HÓA TẾ BÀO: LỊCH SỬ, ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU, CÔNG DỤNG VÀ KỸ THUẬT - SINH HỌC - 2026

Các cytochemistry bao gồm một loạt các kỹ thuật mà dựa vào việc xác định và bố trí các chất cụ thể bên trong tế bào. Nó được coi là một nhánh của sinh học tế bào kết hợp hình thái tế bào với cấu trúc hóa học.

Theo Bensley, người sáng lập ứng dụng tế bào học hiện đại, nói rằng mục đích của hóa tế bào là khám phá tổ chức hóa học của tế bào để hiểu được những bí ẩn của sự sống. Cũng như nghiên cứu các thay đổi động xảy ra trong các giai đoạn chức năng khác nhau.

1: Bệnh ngoại tâm thu Paget. (Hematoxylin-Eosin) 2: Các mảng lão hóa được quan sát thấy trong vỏ não ở một bệnh nhân mắc bệnh Alzheimer. (Tẩm bạc) 3: Lưỡi thỏ, các sợi Collagen (màu xanh). Sợi cơ (dải màu tím). (Bộ ba của Masson). 4: Mô gan bị thoái hóa mỡ. (Sudan III) 5: Gan bị viêm. Hoại tử. (Toluidine blue) Nguồn: Wikipedia. com / Người dùng: KGH / Tệp miền công cộng / Mohit Lalwani

Bằng cách này, có thể xác định vai trò trao đổi chất của các chất này trong tế bào.

Hóa tế bào sử dụng hai phương pháp chính. Đầu tiên là dựa trên các quy trình hóa học và vật lý. Những kỹ thuật này sử dụng kính hiển vi như một công cụ không thể thiếu để hình dung các phản ứng hóa học xảy ra trên các chất cụ thể trong tế bào.

Ví dụ: việc sử dụng thuốc nhuộm tế bào, chẳng hạn như phản ứng Feulgen hoặc phản ứng PAS, trong số những chất khác.

Phương pháp thứ hai dựa trên hóa sinh và vi hóa. Với phương pháp luận này, có thể xác định định lượng sự hiện diện của các chất hóa học nội bào.

Trong số các chất có thể được tiết lộ trong cấu trúc mô hoặc tế bào là: protein, axit nucleic, polysaccharid và lipid.

Lịch sử của hóa tế bào

Các kỹ thuật hóa tế bào kể từ khi phát minh ra chúng đã giúp hiểu được thành phần của tế bào, và theo thời gian, nhiều kỹ thuật khác nhau đã xuất hiện sử dụng nhiều loại thuốc nhuộm khác nhau với các tính chất và nguyên tắc cơ bản khác nhau.

Sau đó, hóa tế bào đã mở ra những chân trời mới với việc sử dụng một số chất nền nhất định để hiển thị so màu sự hiện diện của các enzym hoặc các phân tử khác trong tế bào.

Tương tự như vậy, các kỹ thuật khác đã xuất hiện như hóa tế bào miễn dịch đã giúp ích rất nhiều trong việc chẩn đoán nhiều bệnh. Hóa tế bào miễn dịch dựa trên phản ứng kháng nguyên-kháng thể.

Mặt khác, hóa tế bào cũng đã sử dụng các chất huỳnh quang gọi là fluorochromes, là chất đánh dấu tuyệt vời để phát hiện các cấu trúc tế bào nhất định. Do đặc điểm của khí tượng lưu huỳnh, nó làm nổi bật các cấu trúc mà nó đã được gắn vào.

Bạn học gì

Các kỹ thuật hóa tế bào khác nhau được sử dụng trên một mẫu sinh học có điểm chung: chúng tiết lộ sự hiện diện của một loại chất cụ thể và biết vị trí của nó trong cấu trúc sinh học đang được đánh giá, có thể là loại tế bào hoặc mô.

Các chất này có thể là enzym, kim loại nặng, lipid, glycogen và các nhóm hóa học xác định (aldehyde, tyrosine, v.v.).

Thông tin được cung cấp bởi các kỹ thuật này có thể cung cấp hướng dẫn không chỉ cho việc xác định các tế bào mà còn cho việc chẩn đoán các bệnh lý khác nhau.

Ví dụ, các vết nhuộm tế bào rất hữu ích trong việc phân biệt giữa các loại bệnh bạch cầu khác nhau, vì một số tế bào biểu hiện một số enzym hoặc chất quan trọng và những tế bào khác thì không.

