Các agar Hektoen hoặc Hektoen ruột agar môi trường rắn là một chọn lọc và văn hóa khác biệt. Nó được tạo ra tại Viện Hektoen bởi King và Metzger để phân lập vi khuẩn gây bệnh đường ruột thuộc các giống Shigella và Salmonella.
Môi trường bao gồm proteose peptone, chiết xuất nấm men, muối mật, lactose, sucrose, salicin, natri thiosulfat, natri clorua, sắt citrat, amoni xitrat, xanh bromothymol, axit fuchsin và thạch. Công thức này giúp phân biệt các chi Shigella và Salmonella với các vi khuẩn còn lại có khả năng phát triển trong môi trường này.
A. Thạch Hektoen nguyên chất B. Thạch Hektoen hạt. Nguồn: Flickr.com/ Người tải lên ban đầu là Philippinjl tại Wikipedia tiếng Pháp.
Mặc dù có những môi trường khác có chức năng tương tự như thạch Hektoen nhưng nó có ưu điểm hơn hẳn so với các môi trường khác, đặc biệt khi bạn muốn phục hồi các loài Shigella.
Các loài của cả hai giới đều gây ra các vấn đề nghiêm trọng về đường tiêu hóa ở người do tiêu thụ thực phẩm bị ô nhiễm; do đó lây truyền là đường phân - miệng. Đó là lý do tại sao việc sử dụng thạch Hektoen chủ yếu được chỉ định trong phân tích vi sinh vật trong phân và mẫu thực phẩm.
Nền tảng
Hektoen Agar chứa pepton và chiết xuất nấm men là nguồn dinh dưỡng, cung cấp các yếu tố cần thiết cho sự phát triển của vi sinh vật.
Tuy nhiên, nó cũng có muối mật hoạt động bằng cách ức chế sự phát triển của một số vi khuẩn, đặc biệt là Gram dương và một số Gram âm. Đó là vì lý do này mà nó được coi là một phương tiện chọn lọc.
Mặt khác, thạch Hektoen là một môi trường vi phân. Tính chất này được tạo ra bởi sự hiện diện của các carbohydrate có thể lên men như lactose, sucrose và salicin, cùng với hệ thống chỉ thị pH, được thể hiện bằng màu xanh bromothymol và axit fuchsin.
Tất cả các vi khuẩn có khả năng phát triển trên môi trường này không thuộc giống Salmonella và Shigella sẽ phát triển các khuẩn lạc cá hồi hoặc cam, ngoại trừ chi Proteus. Điều này là do sự lên men của một hoặc nhiều cacbohydrat hiện diện, làm axit hóa môi trường, làm cho chỉ thị pH biến đổi.
Về phần mình, chi Shigella và Salmonella không có khả năng lên men bất kỳ loại carbohydrate nào hiện diện, chỉ sử dụng pepton làm nguồn năng lượng, làm kiềm hóa môi trường và do đó khuẩn lạc của chúng có màu xanh lam.
Các vi khuẩn có khả năng tạo thành hydro sulfua (khí không màu) cũng có thể được phân biệt trong môi trường này. Natri thiosulfat đóng vai trò là nguồn cung cấp lưu huỳnh trong khi sắt citrat là chất phát triển. Cả hai hợp chất đều có thể tạo ra kết tủa sắt sunfua màu đen cho thấy phản ứng.
Kết tủa màu đen ở trung tâm của khuẩn lạc với một vầng hào quang trong suốt xung quanh tạo ra hình dạng mắt cá. Đặc điểm này cho thấy sự hiện diện của chi Salmonella.
Cuối cùng, natri clorua duy trì cân bằng thẩm thấu và thạch tạo độ đặc cho môi trường.
Sự chuẩn bị
Cân 76 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Lắc mạnh hỗn hợp và sau đó để yên trong 10 đến 15 phút. Nó có thể được làm nóng và đun sôi, tạo ra các chuyển động luân phiên cho đến khi nó được hòa tan hoàn toàn. Môi trường này không được hấp tiệt trùng.
Khi môi trường đạt đến nhiệt độ khoảng 45 ° C, một thể tích 20 ml được rót trực tiếp vào đĩa Petri vô trùng.
