BUỒNG NEUBAUER: LỊCH SỬ, ĐẶC ĐIỂM, SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các Neubauer buồng , hematometer hoặc hemocytometer, là một công cụ phòng thí nghiệm bao gồm một tấm kính dày đặc. Máy ảnh này được sử dụng để thực hiện đếm một số loại tế bào như hồng cầu, bạch cầu và tiểu cầu, mặc dù nó có thể được sử dụng để đếm bào tử, tinh trùng, ký sinh trùng, v.v.

Nó thể hiện một số đặc điểm rất đặc biệt, vì nó bao gồm 3 vùng, một vùng trung tâm để đếm và hai vùng hỗ trợ. Mỗi buồng có hai khu vực đếm hoặc ô chữ thập, một ở trên cùng và một ở dưới cùng.

Buồng Neubauer. Nguồn: SantiBadia. Đã chỉnh sửa hình ảnh.

Chúng có nhiều phân chia trong một dạng lưới. Các khu vực đếm là các hình vuông trung bình được tìm thấy ở 4 góc của cả hai ô, cộng với hình vuông trung tâm.

Việc lắp ráp máy ảnh phải được thực hiện hết sức cẩn thận, vì bất kỳ chi tiết nào cũng ảnh hưởng đến số lượng tế bào. Có rất nhiều lỗi có thể mắc phải, nhưng nếu có sai sót xảy ra, máy ảnh phải được tháo rời, làm sạch và lắp ráp lại. Các lỗi chính bao gồm:

Đổ tràn khoang hoặc đổ đầy, để khô khoang, cố gắng loại bỏ chất lỏng dư thừa bằng gạc, đậy nắp khoang khi vận chuyển, đổ đầy khoang bẩn hoặc ẩm ướt, không trộn đều dung dịch pha loãng hoặc mẫu với những thứ khác. Tất cả những lỗi này sẽ dẫn đến một giá trị không thực.

Lịch sử

Buồng Neubauer là một thiết bị chính xác và quá trình sản xuất trải qua quá trình kiểm soát chất lượng nghiêm ngặt. Nó được tạo ra để đếm chính xác các hạt hoặc các phần tử hình thành trên mm ³ , chẳng hạn như các tế bào trong các chất lỏng khác nhau. Đồ họa tinh tế của nó được chạm khắc bằng bút chì kim cương.

Đặc điểm buồng Neubauer

Toàn bộ buồng có kích thước như một phiến kính thông thường để có thể đặt nó trên kính hiển vi.

Buồng bao gồm ba bề mặt hình chữ nhật trung tâm (a, b, c). Trong vùng “b” nằm ở vùng R hoặc vùng đếm, còn được gọi là lưới. Một ở mỗi bên của máy ảnh, được phân tách bằng vùng "d".

Sơ đồ đồ họa của Phòng Neubauer. Nguồn: Hướng dẫn Thực hành về Huyết học. Trường Phân tích Sinh học của Đại học Carabobo, Venezuela.

Mỗi ô là một vùng được đánh bóng có khắc vùng đếm. Nó bao gồm một hình vuông có diện tích bề mặt là 9 mm ² và được chia bên trong thành 9 hình vuông với diện tích bề mặt mỗi hình là 1 mm ² . Bốn hình vuông góc được chia thành 16 hình vuông nhỏ hơn ( diện tích 0,0625 mm ² ).

Các lưới này được hình thành bởi một loạt các đường milimét giao nhau, tạo thành các lưới được vẽ biểu đồ hoàn hảo được phân định theo các phép đo đã được chỉ định. Những đường này đã được khắc bằng một đầu kim cương.

Lưới Neubauer được cải tiến. Nguồn: Hướng dẫn thực hành về Huyết học của Trường Phân tích Sinh học thuộc Đại học Carabobo, Venezuela.

Bốn cạnh tương ứng với khu vực đếm. Chính ở các cạnh hoặc góc này, người ta đếm phần lớn tế bào (hồng cầu và bạch cầu), trong khi tiểu cầu được đếm ở vùng trung tâm.

Vùng trung tâm có nhiều vạch chia hơn, nó bao gồm một hình vuông 1 mm ² được chia thành 25 ô vuông có diện tích bề mặt mỗi ô là 0,04 mm ² . Lần lượt những ô này được chia thành 16 ô có diện tích 0,0025 mm ² .

Mô tả về lưới Neubauer cải tiến. a) Hình vuông các góc, b) Hình vuông trung tâm, c) Hình vuông trung tuyến của hình vuông ở giữa. Nguồn: Hướng dẫn thực hành về Huyết học của Trường Phân tích Sinh học thuộc Đại học Carabobo, Venezuela.

Vùng “a” và “c” đóng vai trò hỗ trợ để đặt một vật thể che đặc biệt được gọi là nắp trượt đo huyết học hoặc nắp máy đo huyết áp.

Chiều cao giữa lá và bề mặt đếm là 0,1 mm. Các phép đo bề mặt hộp đếm, cũng như chiều cao buồng và độ pha loãng mẫu, là dữ liệu cần thiết cho các tính toán cuối cùng.