Mặt khác, cần lưu ý rằng để có thể sử dụng hóa tế bào, phải thực hiện các cân nhắc sau:

1) Chất phải được cố định ở nơi mà nó được tìm thấy một cách tự nhiên.

2) Chất phải được xác định bằng cách sử dụng chất nền phản ứng cụ thể với nó chứ không phải với các hợp chất khác.

Tiện ích

Các mẫu có thể được nghiên cứu thông qua các kỹ thuật hóa tế bào là:

- Máu ngoại vi kéo dài.

- Tủy xương kéo dài.

- Các mô được cố định cho kỹ thuật mô hóa.

- Tế bào cố định bằng phương pháp ly tâm tế bào.

Các kỹ thuật tế bào học hỗ trợ rất nhiều trong lĩnh vực huyết học, vì chúng được sử dụng rộng rãi để hỗ trợ chẩn đoán và phân biệt một số loại bệnh bạch cầu.

Ví dụ: Phản ứng Esterase được sử dụng để phân biệt bệnh bạch cầu nguyên bào tủy với bệnh bạch cầu đơn bào cấp tính.

Tủy xương và phết máu ngoại vi của những bệnh nhân này tương tự nhau, vì một số tế bào rất khó xác định về hình thái học. Đối với điều này, thử nghiệm esterase được thực hiện.

Trong lần đầu tiên, các esterase cụ thể là dương tính, trong khi ở lần thứ hai, các esterase không đặc hiệu là dương tính.

Chúng cũng rất hữu ích trong mô học, ví dụ, việc sử dụng kỹ thuật nhuộm kim loại nặng (ngâm tẩm bạc) nhuộm các sợi lưới có màu nâu đậm trong mô cơ tim.

Các kỹ thuật trong hóa tế bào

Các kỹ thuật được sử dụng nhiều nhất sẽ được giải thích dưới đây:

- Sử dụng chất tạo màu

Các chất nhuộm màu được sử dụng rất đa dạng trong kỹ thuật hóa tế bào và chúng có thể được phân loại theo một số quan điểm:

Theo căn nguyên mà chúng có mối quan hệ

Chúng được chia thành: axit, bazơ hoặc trung tính. Chúng là đơn giản nhất và được sử dụng nhiều nhất trong suốt lịch sử, cho phép chúng ta phân biệt các thành phần ưa bazơ với các thành phần ưa axit. Ví dụ: nhuộm hematoxylin-eosin.

Trong trường hợp này, nhân của tế bào nhuộm màu xanh lam (chúng lấy hematoxylin, là vết cơ bản) và tế bào, màu đỏ (chúng lấy eosin, là vết axit).

Theo màu sắc mà họ cung cấp

Chúng có thể là trực sắc hoặc siêu sắc. Chất chỉnh màu là những chất nhuộm màu cấu trúc cùng màu với thuốc nhuộm. Ví dụ, trường hợp của eosin, có màu đỏ và nhuộm đỏ.

Mặt khác, vết siêu âm tạo cấu trúc màu khác với màu của chúng, chẳng hạn như toluidine, có màu xanh lam nhưng lại nhuộm màu tím.

Thuốc nhuộm quan trọng hoặc siêu cấp

Chúng là thuốc nhuộm vô hại, tức là chúng tạo màu cho các tế bào và chúng vẫn sống. Những vết bẩn này được gọi là màu quan trọng (ví dụ màu xanh trypan để nhuộm đại thực bào) hoặc màu siêu (ví dụ màu xanh lá cây Janus để nhuộm ti thể hoặc màu đỏ trung tính để nhuộm lysosome).

- Phát hiện lipid bằng thuốc nhuộm hòa tan trong chất béo

Osmium tetroxide

Nó nhuộm đen lipid (axit béo không no). Phản ứng này có thể được quan sát bằng kính hiển vi ánh sáng, nhưng vì thuốc nhuộm này có mật độ cao nên nó cũng có thể được quan sát bằng kính hiển vi điện tử.

Sudan III

Nó là một trong những cái được sử dụng nhiều nhất. Thuốc nhuộm này khuếch tán và hòa tan trong các mô, tích tụ bên trong các giọt lipid. Màu đỏ tươi.

Sudan vết đen B

Nó tạo ra độ tương phản tốt hơn những loại trước vì nó có thể hòa tan trong phospholipid và cholesterol. Nó rất hữu ích để phát hiện các hạt azurophilic và các hạt cụ thể của bạch cầu hạt trưởng thành và tiền chất của chúng. Do đó nó xác định bệnh bạch cầu dòng tủy.

