Các agar mannitol muối hoặc muối manitol là một môi trường chọn lọc rắn và văn hóa khác biệt. Nó được tạo ra bởi Chapman để phân lập các cầu khuẩn Gram dương gây bệnh, đặc biệt là Staphylococcus aureus.
Tuy nhiên, nó cũng hữu ích để phân lập Staphylococus epidermidis, đôi khi có thể hiện diện như một mầm bệnh cơ hội và Staphylococcus saprophyticus, một tác nhân gây bệnh đường tiết niệu đã được công nhận, trong số các loài khác.
A. Fiola với môi trường thạch mannitol mặn đã chuẩn bị. B. Đĩa thạch mannitol muối được cấy các dòng vi khuẩn mannitol lên men và không lên men. Nguồn: A và B: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.
Một số Enterococcus có khả năng phát triển trên môi trường này, cũng như một số que tạo bào tử Gram dương.
Môi trường này rất hữu ích trong việc phân tích các mẫu lâm sàng, nhưng nó cũng được sử dụng trong nghiên cứu vi sinh vật trong thực phẩm và trong việc kiểm tra chất lượng các sản phẩm công nghiệp, chẳng hạn như mỹ phẩm, thuốc men, v.v.
Salty Mannitol Agar bao gồm chiết xuất và pepton từ thịt bò, triptein, mannitol, natri clorua, đỏ phenol và thạch.
Nền tảng
Thạch mannitol có tính chọn lọc nhờ nồng độ muối cao. Độ mặn hoạt động như một chất ức chế và ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn Gram âm.
Nó cũng khác biệt do sự hiện diện của mannitol carbohydrate và chỉ thị pH màu đỏ phenol. Từ đó vi khuẩn có khả năng lên men mannitol tạo ra axit, làm axit hóa môi trường, làm cho khuẩn lạc và môi trường có màu vàng.
Mặt khác, các khuẩn lạc không lên men mannitol phát triển trong môi trường lấy các chất dinh dưỡng được cung cấp bởi chất chiết xuất và pepton của thịt và triptein. Từ đó vi khuẩn chiết xuất cacbon, nitơ, vitamin và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của chúng.
Các khuẩn lạc trong trường hợp này có thể có màu hồng yếu hoặc mạnh, và môi trường vẫn giữ nguyên màu hoặc chuyển sang màu hoa vân anh.
Agar là chất cung cấp độ đặc cho môi trường.
Sự chuẩn bị
Để chuẩn bị một lít thạch mannitol mặn, 111 g môi trường khử nước từ công ty thương mại ưu tiên được cân và hòa tan trong 1000 ml nước cất, sử dụng một bình cầu.
Nhiệt được áp dụng cùng với việc khuấy thường xuyên môi trường để cải thiện quá trình hòa tan. Đun sôi trong một phút.
Đặt bình vào nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.
Khi kết thúc thời gian, lấy bình ra khỏi nồi hấp, để bình nghỉ ngơi và phục vụ từ 15 đến 20 ml trên đĩa Petri vô trùng khi nhiệt độ xấp xỉ 50 đến 55 ° C.
Nó được phép đông đặc, sắp xếp theo cách đảo ngược trong mảng bám và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Trước khi gieo mẫu, hãy đợi đĩa đạt nhiệt độ phòng.
Các đĩa được tạo hạt bằng cách tạo vệt hoặc bằng cách gieo hạt trên bề mặt bằng thìa khoan drigalski. PH cuối cùng của môi trường đã chuẩn bị phải là 7,4 ± 0,2
Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và màu của môi trường đã chuẩn bị là màu đỏ cam.
Các ứng dụng
Do tính chọn lọc cao, môi trường này lý tưởng để gieo các mẫu có hệ thực vật hỗn hợp trong đó tìm kiếm sự hiện diện của Staphylococus aureus, là mầm bệnh chính của chi này.
Theo nghĩa này, một trong những ứng dụng thường xuyên nhất của nó là trong phân tích vi sinh vật dịch tiết hầu họng và mẫu nước mũi, đặc biệt để phát hiện những người mang S. aureus không có triệu chứng.
Một số quốc gia đã thực hiện phân tích này như một yêu cầu bắt buộc đối với những người muốn làm công việc cung cấp thực phẩm.