Các ứng dụng

Nó được sử dụng để đếm tế bào. Nó đặc biệt hữu ích trong lĩnh vực huyết học, vì nó cho phép đếm chuỗi 3 tế bào máu; tức là các tế bào hồng cầu, bạch cầu và tiểu cầu.

Tuy nhiên, nó có thể được sử dụng trong các lĩnh vực khác, ví dụ như để đếm tinh trùng, bào tử, vi khuẩn hoặc các mục quan trọng khác tùy thuộc vào loại mẫu.

Cách sử dụng?

Chuẩn bị mẫu

Để thực hiện đếm tế bào, nó thường được bắt đầu từ độ pha loãng trước đó. Ví dụ: để đếm bạch cầu, chuẩn bị dung dịch pha loãng 1:20 với chất lỏng của Turk. Pha loãng được trộn đều trước khi nạp pipet và lắp buồng Neubauer.

Có những khi độ pha loãng 1:20 không đủ để đếm. Ví dụ, ở những bệnh nhân mắc một số loại bệnh bạch cầu mãn tính. Trong những trường hợp này, nên thực hiện các độ pha loãng cao hơn như 1: 100.

Mặt khác, nếu số lượng này rất thấp, như trong trường hợp tăng bạch cầu nặng, có thể thực hiện pha loãng nhỏ hơn để cô đặc mẫu. Ví dụ: bạn có thể pha loãng 1:10.

Những thay đổi được thực hiện ảnh hưởng đến các tính toán.

Gắn buồng Neubauer

Buồng Neubauer được lắp ráp bằng cách đặt phiến kính đo huyết áp ở khu vực trung tâm. Cả hai đều phải rất sạch sẽ và khô ráo. Để đặt lam kính, nó được lấy theo các cạnh và nhẹ nhàng thả vào máy ảnh.

Điều này được lấp đầy bằng cách đặt đầu của pipet hoặc pipet tự động Thoma ở góc 35 ° ở mép của vùng nạp. Chất lỏng được xả ra một cách trơn tru và khu vực nạp được lấp đầy bởi mao quản. Điều này được thực hiện từ cả hai bên để tải hai chữ thập.

Các hạt không được quá tải và không được loại bỏ chất lỏng. Tải trọng phải chính xác. Điều quan trọng là nhân bánh phải được thực hiện đồng nhất, tức là không được có bọt.

Sau khi lắp ráp xong buồng, nó được để yên trong 2 phút để các tế bào kết tủa xuống đáy và việc đếm và hình dung chúng dễ dàng hơn.

Sau thời gian nghỉ, nó được gắn lên mặt kính hiển vi ánh sáng để quan sát. Đầu tiên, nó được lấy nét với vật kính 10X và nếu cần thì nó sẽ chuyển sang 40X.

Để cải thiện khả năng hiển thị của nó, sự truyền ánh sáng từ kính hiển vi được giảm bớt. Để làm điều này, bình ngưng được hạ xuống và màng ngăn hơi đóng.

Đếm

Để đếm bạch cầu hoặc bạch cầu, phải đếm toàn bộ bề mặt của bốn ô vuông góc trung tuyến và ô vuông trung tâm của mỗi lưới.

Việc đếm bắt đầu trong ô vuông ở góc trên bên trái. Bạn bắt đầu từ ô vuông đầu tiên của hàng đầu tiên, tức là từ trái sang phải cho đến khi bạn đến đầu đối diện.

Ở đó, bạn đi xuống và nhìn lại từ phải sang trái cho đến khi bạn đến đầu kia, và cứ thế, các ô trong mỗi lưới được tính theo kiểu zic zắc. 16 ô của mỗi ô vuông ở giữa được đếm.

Để tránh đếm một ô hai lần, có các quy tắc về các ô nằm trên các đường ranh giới của mỗi lưới. Các ô ở dòng bên trái và dòng trên cùng được đếm và các ô ở dòng bên phải và dòng dưới cùng bị bỏ qua.

Phải có bộ đếm ô bằng tay để người vận hành bấm phím thiết bị nhiều lần khi có ô được quan sát. Với việc sử dụng bộ đếm, người vận hành có thể đếm mà không cần phải tra cứu từ trường hiển vi. Vào cuối quá trình đếm, bạn sẽ thấy tổng số ô được đếm.

Tính toán

Đối với các tính toán, bạn có thể tiến hành theo một số cách. Có thể đếm một ô đơn lẻ hoặc đếm cả hai và cả hai đều được tính trung bình. Trong hai trường hợp này, các ô đếm được phải được nhân với một hệ số, trong trường hợp này sẽ là 40. Và do đó, tổng số trên mm ^{3 thu được} .

Nhưng nếu hai lưới được tính và không lấy giá trị trung bình, thì nó phải được nhân với một hệ số khác, trong trường hợp này là 20.

-Yếu tố nhân

Đây là cách tính hệ số nhân.

Các dữ liệu khác nhau được xem xét để tính toán, bao gồm hiệu giá pha loãng, chiều cao của buồng và diện tích được tính.

Pha loãng

Độ pha loãng tiêu chuẩn được sử dụng là 1:20 đối với số lượng bạch cầu.