- Nhuộm nhóm aldehyde (nhuộm Schiff axit tuần hoàn)

Axit định kỳ Vết bẩn Schiff có thể phát hiện ra ba loại nhóm aldehyde. Họ đang:

- Andehit tự do, hiện diện tự nhiên trong các mô (phản ứng huyết tương).

- Anđehit tạo ra bằng quá trình oxy hóa chọn lọc (phản ứng PAS).

- Anđehit tạo ra bằng phản ứng thủy phân chọn lọc (phản ứng Feulgen).

Phản ứng PAS

Việc nhuộm màu này dựa trên việc phát hiện một số loại carbohydrate, chẳng hạn như glycogen. Axit tuần hoàn Schiff phá vỡ liên kết CC của carbohydrate do quá trình oxy hóa nhóm glycolic 1-2, quản lý để giải phóng các nhóm aldehyde.

Các nhóm aldehyde tự do phản ứng với thuốc thử Schiff và tạo thành hợp chất có màu đỏ tím. Xuất hiện màu đỏ tím chứng tỏ có phản ứng dương tính.

Thử nghiệm này dương tính trong tế bào thực vật, phát hiện tinh bột, cellulose, hemicellulose và peptins. Trong khi ở trong tế bào động vật, nó phát hiện ra mucin, mucoprotein, axit hyaluronic và chitin.

Ngoài ra, nó rất hữu ích trong việc chẩn đoán bệnh bạch cầu nguyên bào lympho hoặc bệnh bạch cầu hồng cầu, trong số các bệnh lý khác của loại tế bào tủy xương.

Trong trường hợp cacbohydrat có tính axit, có thể sử dụng vết màu xanh alcian. Kết quả là dương tính nếu quan sát thấy màu xanh lam nhạt / xanh ngọc.

Phản ứng plasmal

Phản ứng huyết tương cho thấy sự hiện diện của một số aldehyde béo chuỗi dài như palm và stearal. Kỹ thuật này được áp dụng trên các mặt cắt mô học đông lạnh. Nó được xử lý trực tiếp bằng thuốc thử của Schiff.

Phản ứng Feulgen

Kỹ thuật này phát hiện sự hiện diện của DNA. Kỹ thuật này bao gồm việc đưa mô cố định vào quá trình thủy phân bằng axit yếu để sau đó nó phản ứng với thuốc thử của Schiff.

Quá trình thủy phân làm lộ ra các nhóm aldehyde deoxyribose ở liên kết deoxyribose-purine. Thuốc thử Schiff sau đó phản ứng với các nhóm aldehyde được để tự do.

Phản ứng này dương tính trong nhân và âm tính trong tế bào của tế bào. Độ nhạy được chứng minh bằng sự hiện diện của màu đỏ.

Nếu kỹ thuật này được kết hợp với methyl green-pyronine, có thể phát hiện đồng thời DNA và RNA.

- Vết bẩn tế bào đối với cấu trúc protein

Đối với điều này, phản ứng Millon có thể được sử dụng, sử dụng thủy ngân nitrat làm thuốc thử. Cấu trúc có chứa axit amin thơm sẽ nhuộm màu đỏ.

- Nhuộm tế bào sử dụng chất nền để chứng tỏ sự có mặt của enzym

Những vết màu này dựa trên việc ủ mẫu sinh học với một chất nền cụ thể và sản phẩm phản ứng sau đó phản ứng với muối diazo để tạo thành một phức chất có màu.

Xóa

Các enzym này có trong lysosome của một số tế bào máu và có khả năng thủy phân các este hữu cơ giải phóng naphthol. Chất sau tạo thành thuốc nhuộm azo không hòa tan khi nó liên kết với muối diazo, nhuộm màu nơi phản ứng xảy ra.

Có một số chất nền và tùy thuộc vào chất nền nào được sử dụng, các esterase cụ thể và esterase không đặc hiệu có thể được xác định. Loại trước có trong các tế bào chưa trưởng thành của chuỗi dòng tủy và loại sau có trong các tế bào có nguồn gốc đơn bào.

Cơ chất được sử dụng để xác định các esterase cụ thể là: naphthol-AS-D chloroacetate. Trong khi để xác định các esterase không đặc hiệu, một số chất nền có thể được sử dụng như naphthol AS-D acetate, alpha naphthyl acetate và alpha naphthyl butyrate.

Trong cả hai trường hợp, tế bào sẽ nhuộm màu đỏ đậm khi phản ứng dương tính.

Myeloperoxidase

Enzyme này được tìm thấy trong các hạt azurophilic của tế bào bạch cầu hạt và bạch cầu đơn nhân.

