NƯỚC DÙNG EC: NỀN TẢNG, CÁCH CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các EC canh hoặc nước dùng Escherichia coli là một môi trường nuôi cấy lỏng có chọn lọc. Phương pháp tiêu chuẩn khuyến nghị sử dụng môi trường này để đếm tổng số coliform trong phân và trong phân, bằng kỹ thuật số có thể xảy ra nhất (MPN) trong các mẫu nước và thực phẩm, trong đó tác nhân chính liên quan là Escherichia coli.

Nước dùng EC bao gồm triptein, lactose, muối mật, dipotassium phosphate, monopotassium phosphate, natri clorua và nước. Công thức của nó được thiết kế một cách chiến lược để tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của tổng số coliform trong phân và phân và ngăn chặn sự phát triển của các vi sinh vật đi kèm khác.

Biểu diễn hình ảnh của việc chuẩn bị môi trường EC. Nguồn: Pixabay.com

Vi khuẩn Escherichia coli là vi khuẩn coliform trong phân chính hiện diện như một chất gây ô nhiễm trong nước và nguồn thực phẩm, là nguyên nhân của các rối loạn tiêu hóa quan trọng.

Cần lưu ý rằng có nhiều typ huyết thanh của Escherchia coli; Trong số đó, chúng ta có thể kể đến enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) và enteroaggregative (EAEC).

Phương tiện này có khả năng cho phép phát triển tất cả chúng, nhưng không thể phân biệt chúng với nhau. Điều này yêu cầu thử nghiệm bổ sung.

Nghiên cứu vi sinh vật trong nước và thực phẩm theo số lượng có thể xảy ra nhất (MPN) để tìm kiếm tổng số coliform trong phân và trong phân là một quy trình bao gồm nhiều giai đoạn; giai đoạn giả định, giai đoạn xác nhận và giai đoạn hoàn thành. Môi trường EC được sử dụng trong giai đoạn xác nhận.

Nền tảng

Nước dùng EC

Môi trường EC dựa trên việc cung cấp các yếu tố dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển tối ưu của coliform tổng số và phân, trong đó vi khuẩn Escherichia coli được bao gồm.

Các nguyên tố dinh dưỡng này được cung cấp bởi triptein, là một nguồn peptit và axit amin tuyệt vời. Ngoài ra, nó cũng chứa lactose, một loại carbohydrate có thể lên men cung cấp năng lượng và cho phép hiển thị nếu vi khuẩn tạo ra khí.

Mặt khác, môi trường chứa muối mật cung cấp đặc tính chọn lọc, vì nó ức chế sự phát triển của vi sinh vật Gram dương có thể có trong mẫu.

Tương tự như vậy, dipotassium phosphate và monopotassium phosphate hoạt động như một hệ thống cân bằng độ pH. Hệ thống này là cần thiết, bởi vì lactose chứa trong nước dùng có xu hướng axit hóa môi trường khi nó được lên men bởi vi sinh vật, nhưng điều này được bù đắp bởi các muối photphat.

Do đó, những yếu tố này là rất cần thiết, vì độ axit không được kiểm soát có thể ảnh hưởng đến sự phát triển thích hợp của các vi sinh vật được tìm kiếm.

Về phần mình, natri clorua ổn định môi trường về mặt thẩm thấu, trong khi nước là dung môi cho các chất tan có mặt và cung cấp độ đặc lỏng cho môi trường.

Novobiocin Modified EC Broth

Okrend và Rose đã tạo ra nhiều loại canh EC, được gọi là canh EC biến tính novobiocin. Việc sửa đổi bao gồm giảm nồng độ muối mật và thêm 20 mg / dl novobiocin.

Sự sửa đổi này hỗ trợ sự phục hồi của các chủng Escherichia coli enterohemorrhagic (O157: H7).

Loại huyết thanh vi khuẩn này gây ra viêm đại tràng xuất huyết nghiêm trọng có thể dẫn đến hội chứng urê huyết tán huyết (HUS); do đó có thể tạo ra suy thận cấp, tỷ lệ tử vong cao có thể lên đến 50% ở người cao tuổi.

Do tỷ lệ mắc bệnh và tử vong do vi khuẩn này gây ra hàng năm do tiêu thụ thực phẩm bị ô nhiễm, Bộ Nông nghiệp Hoa Kỳ (USDA) rất khuyến cáo việc sử dụng phương tiện này.

