THẠCH MÁU: CƠ SỞ LÝ LUẬN, SỬ DỤNG VÀ ĐIỀU CHẾ - SINH HỌC - 2026

Các thạch máu là một môi trường nuôi cấy rắn làm giàu khác biệt nhưng không chuyên biệt. Nó được sử dụng để phục hồi và phát triển nhiều loại vi sinh vật từ các mẫu lâm sàng hoặc cho các mẫu cấy.

Thạch máu cổ điển nên được bao gồm để cấy hầu hết các mẫu lâm sàng nhận được trong phòng thí nghiệm; ngoại trừ các mẫu phân không hữu ích, trừ khi được chuẩn bị với các sửa đổi nhất định.

Đĩa thạch máu

Môi trường nuôi cấy này về cơ bản bao gồm thạch nền đã được làm giàu và 5% máu. Cơ sở thạch có thể thay đổi tùy theo nhu cầu, nhưng chủ yếu sẽ bao gồm pepton, axit amin, vitamin, chiết xuất từ ​​thịt, natri clorua, thạch, trong số những loại khác.

Đối với máu, thông thường bắt buộc phải tiếp xúc với vivarium để lấy máu từ động vật, chẳng hạn như cừu, thỏ hoặc ngựa. Tuy nhiên, điều này không phải lúc nào cũng có thể thực hiện được và máu người đôi khi được sử dụng.

Môi trường thạch máu có thể được chuẩn bị trong phòng thí nghiệm hoặc có thể mua sẵn từ các công ty chuyên dụng. Việc chuẩn bị môi trường này là một trong những công đoạn tinh tế nhất, bất kỳ sự bất cẩn nào trong quá trình chuẩn bị sẽ dẫn đến một mẻ bị nhiễm bẩn.

Đó là lý do tại sao tất cả các biện pháp phòng ngừa có thể phải được thực hiện và cuối cùng phải kiểm tra chất lượng bằng cách ủ ở 37 ° C 1 đĩa cho mỗi 100 đĩa được chuẩn bị.

Nền tảng

Staphylococcus aureus nuôi cấy trên thạch máu. Nathan Reading trên Flickr Nathan R. trên Twitter, qua Wikimedia Commons Người ta đã đề cập rằng thạch máu có đặc tính là môi trường làm giàu, khác biệt và không chọn lọc. Cơ sở cho mỗi thuộc tính này được giải thích dưới đây.

Thạch máu là một môi trường được làm giàu vì nó chứa 5-10% máu trên nền thạch làm phụ gia chính của nó. Cả hai hợp chất đều chứa nhiều chất dinh dưỡng và đặc tính này cho phép hầu hết các vi khuẩn có thể nuôi cấy được phát triển trong đó.

Sự tăng trưởng đó diễn ra không hạn chế; vì lý do này nó là không chọn lọc. Tuy nhiên, nếu các hợp chất được thêm vào môi trường này để ngăn chặn sự phát triển của một số vi sinh vật và có lợi cho những vi sinh vật khác, nó sẽ trở nên chọn lọc. Đây là trường hợp nếu một số loại kháng sinh hoặc thuốc chống nấm được thêm vào.

Tương tự như vậy, thạch máu là một môi trường phân biệt, vì nó cho phép chúng ta phân biệt 3 loại vi khuẩn: beta-tan huyết, alpha-hemolytic và gamma-hemolytic.

Beta-hemolytics là những chất có khả năng ly giải hoàn toàn hoặc phá vỡ các tế bào hồng cầu, tạo thành một quầng rõ ràng xung quanh các khuẩn lạc, do đó chúng tạo ra ß hoặc ß-ly giải và các vi sinh vật được gọi là ß-hemolytic.

Ví dụ về vi khuẩn tan máu ß là Streptococcus pyogenes và Streptococcus agalactiae.

Alpha-hemolytics là những chất thực hiện quá trình tán huyết một phần, trong đó hemoglobin bị oxy hóa thành methemoglobin, tạo ra màu xanh lục xung quanh các khuẩn lạc. Hiện tượng này được gọi là α hoặc α -hemolysis và vi khuẩn được phân loại là α-hemolytic.

Ví dụ về vi khuẩn tan máu α là Streptococcus pneumoniae và Streptococcus thuộc nhóm viridans.

Cuối cùng, có những vi khuẩn được gọi là vi khuẩn tan máu gamma hoặc không tan máu. Những chất này phát triển trên thạch mà không tạo ra những thay đổi trên nó, một hiệu ứng được gọi là quá trình nhiệt phân, và các vi sinh vật bị nhiệt phân.

Ví dụ về vi khuẩn tan máu: một số chủng Streptococcus nhóm D (Streptococcus bovis và Enterococcus faecalis).

Các ứng dụng

Môi trường nuôi cấy thạch máu là một trong những môi trường được sử dụng phổ biến nhất trong phòng thí nghiệm vi sinh.

Trong số các vi sinh vật có khả năng phát triển trong môi trường thạch máu là: vi khuẩn hiếu khí nghiêm ngặt, hiếu khí, kỵ khí, vi khuẩn Gram dương hoặc Gram âm, vi khuẩn sinh trưởng nhanh hoặc chậm.

