NƯỚC DÙNG MALONATE: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các nước dùng malonate là môi trường nuôi cấy lỏng sử dụng cho các xét nghiệm chẩn đoán (malonate), được sử dụng để phân biệt một số chi của gia đình Enterobacteriaceae. Nó được tạo ra bởi Leifson vào năm 1933 và sau đó được sửa đổi bởi Ewing, người đã thêm một lượng nhỏ dextrose và chiết xuất nấm men vào công thức ban đầu.

Môi trường hiện bao gồm chiết xuất nấm men, amoni sulfat, dipotassium phosphate, monopotassium phosphate, natri clorua, natri malonate, dextrose và bromothymol blue. Thử nghiệm này thường được bao gồm trong pin nhận dạng sinh hóa cho Enterobacteriaceae, giúp phân biệt một số chi và loài nhất định.

Biểu diễn đồ họa của bài kiểm tra không phù hợp. A. Thử nghiệm âm tính, B. (Axit hóa) Thử nghiệm âm tính, C. (Kiềm hóa trung bình) Thử nghiệm dương tính. Nguồn: Ống màu publicdomainpictures.net

Phép thử malonat chủ yếu dựa trên khả năng của một số vi sinh vật sử dụng natri malonat làm nguồn cacbon duy nhất và amoni sunfat làm nguồn nitơ của chúng.

Xét nghiệm malonate thường dương tính ở một số loài thuộc các chi Enterobacter, Klebsiella và Citrobacter. Trong khi đó, hầu hết các loài thuộc các chi Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus và Providencia đều cho phản ứng âm tính.

Nền tảng

Thử nghiệm malonat bao gồm việc chỉ ra những vi khuẩn có khả năng sử dụng natri malonat làm nguồn cacbon duy nhất và amoni sunfat làm nguồn nitơ.

Hầu hết các Enterobacteriaceae không sử dụng malonate đều có thể phát triển trong môi trường này, lấy dextrose và chiết xuất nấm men làm chất dinh dưỡng.

Trong trường hợp này, bất kỳ nỗ lực nào để kiềm hóa bằng cách sử dụng pepton sẽ bị cản trở bởi việc tạo ra các axit được tạo ra bởi quá trình lên men dextrose. Tương tự như vậy, photphat dipotassium và monopotassium hoạt động như một chất đệm, duy trì độ pH ở 6,7.

Đó là lý do tại sao khi xét nghiệm âm tính, nước dùng vẫn giữ nguyên màu ban đầu (xanh). Trong một số trường hợp hiếm hoi, môi trường có thể trở nên axit do lên men dextrose; nếu không sử dụng pepton và chất chỉ thị pH, nó sẽ chuyển màu của môi trường sang màu vàng. Để điều này xảy ra, độ pH phải giảm xuống 6.

Tuy nhiên, khi kết quả xét nghiệm này dương tính, người ta nói rằng vi sinh vật đã sử dụng malonat và amoni sulfat tương ứng làm nguồn cacbon và nitơ, mà không sử dụng các thành phần khác.

Trong trường hợp này, môi trường trở nên kiềm do sự giải phóng natri và do đó là sự hình thành NaOH. Theo nghĩa này, chất chỉ thị pH (xanh bromothymol) chuyển màu của môi trường từ xanh lục sang xanh lam khi pH bằng hoặc lớn hơn 7,6. Màu xanh có thể nhạt hoặc đậm (xanh Prussian).

Cuối cùng, natri clorua duy trì độ thẩm thấu của môi trường và nước là chất pha loãng của tất cả các thành phần.

Diễn dịch

Nước dùng cùng màu (Xanh lục) - Thử nghiệm âm tính

Nước dùng màu vàng: thử nghiệm âm tính

Nước dùng màu xanh nhạt hoặc đậm: thử nghiệm dương tính

Có một biến thể được gọi là nước dùng phenylalanine malonate, còn được gọi là Shaw và Clarke's medium. Trong trường hợp này, có thể phân tích hai phép thử, việc sử dụng malonat làm nguồn cacbon và việc sản xuất axit pyruvic từ phenylalanin.

Sự chuẩn bị

Nước dùng Malonate

Số gam được chỉ định bởi tờ hướng dẫn của công ty thương mại đã chọn được cân (có thể thay đổi tùy theo từng loại). Các gam đã cân được treo trong một lít nước cất. Đun nhẹ cho đến khi tan hoàn toàn. Phân phối 3ml môi trường vào 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C từ 15 đến 20 phút.

