NƯỚC DÙNG LACTOSE: NỀN TẢNG, CÁCH CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các nước dùng lactose là một phương tiện phi - chọn lọc môi trường nuôi cấy lỏng sử dụng chủ yếu như một tiền làm giàu trong sự cô lập của các chủng Salmonella từ phân tích vi sinh để thực phẩm chế biến, các sản phẩm sữa hoặc nước. Điều này được khuyến nghị bởi Ủy ban Quốc tế về Thông số kỹ thuật vi sinh cho thực phẩm (ICMPF).

Môi trường có chứa enzym tiêu hóa gelatin, chiết xuất thịt và lactose, những chất cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Hơn nữa, lactose là một carbohydrate có thể lên men, do đó một số coliform có khả năng phân hủy nó bằng cách tạo ra khí.

Nước dùng cho con bú có độ đục. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa gil

Vì lý do này, nước dùng có đường lactose được Hiệp hội Y tế Công cộng Hoa Kỳ (APHA) khuyên dùng cho nghiên cứu giả định về vi khuẩn coliform tổng số và trong phân, coi nó như một giải pháp thay thế tuyệt vời để thay thế nước dùng tryptose lauryl sulfat trong kỹ thuật tiêu chuẩn của Con số có thể xảy ra nhất (MPN). ), được sử dụng để phân tích vi sinh đối với thực phẩm, sữa và nước mặt, các mẫu chất thải dưới đất, giải trí, sinh hoạt và công nghiệp.

Nền tảng

Đối với phân tích vi sinh của một số mẫu, bước tiền làm giàu là cần thiết để có thể thu hồi một vi sinh vật cụ thể có số lượng rất thấp hoặc trong các điều kiện không thuận lợi vi phạm hoặc giảm thiểu khả năng tồn tại của nó.

Đó là trường hợp của thực phẩm khô và chế biến, có thể bị nhiễm vi khuẩn Salmonellas sp. Trong những trường hợp này, nếu vi khuẩn có mặt, chúng đã bị lạm dụng vật lý và hóa học trong quá trình sản xuất sản phẩm.

Theo cách mà vi sinh vật tiếp xúc với các yếu tố bất lợi như mất nước, tiếp xúc với các sản phẩm ức chế hoặc độc hại, và sự chồng chéo được tạo ra bởi sự hiện diện của các vi khuẩn khác với số lượng nhiều hơn, trong số những vi khuẩn khác.

Theo nghĩa này, canh đường lactose có tác dụng sửa chữa các cấu trúc bị hư hỏng của vi sinh vật, khiến nó phục hồi và sinh sản, theo cách mà nó có thể được phát hiện.

Tương tự như vậy, nước dùng lactose có khả năng pha loãng các chất ức chế có thể ảnh hưởng đến khả năng tồn tại của nó, cho phép nó phát triển. Ngoài ra, thành phần dinh dưỡng của canh đường lactose có vai trò quan trọng trong việc hỗ trợ sự phát triển của Salmonella sp hơn các vi sinh vật khác.

Để nhận dạng cuối cùng, nó phải được cấy truyền sang các môi trường nuôi cấy xác định khác.

Mặt khác, thành phần của môi trường cũng giúp ta có thể phát hiện được các vi sinh vật lên men đường lactose sinh ra khí.

Sự chuẩn bị

Để chuẩn bị một lít canh đường lactose, phải cân 13 gam môi trường khử nước và hòa tan trong 1000 ml nước cất.

Để giúp hòa tan môi trường trong nước, dung dịch có thể được làm nóng một chút, nhưng không quá nhiều.

Khi đã đồng nhất, dung dịch được chuẩn bị như sau: nếu dùng canh để tìm coliform, một giá ống nghiệm được chuẩn bị, trong đó một ống lên men Durham được cắm ngược vào trong.

Ống Durham là một chi tiết rất quan trọng, vì nó sẽ cho phép phát hiện sự hình thành khí, một dữ liệu có giá trị lớn trong việc tìm kiếm coliform.

Khi các ống đã sẵn sàng, 10 ml canh đường lactose được phân phối vào chúng, một lượng phải đủ để bao phủ toàn bộ ống Durham.

Nếu sử dụng nước dùng lactose làm nước dùng tăng sinh trước, thì không cần đặt ống lên men Durham. Trong trường hợp này, cần một lượng môi trường lớn hơn (225 ml), sẽ được đóng trong chai 500 ml, miệng rộng và có nắp vặn chịu nhiệt.

Sau đó, các ống hoặc bình được hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút.

Môi trường phải duy trì ở pH cuối cùng là 6,9 ± 0,2 ở 25 ° C.

Nước dùng để trong tủ lạnh cho đến khi dùng.

Trước khi sử dụng, nước dùng phải được để ở nhiệt độ phòng.

Mặt khác, canh đường lactose cũng có thể được chuẩn bị ở nồng độ gấp đôi.

Một số phòng thí nghiệm thêm màu tím bromocresol vào canh đường lactose làm chất chỉ thị pH, để chỉ ra các ống đã lên men lactose do sự thay đổi màu sắc. Trong trường hợp này, nước dùng có màu tím và nếu có lên men sẽ chuyển sang màu vàng.

