BIURET: CƠ SỞ LÝ LUẬN, THUỐC THỬ, QUY TRÌNH, CÁCH SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các biuret là một thuốc thử dùng để xác định protein chuỗi dài và chuỗi ngắn. Nó đặc biệt được sử dụng trong lĩnh vực hóa học phân tích và phân tích nước tiểu để điều tra nồng độ của tổng số protein trong huyết thanh, huyết tương và nước tiểu.

Giá trị protein có thể được tăng hoặc giảm trong một số bệnh lý. Các triệu chứng giảm protein máu thường xảy ra ở những bệnh nhân bị bệnh thận, ở những bệnh nhân bị suy dinh dưỡng và những bệnh nhân bị nhiễm trùng mãn tính.

Cấu trúc hóa học của phức chất được tạo thành trong phản ứng Biuret Thử nghiệm Biuret dương tính. Nguồn: Yikrazuul / flickr

Trong khi tăng protein máu được quan sát thấy trong các bệnh lý như đa u tủy, lupus ban đỏ hệ thống, viêm nội tâm mạc do vi khuẩn, viêm màng não do vi khuẩn, bệnh macroglobulin máu Waldenstrom, trong số những bệnh khác.

Mặt khác, sự hiện diện của protein trong nước tiểu là do thận lọc albumin. Đây là hành vi bệnh lý phải được nghiên cứu.

Theo nghĩa này, Biuret rất hữu ích, vì nó cho phép định lượng sự hiện diện của protein trong huyết thanh, huyết tương, nước tiểu, trong số nhiều mẫu khác.

Thậm chí Biuret có thể được sử dụng để điều tra sự hiện diện và nồng độ của protein trong các mẫu được thăm dò kém hoặc các mẫu không rõ thành phần. Vì vậy, nó được sử dụng rộng rãi trong khu vực nghiên cứu.

Thử nghiệm Biuret dựa trên việc phát hiện các liên kết peptit. Thử nghiệm diễn ra trong môi trường kiềm. Mẫu phải chứa ít nhất hai liên kết peptit để tạo phức màu tím tím. Phức chất được hình thành bởi sự liên kết của các liên kết và ion đồng.

Nền tảng

Thuốc thử Biuret bao gồm kali hydroxit, sunfat cupric, natri và kali tartrat. Natri hydroxit được sử dụng để kiềm hóa môi trường, vì điều kiện này là cần thiết để phản ứng xảy ra.

Các chất phản ứng với protein là cupric sulfat, trong khi natri tartrat có chức năng không cho phép tạo thành hydroxit đồng, có xu hướng kết tủa và cản trở phản ứng.

Nếu các chất có liên kết peptit (polypeptit hoặc protein) được tìm thấy trong mẫu thì kết quả xét nghiệm sẽ dương tính.

Phản ứng được hiểu là dương tính khi dung dịch chuyển sang màu tím. Màu được tạo ra do sự hình thành phức hợp giữa ít nhất hai liên kết peptit có nhóm CO-NH và các cation cupric.

Phức chất màu tím có thể được tạo thành theo hai cách: một là do mất proton từ các nhóm amit liên kết với kim loại (khử hóa), và hai là do sự liên kết của các điện tử oxy và nitơ tự do và liên kết. bằng đồng.

Phản ứng này có thể khác nhau về cường độ và màu sắc tùy thuộc vào loại protein.

Thử nghiệm có thể được thực hiện định tính hoặc định lượng. Ở dạng định tính, nó được báo cáo là tích cực hoặc tiêu cực. Trong khi ở dạng định lượng, nồng độ có thể được đo bằng phương pháp đo quang phổ.

Phản ứng được đọc trong khoảng 540-560 nm. Cường độ của màu tỷ lệ thuận với nồng độ liên kết peptit trong mẫu.

Thuốc thử

-20% natri hydroxit (NaOH)

-Cupric sulfat pentahydrat 1% (CuSO _4. 5H ₂ O)

- Hỗn hợp natri và kali tartrat tetrahydrat (KNaC ₄ H ₄ O ₆ · 4H ₂ O)

Độ ổn định của thuốc thử Biuret

-Nó phải được giữ trong tủ lạnh.

Quá trình

Kỹ thuật

-Cho 100 µl mẫu hoặc chất chuẩn cần phân tích vào ống nghiệm.

-Thêm 2 ml natri hydroxit.

- Trộn rất tốt.

-Thêm 5 ml thuốc thử Biuret.

- Trộn và để yên trong 25 phút ở nhiệt độ phòng, đậy nắp và tránh ánh sáng.

-Quan sát sự hình thành hay không của màu sắc và đo quang phổ.

Đường cong hiệu chuẩn

Albumin huyết thanh bò có thể được dùng làm chất chuẩn để thực hiện đường chuẩn. Các nồng độ khác nhau được điều chế từ nó. Ví dụ 25, 50, 75, 100, 125 và 150%.

Phản ứng được thiết lập với tất cả các nồng độ đã biết này và độ hấp thụ được đọc ở bước sóng 540 nm. Với dữ liệu về các nồng độ đã biết và số đọc độ hấp thụ, đường chuẩn được tạo.

Trong mỗi lần xác định hoặc lô mẫu đã xử lý, nên gắn một tiêu chuẩn. Có thể dùng albumin huyết thanh bò 0,1-2 mg / ml làm chất chuẩn hiệu chuẩn.