Để cho thạch đông đặc. Lúc đó chúng đã sẵn sàng để sử dụng. Nó được khuyến khích để sử dụng chúng ngay lập tức. Nếu không được, chúng được giữ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.
Nên lấy đĩa ra khỏi tủ lạnh trước khi gieo hạt để đem về nhiệt độ phòng.
Độ pH của môi trường phải là 7,5 ± 0,2. Màu của môi trường khử nước là màu tím và môi trường chuẩn bị có màu xanh nâu.
Sử dụng
Nên sử dụng thạch Hektoen để tìm kiếm vi khuẩn thuộc giống Shigella và Salmonella trong phân và mẫu thực phẩm.
Khả năng phân lập các vi khuẩn này tăng lên đáng kể nếu trước đó mẫu được làm giàu trong các loại nước dùng đặc biệt, chẳng hạn như nước dùng selen, nước dùng cystine selen, nước dùng tetrathionat, v.v.
Chất cấy phải chắc và việc gieo hạt được thực hiện bằng cách khoanh. Các đĩa được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong môi trường hiếu khí.
Nên ủ trong 48 giờ vì các đặc điểm của khuẩn lạc rõ ràng hơn để giải thích và phân biệt chúng tại thời điểm này.
QA
Để thực hiện kiểm tra chất lượng trên môi trường này, các chủng vi khuẩn đã được chứng nhận được sử dụng, chẳng hạn như: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 và Shigella sonnei ATCC 25931.
Kết quả mong đợi như sau: Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis nên phát triển các khuẩn lạc xanh lam có hoặc không có tâm màu đen. Trong khi các loài Shigella sẽ phát triển thành các khuẩn lạc màu xanh lam.
Cũng có thể bao gồm các chủng Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 và Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Trong những trường hợp này, các đặc điểm quan sát được như sau: E. coli và K. pneumoniae sẽ phát triển các khuẩn lạc màu da cam cá hồi trong môi trường này, với kết tủa cùng màu xung quanh chúng. Trong khi đó, Proteus sẽ phát triển các khuẩn lạc xanh lam có hoặc không có trung tâm màu đen.
Trong khi S. aureus và E. faecalis phải bị ức chế, E. faecalis đôi khi phát triển thành các khuẩn lạc rất nhỏ, màu vàng.
Mặt khác, do môi trường này không được hấp tiệt trùng nên việc đánh giá độ vô trùng của môi trường là rất quan trọng. Do đó, từ mỗi mẻ được chuẩn bị, một đến hai đĩa chưa cấy phải được ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong môi trường hiếu khí.
Rõ ràng là không có bất kỳ loại tăng trưởng nào được mong đợi trên đĩa.
Hạn chế
-Các loài Proteus có thể phát triển trong môi trường này và các đặc điểm của khuẩn lạc của chúng có thể bị nhầm lẫn với các loài Salmonella hoặc Shigella. Vì lý do này, bất kỳ khuẩn lạc nào đáng ngờ phải được xác nhận bằng các xét nghiệm sinh hóa.
- Cần phải đi kèm với việc sử dụng môi trường này với các loại thạch khác kém chọn lọc hơn, vì nếu vi sinh vật được tìm kiếm ở nồng độ thấp, nó có thể không phát triển trong môi trường này.
-Không đun quá nóng trong khi chuẩn bị, vì nhiệt quá cao sẽ làm thay đổi thành phần của môi trường.
- Thông thường, các khuẩn lạc Salmonella lên men lactose có thể xuất hiện mà có thể không được chú ý.
Người giới thiệu
- Những người đóng góp Wikipedia. Thạch đường ruột Hektoen. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 13 tháng 3 năm 2019, 23:38 giờ UTC. Có tại: .wikipedia.org / Truy cập ngày 16 tháng 3 năm 2019.
- Phòng thí nghiệm BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Có sẵn tại: bd.com
- Phòng thí nghiệm Britannia. Hektoen Enteric Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
- Phòng thí nghiệm Difco Francisco Soria Melguizo. Thạch Hektoen. Có sẵn tại: f-soria.es
- Hướng dẫn sử dụng Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. Ấn bản lần 2. Có sẵn trong: bd.com/europe