NƯỚC DÙNG ĐẬU NÀNH TRYPTICASEIN: NỀN TẢNG, CÁCH CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các tryptone canh đậu nành là một môi trường nuôi cấy lỏng, dinh dưỡng cao, không chuyên biệt. Do tính linh hoạt cao, nó là một trong những môi trường nuôi cấy lỏng được sử dụng rộng rãi nhất trong phòng thí nghiệm vi sinh.

Nó còn được biết đến với cái tên nước dùng đậu nành tryptic hoặc casein-đậu nành đã tiêu hóa, có tên viết tắt là TSB cho từ viết tắt của nó trong tiếng Anh là Tryptic Soy Broth hoặc CST cho từ viết tắt của nó trong tiếng Tây Ban Nha. Công dụng của nó rất đa dạng do thành phần của nó. Nó bao gồm triptein, peptone đậu nành, natri clorua, dipotassium phosphate và glucose.

Nước luộc đậu nành trypticasein đã gieo mầm với một chủng Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, nơi quan sát thấy quá trình sản xuất sắc tố. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Nó có khả năng tái tạo các vi khuẩn gây bệnh quan trọng về mặt lâm sàng, bao gồm cả vi khuẩn đòi hỏi dinh dưỡng và vi khuẩn kỵ khí. Một số loại nấm cơ hội và gây ô nhiễm cũng có thể phát triển trong môi trường này.

Do sức mạnh dinh dưỡng cao, nó có độ nhạy cao để phát hiện ô nhiễm vi sinh vật, vì lý do này, nó đã được Cơ quan Kiểm tra Sức khỏe Động thực vật của USDA chọn để phân tích vi sinh vật trong vắc xin.

Tương tự như vậy, nước dùng đậu nành trypticasein đáp ứng các yêu cầu của các dược điển khác nhau (EP Châu Âu, JP Nhật Bản và USP Bắc Mỹ) để nghiên cứu vi sinh vật của các sản phẩm ở cấp độ công nghiệp, chẳng hạn như mỹ phẩm và thực phẩm.

Mặt khác, điều đáng nói là mặc dù có công dụng tuyệt vời nhưng phương tiện này tương đối rẻ, phù hợp với hầu hết các phòng thí nghiệm vi sinh. Nó cũng rất dễ chuẩn bị.

Nền tảng

Triptein, peptone và glucose cung cấp các đặc tính dinh dưỡng thiết yếu để làm cho nó trở thành môi trường lý tưởng cho sự phát triển nhanh chóng của vi sinh vật.

Trong khoảng 6 đến 8 giờ ủ, hầu hết các vi sinh vật đều có thể thấy sự phát triển. Tuy nhiên, có những chủng phát triển chậm, có thể mất nhiều ngày để phát triển.

Natri clorua và kali photphat đóng vai trò cân bằng thẩm thấu và điều chỉnh độ pH tương ứng. Sự hiện diện của sự tăng trưởng được chứng minh bằng sự xuất hiện của độ đục trong môi trường; nếu không có sự phát triển, môi trường vẫn trong mờ.

Do màu sáng, có thể quan sát quá trình tạo ra các sắc tố, chẳng hạn như trong hình ở đầu bài báo, tương ứng với sắc tố do Pseudomonas aeruginosa tạo ra.

Sự chuẩn bị

-Triptysein nước dùng đậu nành

Để chuẩn bị nước dùng đậu nành thử nghiệm, 30 g môi trường thương mại đã khử nước phải được cân trên cân kỹ thuật số. Sau đó, nó được hòa tan trong một lít nước cất chứa trong bình.

Để hỗn hợp nghỉ trong 5 phút và sau đó được đưa đến nguồn nhiệt để giúp hòa tan môi trường. Nó nên được khuấy thường xuyên trong khi đun sôi trong 1 phút.

Sau khi hòa tan, nó được phân phối vào các ống có kích thước thích hợp khi cần thiết. Có thể sử dụng ống có nút bông hoặc có nắp Bakelite. Sau đó, các ống này được khử trùng bằng môi trường trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

PH của môi trường phải duy trì ở mức 7,3 ± 0,2

Cần lưu ý rằng màu của môi trường nuôi cấy khử nước là màu be nhạt và cần được bảo quản ở nhiệt độ từ 10 đến 35 ° C, ở nơi khô ráo. Trong khi nước dùng đã chuẩn bị có màu hổ phách nhạt và nên được bảo quản trong tủ lạnh (2 đến 8 ° C).

-Các biến thể của nước dùng đậu nành trypticasein

Nước đậu nành biến tính trypticasein có thể được chuẩn bị bằng cách thêm muối mật và novobiocin để làm cho nó chọn lọc để phân lập E. coli. Một lựa chọn khác cho mục đích tương tự là chuẩn bị nước dùng đậu nành trypticase bổ sung vancomycin, cefixime và tellurite (2,5 µg / ml).

Mặt khác, có thể thêm nhiều glucose (0,25%) vào nước dùng đậu nành thử nghiệm khi mục đích là kích thích sự hình thành màng sinh học.