Phép đo được thực hiện trên máy quang phổ ở bước sóng 540 nm.

Độ tuyến tính được đáp ứng lên đến nồng độ 12 g / dl.

Giao thoa

Các chất cản trở thử nghiệm Biuret

Mặc dù nó không thường xuyên lắm, nhưng cần lưu ý rằng một số chất có thể gây trở ngại trong quá trình thực hiện thử nghiệm này. Ví dụ, sự hiện diện của amoniac có thể ức chế sự hình thành màu.

Tương tự như vậy, các chất khác có thể hấp thụ ở cùng bước sóng, chẳng hạn như một số sắc tố.

Mặt khác, nhiễu có thể được tạo ra khi một chất không phải là liên kết peptit tạo phức với muối cốc. Ví dụ: một số carbohydrate và một số lipid nhất định.

Trong trường hợp mẫu cần phân tích có một số loại kết tủa, thì mẫu phải được lọc hoặc ly tâm trước khi lắp mẫu thử.

Các chất không gây trở ngại cho phép thử Biuret

Thử nghiệm không bị ảnh hưởng bởi sự hiện diện của:

-Bilirubin đến nồng độ 20 mg / dl.

-Hemoglobin lên đến nồng độ 750 mg / dl.

-Dextran lên đến nồng độ 30 g / L.

- Chất béo trung tính lên đến nồng độ 4000 mg / dl.

Lợi thế

-Nó là một phương pháp đơn giản để thực thi.

-Đó là một bài kiểm tra kinh tế.

-Nó có tính đặc hiệu cao đối với protein.

- Ít nhiễu.

Nhược điểm

Nó có độ nhạy kém để phát hiện lượng protein thấp. Công trình được thực hiện bởi Fuentes và các cộng sự khẳng định rằng phương pháp thử Biuret có giới hạn phát hiện là 1 mg / ml protein và giới hạn định lượng là 3 mg / ml.

Tuy nhiên, các nghiên cứu khác được thực hiện tại Đại học Amazonia báo cáo giá trị thấp hơn nhiều. Giới hạn phát hiện được báo cáo bởi nghiên cứu là 0,020 mg / ml và giới hạn định lượng là 1,33 mg / ml.

Các ứng dụng

Thuốc thử hoặc thử nghiệm Biuret được sử dụng để xác định protein trong các mẫu lâm sàng và phi lâm sàng trong các phòng thí nghiệm thường quy và nghiên cứu.

Các bệnh lý xảy ra với sự gia tăng hoặc giảm

Trong nhiều bệnh lý, điều quan trọng là phải xác định nồng độ tổng số protein trong các mẫu lâm sàng, nồng độ này có thể tăng hoặc giảm.

Chúng được nâng lên trong:

-Bệnh đa u tủy,

- Bệnh lupus ban đỏ hệ thống,

- Viêm nội tâm mạc do vi khuẩn,

-Viêm màng não do vi khuẩn,

Bệnh macroglobulinemia của Waldenstrom, trong số những bệnh khác.

Nó được giảm trong:

- Suy thận,

-Người bị suy dinh dưỡng ở mức độ nặng,

-Bệnh nhân bị nhiễm trùng mãn tính, trong số những người khác.

Mẫu lâm sàng

Các mẫu lâm sàng phổ biến nhất là huyết thanh, huyết tương và nước tiểu. Giá trị bình thường của protein trong huyết thanh hoặc huyết tương là 6,0-8,8 gr / dl.

Nồng độ protein trong nước tiểu ở người lớn không vượt quá con số 150 mg / 24 giờ.

Protein nước tiểu / tỷ lệ creatinin nước tiểu giá trị bình thường

Trẻ sơ sinh: <0,50 mg

Trẻ em từ 2 tuổi trở lên: chỉ số: 0,20 mg

Người lớn: <0,2 mg

Mẫu phi lâm sàng

Phản ứng Biuret có thể được sử dụng cho nhiều loại mẫu phi lâm sàng, chẳng hạn như các sản phẩm từ sữa, antivenom hoặc bất kỳ chất không xác định nào mà bạn muốn điều tra sự hiện diện của protein.

Người giới thiệu

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez Y. (2014). Đặc điểm hóa lý và hàm lượng protein trong dịch chiết của sò rừng ngập mặn (Crassostrearizophorae). Tạp chí Hóa học Cuba, 26 (1), 66-74. Được lấy vào ngày 26 tháng 6 năm 2019, từ http: //scielo.sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Mô tả chức năng của hạnh nhân hạt xoài (Mangifera indica L.) Revista Ciencia en Desarrollo. Năm 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 19 tháng 6 năm 2019, 16:37 giờ UTC. 26 tháng 6, 2019, 22:18
4. Fuentes F, Quispe I, García J. Tiêu chuẩn hóa phương pháp Biuret để định lượng tổng số protein trong huyết thanh kháng vi khuẩn đa hóa trị được sản xuất tại Trung tâm Quốc gia về Sản phẩm Sinh học INS. Bol - Inst Nac Salud 2012; 18 (11-12). Có tại: repositorio.ins.gob.pe
5. Phòng thí nghiệm Winer. Tổng số protein. Phương pháp so màu để xác định tổng số protein trong huyết thanh và huyết tương. Có tại: wiener-lab.com.ar