Việc kiểm soát này ngăn chặn sự lây nhiễm của những người mang vi khuẩn S. aureus, do đó tránh được ngộ độc thực phẩm lớn do tiêu thụ thực phẩm bị nhiễm độc tố ruột của tụ cầu.
Nó cũng có thể được bao gồm trong việc gieo mầm vết thương nhiễm trùng, cấy máu, dịch não tủy, rửa phế quản phế nang, trong số những người khác.
Thạch mannitol muối rất hữu ích để phân lập lại các khuẩn lạc từ môi trường nuôi cấy nước tiểu từ thạch CLED hoặc thạch máu mà Gram đã bộc lộ các cầu khuẩn Gram dương thành từng đám.
Nó cũng có giá trị trong phân tích vi sinh vật trong thực phẩm, nước uống, đất, trong số các ứng dụng khác.
QA
Sau khi đã chuẩn bị xong một mẻ đĩa có thạch mannitol mặn, nên thực hiện kiểm tra chất lượng. Các chủng đối chứng được gieo để xem có tăng trưởng hay không.
Các chủng Staphylococcus aureus đã biết có thể được sử dụng như một biện pháp kiểm soát tích cực. Nó sẽ phát triển các khuẩn lạc màu vàng phát triển tốt và môi trường cũng chuyển sang màu tương tự.
Tương tự như vậy, rất tiện lợi khi bao gồm một chủng Staphylococcus epidermidis đã biết. Nó sẽ phát triển các khuẩn lạc màu hồng phát triển hài lòng và môi trường vẫn giữ nguyên màu hoặc sẫm lại thành màu hồng đậm hơn.
Là một đối chứng âm tính, các chủng được sử dụng không được phát triển trên môi trường này. Ví dụ, một dòng Escherichia coli hoặc Klebsiella pneumoniae đã biết có thể được nuôi cấy. Kết quả mong đợi là sự ức chế hoàn toàn, tức là không tăng trưởng.
Ngoài ra, một đĩa chưa được cấy phải được ủ. Trong đó không được tăng trưởng hoặc thay đổi màu sắc.
Điều quan trọng là không được sử dụng đĩa nếu có dấu hiệu hư hỏng, chẳng hạn như nhiễm bẩn, mất nước, đổi màu, trong số những dấu hiệu khác.
Suy nghĩ cuối cùng
Khi sử dụng môi trường thạch mannitol mặn, có một số khía cạnh quan trọng cần xem xét:
- Lấy khuẩn lạc màu vàng phát triển không chứng tỏ đó là tụ cầu vàng. Cần nhớ rằng một số chủng Enterococcus có khả năng phát triển trong môi trường này và lên men mannitol, cũng như một số thanh Gram dương hình thành bào tử.
Do đó, điều quan trọng là phải thực hiện Gram trên khuẩn lạc và xét nghiệm catalase.
- Mặt khác, cần phải xem xét rằng các loài Staphylococcus khác ngoài aureus cũng có khả năng lên men mannitol. Do đó, điều quan trọng là phải cấy khuẩn lạc vào môi trường dinh dưỡng để lấy từ đó và thực hiện thử nghiệm coagulase.
Trong số các loài Staphylococcus có tầm quan trọng lâm sàng đối với con người mà lên men mannitol là: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, trong số những loài khác.
Những người khác có thể đưa ra một phản ứng khác nhau, có nghĩa là, đôi khi tích cực và đôi khi tiêu cực. Một số là S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. trung gian, trong số những loài khác.
-Không nên lấy khuẩn lạc trực tiếp từ thạch mannitol để thực hiện phép thử coagulase, vì nồng độ muối cao trong môi trường có thể ảnh hưởng đến kết quả.
-Cuối cùng, nên ủ các đĩa được gieo bằng mannitol mặn trong tối đa 48 giờ, vì một số chủng S. aureus có thể lên men mannitol chậm, mặc dù điều này không thường xuyên.
Người giới thiệu
- Phòng thí nghiệm Britannia. Thạch mannitol mặn. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
- "Thạch mặn mannitol". Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 31 tháng 10 năm 2018, 19:08 giờ UTC. Ngày 17 tháng 1 năm 2019, 20:55, có tại: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Xuất bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
- Phòng thí nghiệm BD. BD Agar Muối Mannitol. 2013. Có sẵn tại: bd.com.