liên kết bởi một liên kết acetal hoặc glucosidic.

Thử nghiệm dựa trên việc cho biết vi khuẩn có khả năng thủy phân esculin hay không. Nếu điều này xảy ra, esculin bị phân hủy thành esculetin và glucose. Esculetina phản ứng với sắt có trong môi trường, tạo thành hợp chất màu nâu sẫm, gần như màu đen.

Điều này có nghĩa là citrate sắt hoạt động như một chất phát triển phản ứng. Đặc điểm này làm cho Bile Esculin Agar trở thành một môi trường vi phân.

Về phần mình, mật là chất ức chế ngăn cản sự phát triển của một số vi sinh vật, do đó, vi khuẩn này trước khi tách esculin phải có khả năng phát triển khi có mật. Do đó, phương tiện này được coi là chọn lọc.

Những vi khuẩn có thể phát triển trong môi trường này chủ yếu là những vi khuẩn sống trong môi trường ruột.

Theo nghĩa này, một số công ty thương mại thêm natri azit vào môi trường để tiếp tục ức chế sự phát triển của trực khuẩn Gram âm trong ruột, tăng tính chọn lọc của môi trường đối với sự phát triển của Streptococcus.

Cuối cùng, thạch tạo độ đặc cho môi trường và nước là dung môi của các hợp chất.

Sự chuẩn bị

Tự chế tạo thạch esculin mật

Cân:

5 g pepton

3 g chiết xuất từ ​​thịt

40 g mật bò

1 g esculin

0,5 g xitrat sắt

15 g thạch

1000 ml nước cất

Trong trường hợp thêm natri azit, 0,25 g / lít được cân và thêm vào hỗn hợp.

Hòa tan các thành phần trong lít nước cất, đun nóng cho đến khi các hợp chất tan hết. Phân phối 5 ml vào các ống nghiệm có nắp vặn 16 x 125 mm. Hấp tiệt trùng ở 121 ° C, áp suất 15 pound trong 15 phút.

Lấy ra khỏi nồi hấp và đặt nghiêng các ống trên giá đỡ sao cho thạch đông đặc lại trong một cái mỏ rộng.

Bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Để nhiệt độ phòng trước khi gieo.

Cũng có thể chuẩn bị đĩa thạch esculin mật; trong trường hợp này, toàn bộ hỗn hợp được hấp tiệt trùng trong bình cầu và sau đó được phân phối trong các đĩa Petri vô trùng. Để chúng đông lại và cất vào tủ lạnh.

PH của môi trường phải là 6,6 ± 0,2.

Chuẩn bị thạch esculin mật từ môi trường thương mại

Cân lượng được chỉ định bởi phụ trang. Điều này có thể khác nhau giữa các nhà kinh doanh khác. Sau đó, tiến hành tương tự như quy trình đã giải thích ở trên.

Độ pH của môi trường phải là 6,6 ± 0,2. Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và môi trường chuẩn bị có màu hổ phách sẫm.

Môi trường esculin mật thương mại. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Các ứng dụng

Môi trường esculin mật được sử dụng chủ yếu để phân biệt Streptococcus nhóm D (mật esculin dương tính), với các nhóm Streptococcus còn lại (esculin mật âm tính).

Kết hợp thử nghiệm tăng trưởng nước dùng siêu mặn với thử nghiệm esculin mật có thể xác định một nhóm đặc biệt của Streptococcus Nhóm D được gọi là Enterococcus.

Nhóm Streptococcus đặc biệt này thuộc nhóm D của chi đã nói ở trên và chúng có khả năng thủy phân esculin khi có mật như các thành viên còn lại của nhóm D, nhưng chúng cũng có khả năng phát triển trong môi trường siêu mặn (BHI với clorua của 6,5% natri), một đặc tính tạo nên sự khác biệt.

Vì vậy, những cầu khuẩn thủy phân dịch mật esculin nhưng không phát triển trong môi trường quá mặn được gọi là Liên cầu khuẩn không ruột nhóm D.

Gieo

Cấy môi trường tốt nhất là từ môi trường Todd-Hewitt tinh khiết 24 giờ.

Dùng pipet Pasteur nhỏ 2 giọt lên bề mặt môi trường và phết vào môi trường bằng vòng platin.

Ủ ở 35 ° C trong 48 giờ, còn thời gian ủ đạt yêu cầu thì có thể theo dõi xem có phản ứng dương tính hay không. Nếu hết thời gian mà phản ứng vẫn âm tính thì có thể ủ đến 72 giờ.

Diễn dịch

Phản ứng dương tính : xuất hiện màu nâu sẫm, gần như đen ở mỏ sáo (trong trường hợp ống nghiệm) hoặc màu đen của thạch xung quanh khuẩn lạc (trong trường hợp thử đĩa).

Phản ứng âm tính : không xảy ra hiện tượng hóa đen môi trường hoặc xuất hiện màu đen ở dưới nửa ống sau 72 giờ ủ. Mặt khác, sự phát triển của vi khuẩn trong môi trường không có sự xuất hiện của màu đen nên được coi là một phép thử âm tính.

QA

Để đánh giá chất lượng của môi trường, phải có chủng Enterococcus faecalis ATCC 29212 làm đối chứng dương tính và chủng Streptococcus không thuộc nhóm D là đối chứng âm tính.

Hạn chế

- Thuốc không chứa natri azit cho phép sự phát triển của trực khuẩn Gram âm trong ruột. Một số trong số chúng có thể làm đen phần giữa.

- Một số nhà thương mại cho thêm mật có nồng độ thấp (10%) và vì lý do này một số Streptococcus không thuộc nhóm D có thể phát triển trong môi trường và thủy phân esculin, điều này có thể tạo ra sai sót trong việc giải thích.

Người giới thiệu

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Ấn bản thứ 3. Biên tập Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Phòng thí nghiệm Britannia. Esculin mật với thạch azide. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
5. "Mật Esculin Agar." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 22 tháng 8 năm 2017, 17:30 giờ UTC. 22 tháng 4 năm 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Phương pháp nghiêng Agar Esculin. 2015. Có sẵn tại: bd.com
7. Phòng thí nghiệm Neogen. Thạch esculin mật. Có tại: Foodsafety.neogen.com