Phát hiện của nó được sử dụng để phân biệt các bệnh bạch cầu có nguồn gốc dòng tủy với các bệnh bạch huyết. Tế bào chứa myeloperoxidase chuyển sang màu vàng đất son.

Phosphatases

Các enzym này giải phóng axit photphoric từ các chất nền khác nhau. Chúng khác nhau tùy theo tính đặc trưng của cơ chất, độ pH và hoạt động của chất ức chế và chất khử hoạt tính.

Trong số những chất được biết đến nhiều nhất là các phosphomonoesterase thủy phân các este đơn giản (PO). Ví dụ: phosphatase kiềm và phosphatase axit, cũng như các phosphamidase thủy phân các liên kết (PN). Chúng được sử dụng để phân biệt các hội chứng tăng sinh bạch huyết và để chẩn đoán bệnh bạch cầu tế bào lông.

- Màu sắc trichromic

Mallary-Azan Trichrome

Chúng rất hữu ích để phân biệt tế bào chất của tế bào với các sợi của mô liên kết. Tế bào nhuộm màu đỏ và sợi collagen màu xanh lam.

Masson trichrome

Phương pháp này có cùng công dụng với phương pháp trước nhưng trong trường hợp này, các tế bào nhuộm màu đỏ và các sợi collagen có màu xanh lục.

- Thuốc nhuộm làm ố các bào quan cụ thể

Janus xanh

Nó nhuộm một cách chọn lọc các ty thể.

Muối bạc và axit osmic

Làm bẩn bộ máy Golgi.

Toluidine xanh lam

Vết bẩn cơ thể của Nissi

Muối bạc và PAS

Chúng làm ố các sợi lưới và lớp màng đáy.

Orcein và fuchsin resorcin

Họ nhuộm các sợi đàn hồi. Với lần đầu tiên chúng được nhuộm màu nâu và với màu thứ hai là xanh đậm hoặc tím.

- Các kỹ thuật khác được sử dụng trong hóa tế bào

Sử dụng các chất huỳnh quang hoặc fluorochromes

Có những kỹ thuật sử dụng chất huỳnh quang để nghiên cứu vị trí của cấu trúc trong tế bào. Những phản ứng này được hình dung bằng một kính hiển vi đặc biệt gọi là huỳnh quang. Ví dụ: Kỹ thuật IFI (Miễn dịch huỳnh quang gián tiếp).

Phát hiện các thành phần tế bào bằng hóa tế bào miễn dịch

Những kỹ thuật này rất hữu ích trong y học vì chúng giúp phát hiện một cấu trúc tế bào nhất định và cũng định lượng nó. Phản ứng này dựa trên phản ứng kháng nguyên-kháng thể. Ví dụ: Kỹ thuật ELISA (Enzyme Immuno Assay).

khuyến nghị

- Cần sử dụng phết kiểm soát để đánh giá tính hoạt động tốt của thuốc nhuộm.

- Nên dùng lam tươi để nhuộm tế bào. Nếu không thể, chúng nên được để tránh ánh sáng và bảo quản ở 4 ° C.

- Phải cẩn thận để chất định hình được sử dụng không ảnh hưởng tiêu cực đến chất được khảo sát. Nói cách khác, nó phải được ngăn chặn để không thể chiết xuất hoặc ức chế nó.

- Thời gian sử dụng của chất định hình phải được tôn trọng, vì nói chung nó chỉ nên kéo dài vài giây, vì việc để chất định hình trong thời gian dài hơn có thể làm hỏng một số enzym.

Người giới thiệu

1. "Hóa tế bào." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 30 tháng 6 năm 2018, 17:34 giờ UTC. 9 tháng 7, 2019, 02:53 Có trong: wikipedia.org
2. Villarroel P, de Suárez C. Phương pháp ngâm tẩm kim loại để nghiên cứu sợi lưới cơ tim: Nghiên cứu so sánh. RFM năm 2002; 25 (2): 224-230. Có tại: scielo.org
3. Santana A, Lemes A, Bolaños B, Parra A, Martín M, Molero T. Hóa tế bào của acid phosphatase: xem xét phương pháp luận. Rev Diagn Biol.200; 50 (2): 89-92. Có tại: scielo.org
4. De Robertis E, De Robertis M. (1986). Sinh học tế bào và phân tử. Phiên bản thứ 11. Biên tập Ateneo. Buenos Aires, Argentina.
5. Các công cụ cổ điển để nghiên cứu sinh học tế bào. TP 1 (tài liệu bổ sung) - Sinh học Tế bào. Có tại: dbbe.fcen.uba.ar