Để nguội trước khi sử dụng. Nếu chưa dùng ngay, hãy cất vào tủ lạnh cho đến khi dùng. Để nước dùng ở nhiệt độ phòng trước khi cấy.

Độ pH của môi trường phải là 6,7 ± 0,2. Màu của môi trường đã chuẩn bị là màu xanh lá cây.

Phenylalanine Malonate Broth

Cân 11 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Phần còn lại của việc chuẩn bị giống như đã mô tả trước đó.

Nó cũng có thể được chuẩn bị bằng cách thêm 2 g / L phenylalanin vào môi trường canh trường malonat trước khi nó được khử trùng.

Sử dụng

Nó được sử dụng như một phần của pin các xét nghiệm sinh hóa được lắp ráp để xác định vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Giúp phân biệt giữa:

-Chi Klebsiella và Enterobacter (+) thuộc chi Escherichia và Serratia (-).

-Các loài Salmonella enterica ssp a Arizonae, Salmonella enterica ssp salame và Salmonella enterica ssp diarizonae (+), thuộc loài Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Từ chi Klebsiella nói chung (+) từ chi Actinobacillus (-).

- Thông thường nó có thể giúp phân biệt các chi và loài vi khuẩn không thuộc họ Enterobacteriaceae, chẳng hạn như trong số các trực khuẩn Gram âm không lên men Alcaligenes faecalis (+) và Acinetobacter sp (-).

Nguồn: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

Quá trình

Dưới bật lửa, một phần nước hoa nguyên chất được lấy bằng tay cầm bằng bạch kim đã được khử trùng và làm nguội thích hợp. Mẫu được lấy (chất cấy nhẹ) được hòa tan trong môi trường malonat. Ủ kín với nắp lỏng trong môi trường hiếu khí ở 35 ° C ± 0,2 trong 24 đến 48 giờ.

Nước canh malonat cũng có thể được cấy từ môi trường nuôi cấy 18-24 giờ trong nước canh đậu nành trypticase. Trong trường hợp này, 0,01 ml được lấy bằng pipet vô trùng và nuôi cấy malonat. Ủ kín với nắp lỏng trong môi trường hiếu khí ở 35 ° C ± 0,2 trong 24 đến 48 giờ.

Vào cuối thời gian, kết quả được giải thích. Bất kỳ dấu vết nào có màu xanh lam sau 48 giờ ủ đều được coi là dương tính. Thử nghiệm không nên được hiểu là âm tính cho đến khi thời gian ủ 48 giờ trôi qua.

Trong trường hợp sử dụng biến thể canh phenylalanin malonat, đầu tiên malonat được giải thích và sau đó thêm 5 giọt HCl 1N và 3-5 giọt clorua sắt 8%. Màu xanh đậm được hiểu là xét nghiệm dương tính với phenylalanin. Ngược lại, nếu môi trường chuyển sang màu xanh lam nhạt thì phép thử âm tính với phenylalanin.

QA

Để thực hiện việc kiểm soát độ vô trùng của môi trường, một hoặc hai dịch canh phải được ủ ở 35 ° C ± 0,2 trong 24 giờ ủ. Sau thời gian này sẽ không có vẩn đục hoặc thay đổi màu sắc.

Để kiểm tra chất lượng, có thể sử dụng các chủng đã biết hoặc đã được chứng nhận, chẳng hạn như: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp a Arizonae ATCC 13314 và Escherichia coli ATCC 25922.

Kết quả mong đợi là:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae và Salmonella enterica ssp a Arizonae cho phản ứng dương tính (màu xanh lam trung bình).
• Đối với Escherichia coli, kết quả phải là âm tính, tức là không có sự thay đổi màu sắc (xanh lục) hoặc nó sẽ chuyển sang màu vàng do quá trình lên men của glucose.

Hạn chế

Không sử dụng nước dùng có màu đục, kết tủa, thay đổi màu sắc hoặc bất kỳ dấu hiệu hư hỏng nào.

Người giới thiệu

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Phân lập vi sinh đối với Salmonella spp. và các công cụ phân tử để phát hiện ra nó. Sức khỏe đoàn kết. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Có tại: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Broth, Ewing được sửa đổi. 2007. Có tại: bd.com
3. Phòng thí nghiệm Senna. Nước dùng Malonato. Có tại: cientificasenna.com
4. RenyLab. Nước dùng Malonato. 2013. Có sẵn tại: es.renylab.ind.br
5. Chẩn đoán Mbiolog. Nước dùng Malonato. Có tại: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
7. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Phenylalanine malonate nước dùng. Có tại: condalab.com