Các ứng dụng

Trong các phòng thí nghiệm vi sinh, canh đường lactose được sử dụng rộng rãi vì đây là môi trường tương đối rẻ tiền, mang lại kết quả đáng tin cậy và nhanh chóng (24-48 giờ).

Nó có thể được sử dụng để phân tích coliform tổng số và phân trong thực phẩm và nước hoặc làm nước dùng làm giàu trước cho Salmonella.

Tiền làm giàu

Làm giàu sơ bộ là một bước trước khi làm giàu mẫu, giúp cải thiện đáng kể khả năng thu hồi vi khuẩn thuộc giống Salmonella trong thực phẩm chế biến.

Để làm được điều này, mẫu thức ăn rắn (25 gam) hoặc chất lỏng (25 ml) được cho vào 225 ml canh đường lactose, ủ trong 24 đến 48 giờ. Sau đó, nó sẽ được nuôi cấy phụ trong một môi trường đã được làm giàu như nước dùng selenite cystine hoặc nước dùng tetrathionate. Sau đó chuyển sang phương tiện chọn lọc XLD và SS.

Tổng số và phân tích coliform trong phân

Nó là một môi trường tuyệt vời như là một chất chỉ thị về sự ô nhiễm phân.

Vì lý do này, canh đường lactose là lý tưởng cho giai đoạn giả định của nghiên cứu coliform theo phương pháp Số có khả năng xảy ra nhất.

Đối với các mẫu nghi ngờ có số lượng lớn coliform, sẽ cấy một lượng nhỏ hơn (1ml), trong khi đối với các mẫu nghi ngờ có số lượng coliform nhỏ hơn, sẽ cấy một lượng mẫu lớn hơn (10 ml).

Để phân tích, các độ pha loãng 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 được thực hiện , tạo thành một pin 3-5 ống cho mỗi nồng độ được sử dụng.

Từ mỗi độ pha loãng, cùng một thể tích được cho vào nước dùng đường lactose.

Các ống này được ủ trong 24 giờ. Nước dùng âm tính được ủ thêm 24 giờ.

Việc giải thích kết quả được thực hiện bằng cách quan sát hai đặc điểm: thứ nhất là có hoặc không có độ đục và vì môi trường này không chứa chất chỉ thị pH nên sẽ không có sự thay đổi màu sắc.

Thứ hai là sản xuất hay không khí. Dễ dàng chứng minh được khí trong ống Durham bằng sự xuất hiện của một hoặc nhiều bọt khí bên trong nó.

Nó được coi là dương tính nếu quan sát thấy cả hai đặc điểm, đó là độ đục với khí sinh ra. Các ống dương tính nên được cấy lại trong môi trường khẳng định (môi trường 2% Brilliant Green Bile và môi trường EC).

Kiểm soát chất lượng phương tiện

- Khi chuẩn bị môi trường, điều quan trọng là không được quên đặt các ống Durhams nếu mục đích của cùng là nghiên cứu coliform.

- Không đun quá nóng môi trường trước khi tiệt trùng.

- Phân phối trong ống nghiệm trước khi tiệt trùng, không bao giờ sau.

- Không sử dụng nếu môi trường đã quá 3 tháng.

- Không sử dụng nếu bạn quan sát thấy bất kỳ sự thay đổi nào trong các đặc tính thông thường của môi trường.

- Khi chuẩn bị một mẻ canh đường lactose, hãy kiểm tra chất lượng của nó bằng cách gieo các chủng đã biết như Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii và Klebsiella pneumoniae. Chúng phát triển rất tốt, có sinh khí (điều khiển tích cực).

- Nó cũng có thể bao gồm Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium hoặc Enterococcus faecalis, phát triển tốt, nhưng không sinh khí (Đối chứng âm tính).

- Cần lưu ý rằng màu ban đầu của môi trường khử nước là màu be còn của môi trường đã chuẩn bị là màu vàng rất nhạt và trong suốt. Nếu quan sát thấy sự thay đổi về màu sắc hoặc hình dạng, nó có thể xấu đi.

Người giới thiệu

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Sinh học môi trường và vi sinh vật học. (2013) Tái bản lần thứ nhất. Đại học Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B và Velázquez O. (2009). Các kỹ thuật phân tích vi sinh vật trong thực phẩm. Ấn bản thứ 2. Khoa Hóa học, UNAM. Mexico.
3. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. 2017. Nồng độ gấp đôi nước dùng lactose (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. So sánh các kỹ thuật tách chiết vi khuẩn coliform từ trầm tích của Hồ Xochimilco, Mexico. Rev. argent. vi sinh. Năm 2013; 45 (3): 180-184. Có tại: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Xác định chất lượng vi sinh của nước giếng artesian ở các quận thuộc các sở của Trung tâm, Cordillera và Thủ đô. Bản ghi nhớ điều tra. Khoa học. Sức khỏe 2013; 11 (1): 5-14. Có sẵn từ: scielo.iics.