Sử dụng

Nó đủ dinh dưỡng để cho phép sự phát triển của các vi khuẩn khó tính hoặc khó tính như Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp và Brucella sp mà không cần bổ sung máu hoặc huyết thanh.

Tương tự như vậy, một số loại nấm có thể phát triển trong môi trường này, chẳng hạn như Candida albicans Complex, Aspergillus sp và Histoplasma capsulatum.

Hơn nữa, môi trường này trong điều kiện yếm khí là lý tưởng để phục hồi vi khuẩn thuộc giống Clostridium, cũng như vi khuẩn kỵ khí không bào tử có tầm quan trọng lâm sàng.

Nếu thêm 6,5% natri clorua, nó có thể được sử dụng cho sự phát triển của Enterococcus và các Streptococcus nhóm D.

Ở cấp độ nghiên cứu, nó rất hữu ích trong các giao thức khác nhau, đặc biệt là trong nghiên cứu màng sinh học hoặc vi khuẩn tạo màng sinh học. Nó cũng được sử dụng để chuẩn bị huyền phù vi khuẩn Mac Farland 0,5% cần thiết để thực hiện phản đồ bằng phương pháp Kirby và Bauer.

Trong trường hợp này, 3 đến 5 khuẩn lạc có bề ngoài giống nhau được lấy và nhũ hóa trong 4-5 ml nước đậu nành trypticasein. Sau đó, nó được ủ trong 2 đến 6 giờ ở 35-37 ° C và sau đó được điều chỉnh đến nồng độ mong muốn bằng cách sử dụng nước muối vô trùng. Nước dùng đậu nành trypticasein không được sử dụng từ 18 đến 24 giờ sau khi ủ.

Gieo

Mẫu có thể được cấy trực tiếp hoặc các khuẩn lạc thuần khiết lấy từ môi trường chọn lọc có thể được nuôi cấy phụ. Nên nhỏ chất cấy để không làm vẩn đục môi trường trước khi ủ.

Thông thường, nó được ủ ở 37 ° C trong môi trường hiếu khí trong 24 giờ, nhưng những điều kiện này có thể thay đổi tùy thuộc vào vi sinh vật được tìm kiếm. Nó cũng có thể được ủ trong điều kiện yếm khí ở 37 ° C trong vài ngày nếu cần. Ví dụ, vi sinh vật phát triển nhanh hoặc khó tính có thể ủ đến 7 ngày.

Trong phân tích vi sinh của các dược chất - chẳng hạn như vắc xin - các quy trình nghiêm ngặt hơn. Trong những trường hợp này, nước dùng không có sự phát triển không được loại bỏ cho đến khi nó được ủ 14 ngày liên tục.

QA

Từ mỗi mẻ đã chuẩn bị, 1 hoặc 2 ống chưa cấy phải được ủ để chứng minh tính vô trùng của chúng. Nó phải không thay đổi.

Các chủng đã biết cũng có thể được trồng để đánh giá hành vi của chúng. Trong số các chủng có thể được sử dụng là:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 hoặc 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATC528 Pneumomonaeonas ATC528C28CC305

Trong mọi trường hợp, sự phát triển phải đạt yêu cầu trong điều kiện môi trường và nhiệt độ thích hợp cho từng vi sinh vật.

Hạn chế

-Sự lên men của glucozơ làm giảm pH của môi trường do tạo ra axit. Điều này có thể không thuận lợi cho sự tồn tại của một số vi sinh vật nhạy cảm với độ chua.

- Nó không được khuyến khích để duy trì các chủng, bởi vì ngoài tính axit, vi khuẩn làm cạn kiệt chất dinh dưỡng sau một vài ngày với sự tích tụ các chất độc hại làm cho môi trường không thuận lợi.

-Bạn phải chăm sóc tất cả các quy trình vô trùng, vì nước dùng rất dễ bị nhiễm bẩn.

-Sau khi chuẩn bị nước dùng đậu nành trypticasein, bạn không nên cố gắng chuyển nước dùng sang một ống vô trùng khác, vì thao tác kiểu này rất dễ bị nhiễm khuẩn.

Người giới thiệu

1. Cona E. Điều kiện để nghiên cứu tính nhạy cảm tốt bằng thử nghiệm khuếch tán thạch. Linh mục. nhiễm trùng. Năm 2002; 19 (2): 77-81. Có tại: scielo.org
2. Phòng thí nghiệm Britannia. Nước dùng đậu nành Triptein. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
3. Phòng thí nghiệm MCD. Nước dùng đậu nành trypticasein. Có tại: Electronic-systems.com
4. Phòng thí nghiệm Neogen. Nước súp đậu nành Triptych. Có tại: Foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Đánh giá kỹ thuật điều hòa miễn dịch từ tính để thu hồi Escherichia coli O157: H7 trong kem sữa. ALAN. Năm 2006; 56 (3): 257-264. Có tại: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Sự hình thành màng sinh học ở Staphylococcus aureus phân lập theo tính nhạy cảm kháng sinh và nguồn gốc lâm sàng. Vitae. Năm 2015; 62 (1): 1-8. Có tại: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Phân lập Escherichia coli O157: H7 trong Mẫu phân bò hai mục đích từ Thành phố Miranda, Bang Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Có tại: scielo.org