Một số vi khuẩn đòi hỏi dinh dưỡng hoặc khó tính cũng phát triển, cũng như nấm và men. Tương tự như vậy, nó rất hữu ích cho việc nuôi cấy phụ hoặc kích hoạt lại các chủng chuyển hóa rất yếu.

Tuy nhiên, việc lựa chọn nhóm máu và thạch gốc sẽ khác nhau tùy thuộc vào vi sinh vật có khả năng phục hồi và mục đích sử dụng đĩa (nuôi cấy hoặc kháng sinh đồ).

Lựa chọn nhóm máu

Máu có thể là máu cừu, thỏ, ngựa hoặc người.

Được đề xuất nhiều nhất là máu của thịt cừu, với một số trường hợp ngoại lệ. Ví dụ, để phân lập loài Haemophilus, trong đó máu được khuyến cáo là máu ngựa hoặc máu thỏ, vì máu cừu có các enzym ức chế yếu tố V.

Ít được khuyến khích nhất là con người, tuy nhiên nó lại được sử dụng nhiều nhất, có lẽ vì nó dễ kiếm nhất.

Máu phải được khử chất béo, được lấy mà không có bất kỳ loại phụ gia nào và từ động vật khỏe mạnh. Để sử dụng máu người, một số yếu tố phải được tính đến:

Nếu máu đến từ những người đã bị nhiễm trùng do vi khuẩn, họ sẽ có các kháng thể đặc hiệu. Trong những điều kiện này, sự phát triển của một số vi khuẩn có thể bị ức chế.

Nếu nó được lấy từ ngân hàng máu, nó có chứa citrate và một số vi khuẩn có thể không phát triển khi có mặt nó. Ngược lại, nếu máu đến từ những bệnh nhân đang dùng thuốc kháng sinh, sự phát triển của vi khuẩn nhạy cảm có thể bị ức chế.

Và nếu máu của một người bị tiểu đường, lượng glucose dư thừa sẽ cản trở sự phát triển thích hợp của các kiểu tán huyết.

Lựa chọn loại thạch gốc

Thạch nền được sử dụng để chuẩn bị thạch máu có thể rất rộng. Trong đó có: thạch dinh dưỡng, thạch tim não, thạch đậu nành trypticase, thạch Müeller Hinton, thạch Thayer Martin, thạch Columbia, thạch Brucella, thạch Campylobacter, v.v.

Công dụng của thạch máu theo môi trường cơ bản được sử dụng để điều chế nó

Thạch dinh dưỡng

Loại cơ sở này ít được sử dụng nhất, vì nó sẽ chủ yếu phát triển các vi khuẩn không cần thiết, chẳng hạn như trực khuẩn đường ruột, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, và các loại khác. Nó không được khuyến khích để phân lập Streptococcus.

Agar truyền dịch tim não (BHI)

Nó là một trong những loại được sử dụng rộng rãi nhất làm cơ sở cho thạch máu, vì nó chứa các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn, bao gồm cả Streptococcus sp và các vi khuẩn khó tính khác. Mặc dù không thích hợp để quan sát các kiểu tán huyết.

Máu của cừu thường được sử dụng với cơ sở này.

Các biến thể thạch máu cũng có thể được chuẩn bị, nơi các hợp chất khác được thêm vào để phân lập một số vi sinh vật nhất định. Ví dụ, Brain Heart Infusion Agar bổ sung máu thỏ, cystine và glucose có thể được sử dụng để phân lập Francisella tularensis.

Trong khi, với cystine tellurite, nó rất hữu ích cho việc phân lập Corynebacterium diphteriae. Có thể dùng máu người hoặc máu cừu.

Với lần tán huyết beta đầu tiên sẽ được nhìn thấy như một quầng nhỏ, trong khi với lần thứ hai, quầng sẽ rộng hơn nhiều.

Tương tự như vậy, chất nền này cùng với bacitracin, tinh bột ngô, máu ngựa và các chất bổ sung làm giàu khác (IsoVitaleX), được sử dụng để phân lập chi Haemophilus sp từ các mẫu hô hấp.

Ngoài ra, nếu kết hợp kháng sinh chloramphenicol - gentamicin hoặc penicillin - streptomycin với máu ngựa thì sẽ rất lý tưởng để phân lập các loại nấm gây bệnh, thậm chí có năng suất cao hơn thạch đường Sabouraud. Nó đặc biệt hữu ích trong việc phân lập Histoplasma capsulatum.

Thạch đậu nành trypticase

Cơ sở này được khuyến nghị nhiều nhất để quan sát tốt hơn mô hình tan máu và thực hiện các xét nghiệm chẩn đoán như phân loại optoquine và bacitracin. Nó là thạch máu cổ điển được sử dụng thường xuyên.

Với cơ sở này, bạn cũng có thể chuẩn bị thạch máu đặc biệt cho vi khuẩn Corynebacterium diphteriae, với cystine tellurite và máu cừu .