Sự chuẩn bị

Nước dùng EC

Cân 37,4 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Nên để hỗn hợp này trong 5 phút. Sau đó, trong nguồn nhiệt, nó được hoàn tất hòa tan bằng cách khuấy thường xuyên.

Sau khi hòa tan, nó được phân phối vào các ống nghiệm đã được điều chỉnh trước với một ống Durham bên trong. Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Độ pH của môi trường phải là 6,9 ± 0,2. Màu của môi trường khử nước là màu be và môi trường chuẩn bị có màu hổ phách nhạt.

Nước dùng để trong tủ lạnh cho đến khi dùng. Tại thời điểm sử dụng, nước dùng phải ở nhiệt độ phòng.

Mặt khác, nước dùng EC cũng có thể được chuẩn bị ở nồng độ gấp đôi.

Novobiocin Modified EC Broth

Cân 36,7 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước. Phần còn lại của việc chuẩn bị giống như mô tả ở trên.

Sử dụng

Tổng số và phân tích coliform trong phân

Môi trường EC là lý tưởng cho giai đoạn xác nhận của nghiên cứu coliform bằng phương pháp NMP, cả trong các mẫu nước, cũng như trong các sản phẩm dược phẩm và thực phẩm.

Nước dùng có đường lactose đục, tạo khí thu được trong giai đoạn giả định nên được ủ trong nước dùng màu xanh lá cây sáng 2% mật và nước dùng EC.

Đối với coliform tổng số, nước dùng EC được ủ hiếu khí trong 24 đến 48 giờ ở 37 ° C, và đối với coliform phân, chúng được ủ hiếu khí trong 24 đến 48 giờ ở 44 ° C.

Trong cả hai trường hợp, nó được giải thích như sau: các ống đục có sinh khí được coi là dương tính. Nếu không có khí sinh ra trong 24 giờ, thì ủ tiếp tục đến 48 giờ.

Nước dùng EC dương tính chuyển sang giai đoạn khẳng định đầy đủ, bao gồm việc cấy giống trên môi trường chọn lọc như thạch Mac Conkey, thạch EMB hoặc thạch Endo.

Nếu môi trường được sử dụng là EC biến đổi novobiocin, thì các ống dương tính được khuyến cáo nên được đặt lại trên thạch Mac Conkey với sorbitol.

QA

Mỗi lô môi trường đã chuẩn bị phải được kiểm soát chất lượng. Đầu tiên, phải đánh giá độ vô trùng của môi trường. Theo nghĩa này, một hoặc hai nước dùng được ủ mà không cần cấy vi khuẩn aerobiosis trong 24 giờ ở 37 ° C. Kết quả mong đợi là nước dùng trong suốt, không có độ đục hoặc thay đổi màu sắc.

Thứ hai, phải đánh giá sự phát triển của các chủng đã biết, vì vậy có thể sử dụng các vi khuẩn sau: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Trong tất cả các trường hợp, sự phát triển của vi sinh vật đạt yêu cầu được mong đợi, quan sát thấy nước dùng bị vẩn đục có sinh khí đối với E. coli và không có khí đối với Salmonella.

Các chủng khác có thể được đưa vào đối chứng là: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Các chủng này phải được ức chế hoàn toàn.

khuyến nghị

-Việc đặt các ống Durham là cần thiết cho việc nghiên cứu coliform.

-Phân phối môi trường vào các ống nghiệm trước khi tiệt trùng, không bao giờ sau.

-Không sử dụng nếu môi trường còn hơn 3 tháng.

-Không sử dụng nếu quan sát thấy bất kỳ sự thay đổi nào trong các đặc tính thông thường của môi trường.

Người giới thiệu

1. Phòng thí nghiệm Britannia. EC Trung bình. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
2. E. coli sinh ruột. Trung tâm an ninh lương thực và sức khỏe cộng đồng. 2010. Có tại: cfsph.iastate.edu
3. Tổng công ty Neogen. EC trung bình. Có tại: Foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Môi trường EC biến tính Novobiocin. Có tại: Foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Phát hiện, phân lập và xác định đặc điểm của Escherichia coli sinh ra độc tố Shiga từ thịt tươi xay từ những người bán thịt ở Concepción, tỉnh từ Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Có tại: www.scielo.org.