Chiều cao phòng

Chiều cao giữa buồng và tấm tế bào máu là 0,1 mm.

Khu vực được đếm

Nếu 5 ô vuông có diện tích 1mm ² được đếm , có nghĩa là tổng diện tích đếm là 5mm ² . Dữ liệu này phải được nhân với chiều cao của buồng để có được tổng thể tích được đếm. Tức là, 5mm ² x 0,1mm = 0,5mm ³ .

Công thức và tính toán

Với dữ liệu chúng tôi có, người ta nói:

Nếu trong 0,5 mm ³ - có --- số lượng ô được đếm

Trong 1 mm ³ --- sẽ có - X n ° ô

X số ô = (số ô được đếm x 1) / 0,5 mm ³

Nhưng việc pha loãng cũng phải được tính đến. Do đó, công thức như sau:

(số ô được đếm x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Cuối cùng, để tóm tắt, số lượng tế bào đếm được có thể được nhân với 40. Như vậy, giá trị của bạch cầu trên mm ^{3 là được} .

Nếu hai hạt được đếm, dữ liệu cho vùng được đếm sẽ thay đổi, trong trường hợp này sẽ là 10 ô vuông, tức là 10 mm ² . Và tổng thể tích đếm được là 1 mm3. Công thức sẽ là:

(số ô được đếm x 1) x 20/1 mm ³

Do đó, trong trường hợp này, hệ số nhân sẽ là 20.

Sai lầm

-Nếu khi tải máy ảnh bị vượt quá hoặc vượt quá chất lỏng, chiều cao của máy ảnh sẽ thay đổi. Điều này dẫn đến số lượng cao hơn so với hàng thật. Nếu bạn cố gắng loại bỏ phần thừa bằng gạc hoặc bông, đây là một sai lầm rất lớn. Hành động này sẽ khiến các tế bào tập trung lại, làm tăng số lượng.

-Nếu nó được tải kém, số lượng sẽ thấp hơn hàng thật.

-Nếu gắn camera và để khô thì không đếm được nữa vì sẽ cho kết quả sai.

-Nếu dung dịch pha loãng mẫu không được trộn đều trước khi nạp vào khoang, sẽ có nguy cơ xảy ra sai sót khi đọc, vì các tế bào sẽ không được phân bố đồng nhất. Do đó, sẽ có nồng độ tế bào thấp hơn hoặc cao hơn, tùy thuộc vào việc mẫu được lấy từ bề mặt chất lỏng hay từ đáy ống tương ứng.

-Sự hiện diện của bong bóng làm giảm lượng chất lỏng phải đi vào lưới, cản trở sự hình dung và phân phối chính xác của các tế bào. Tất cả những điều này ảnh hưởng đáng kể đến kết quả.

- Trong quá trình đếm, không nhìn lên từ kính hiển vi cho đến khi hoàn thành từng ô vuông lớn để tránh bị lạc.

-Một nguyên nhân gây ra lỗi là nghiêng máy ảnh sau khi lắp. Vì lý do này, giai đoạn của kính hiển vi phải được nâng lên một cách cẩn thận.

sự giới thiệu

Nếu vì bất kỳ lý do gì mà bạn phát hiện ra sự bất thường trong việc làm đầy khoang, bạn nên tháo rời phần chuẩn bị đó, làm sạch khoang và lắp ráp lại từ đầu.

Cẩn thận khi vệ sinh máy ảnh để tránh làm xước các sợi lông chéo. Mặt khác, hãy lưu ý rằng phiến kính đo huyết áp rất mỏng manh và dễ vỡ. Xử lý không đúng cách có thể làm vỡ nó.

Trước khi bạn bắt đầu đếm, hãy đảm bảo rằng các ô được phân bố tốt. Sự phân bố không đồng đều của các tế bào xảy ra do trộn hoặc pha loãng mẫu kém. Nếu điều này xảy ra, việc lắp ráp phải được lặp lại.

Một cách để biết các ô có được phân phối tốt hay không là bằng cách so sánh số lượng của mỗi ô vuông lớn, số ô đếm được của mỗi ô vuông không được chênh lệch quá mức từ ô này sang ô kia.

-Nếu số lượng bạch cầu trên 50.000 mm ^{3 thì} nên đếm lại, pha loãng hơn.

-Nếu bạn thay đổi độ pha loãng, bạn phải tính lại hệ số nhân, vì điều này ảnh hưởng đến công thức.

Người giới thiệu

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. So sánh nồng độ tinh trùng khi sử dụng buồng của Makler và buồng của Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Có sẵn trong: scielo.
2. Buồng Neubauer. (2018, ngày 27 tháng 3). Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày tư vấn: 04:10, 23/06/2019 từ es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Áp dụng phương pháp đếm thay thế trong Phòng Neubauer để xác định nồng độ của Trichomonas vaginalis. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Có tại: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Phân tích Spermogram. Linh mục Venez. Nội tiết tố. Metab. Năm 2007; 5 (2): 19-20. Có tại: ve.scielo
5. Hướng dẫn thực hành huyết học của Khoa Phân tích Sinh học thuộc Đại học Carabobo. Venezuela. 1998