Tương tự như vậy, sự kết hợp của thạch này với máu cừu, cộng với kanamycin-vancomycin là lý tưởng cho sự phát triển của vi khuẩn kỵ khí, đặc biệt là Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Cơ sở bổ sung máu này được sử dụng để thực hiện phản đồ của các vi sinh vật khó tính, chẳng hạn như Streptococcus sp.

Nó cũng hữu ích cho việc phân lập vi khuẩn như Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Môi trường này lý tưởng để làm cơ sở cho thạch máu khi nghi ngờ giống Neisseria, đặc biệt là Neisseria meningitidis, vì N. gonorrhoeae không phát triển trên thạch máu.

Nó cũng được sử dụng để kiểm tra tính nhạy cảm với Neisseria meningitidis.

Thạch Columbia

Cơ sở này rất tốt để cấy mẫu sinh thiết dạ dày tìm vi khuẩn Helicobacter pylori.

Môi trường được chuẩn bị bằng cách thêm 7% máu cừu được khử bằng kháng sinh (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B và cefsulodin) để hạn chế sự phát triển của các loại vi khuẩn khác có thể có mặt.

Cũng một cơ sở này được bổ sung từ máu người hoặc cừu, axit nalidixic và colistin rất hữu ích để phân lập Gardnerella vaginalis. Nó cũng lý tưởng để đánh giá tính nhạy cảm của kháng sinh đối với kháng sinh của cùng một loại vi sinh vật.

Ngoài ra, nó được sử dụng để chuẩn bị thạch máu để nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí, thêm aminoglycoside và vancomycin.

Cơ sở này cho phép quan sát thích hợp các mô hình tan máu.

Thạch Brucella

Môi trường này được sử dụng làm cơ sở cho thạch máu cùng với việc bổ sung vitamin K là lý tưởng cho việc nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí. Trong trường hợp này, việc sử dụng máu của cừu được khuyến khích.

Campylobacter agar

Campylobacter agar bổ sung 5% máu cừu và 5 loại kháng sinh (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B và vancomycin), là môi trường dùng để phân lập Campylobacter jejuni trong mẫu phân.

Sự chuẩn bị

Mỗi nhà thương mại mang hướng dẫn chuẩn bị một lít môi trường nuôi cấy ở mặt sau của thùng. Có thể thực hiện các phép tính tương ứng để chuẩn bị lượng mong muốn, tùy thuộc vào thạch gốc đã chọn.

Cân và hòa tan

Thạch cơ bản bị khử nước (bột), do đó nó phải được hòa tan trong nước cất được điều chỉnh đến pH 7,3.

Cân và hòa tan lượng chỉ thị của thạch cơ bản đã chọn trong một lượng nước tương ứng trong bình, sau đó đun nóng ở nhiệt độ vừa phải và trộn với chuyển động quay cho đến khi tất cả bột được hòa tan.

Triệt sản

Sau khi hòa tan, khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 20 phút.

Tổng hợp máu

Khi rời khỏi nồi hấp, bình được để nguội cho đến khi nhiệt độ trong khoảng 40 ° C đến 50 ° C; Đó là nhiệt độ mà da người hỗ trợ và đồng thời thạch vẫn chưa đông đặc.

Để làm được điều này, người ta dùng tay chạm vào lọ và nếu nhiệt độ chịu được thì đó là nhiệt độ lý tưởng để thêm lượng máu đã khử tương ứng (50 ml cho mỗi lít thạch). Trộn nhẹ nhàng để đồng nhất.

Quá trình kết tụ máu là rất quan trọng, bởi vì nếu nó được thực hiện khi môi trường rất nóng, các tế bào hồng cầu sẽ bị phá vỡ và môi trường sẽ không được sử dụng để quan sát sự tan máu.

Nếu thêm quá lạnh, nó sẽ bị vón cục và bề mặt của môi trường sẽ không mịn để cho phép chấm điểm thích hợp.

Đổ vào đĩa Petri

Cho vào đĩa Petri vô trùng ngay sau khi làm đồng nhất máu. Khoảng 20 ml được đổ vào mỗi đĩa Petri. Quy trình này được thực hiện trong tủ hút phân tầng hoặc gần đầu đốt.

Khi cho thạch máu vào đĩa Petri, không được để lại bọt khí trên bề mặt đĩa. Nếu điều này xảy ra, ngọn lửa của đầu đốt Bunsen sẽ nhanh chóng đi qua đĩa để loại bỏ chúng.

Các đĩa được để cho đông đặc và bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C) đảo ngược cho đến khi sử dụng. Đĩa thạch máu trước khi sử dụng phải được ủ (để ở nhiệt độ phòng) mới có thể tạo hạt được.

Các đĩa chuẩn bị kéo dài khoảng 1 tuần.

Người giới thiệu

1. Bayona M. Điều kiện vi sinh để nuôi cấy Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Thực hành vi sinh lâm sàng. Đại học Cadiz, tái bản lần thứ 2. Dịch vụ xuất bản UCA.
3. "Huyết thạch." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 10 tháng 12 năm 2018, 14:55 giờ UTC. Ngày 27 tháng 12 năm 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
5. Trung tâm chẩn đoán thú y phòng thí nghiệm CEDIVET. Guatemala. Có tại: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Xuất bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana SA