SIM VỪA: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC

Các trung SIM là một thạch nửa rắn và khác biệt, được thiết kế đặc biệt để giúp xác định một số vi khuẩn, đặc biệt Enterobacteriaceae. Nó bao gồm triptein, peptone, sắt sulfat, amoni sulfat, natri thiosunfat và agar.

Môi trường này cho phép thực hiện ba thử nghiệm quan trọng: sản xuất hydro sunfua (H ₂ S), sự hình thành indole và tính di động, do đó từ viết tắt SIM ra đời. Do công dụng tuyệt vời, nó không thể vắng mặt trong phòng thí nghiệm vi khuẩn học.

A. Môi trường SIM thương mại B. Thử nghiệm SIM H2S (-), Indole (-) và Motility (+) và Thử nghiệm SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+). Nguồn: A. Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil B. Mfloayza

Không giống như các phương tiện khác, nó phải ở dạng bán rắn để có thể phát hiện được khả năng di chuyển của một số vi khuẩn. Theo nghĩa này, thử nghiệm này hoạt động rất tốt đối với Enterobacteriaceae, nhưng không hiệu quả đối với các que Gram âm không lên men, nơi mà nó được ưu tiên sử dụng các phương pháp khác, chẳng hạn như thả treo.

Môi trường SIM cho phép phân biệt một số tính chất cụ thể đặc trưng của một số vi khuẩn trong mối quan hệ với những vi khuẩn khác. Ví dụ Escherichia coli được phân biệt bằng H ₂ S (-), Indole (+) và nhu động (+), trong khi Proteus mirabilis là H ₂ S (+), indole (-), nhu động (+).

Nền tảng

Đây là một môi trường nuôi cấy được coi là khác biệt, bởi vì việc sử dụng nó phân biệt giữa vi sinh vật có khả năng tạo ra hydro sunfua với những vi sinh vật không có khả năng tạo ra hydro sulfua; Nó cũng làm nổi bật những vi khuẩn hình thành indole từ tryptophan với những vi khuẩn không tạo thành, và cuối cùng phân biệt vi khuẩn di động với vi khuẩn bất động.

Nguồn năng lượng

Giống như bất kỳ môi trường nuôi cấy nào, nó có các yếu tố cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết để các vi sinh vật không đòi hỏi cao có thể phát triển. Các phần tử này được biểu diễn bằng pepton và triptein.

Sự phát triển của vi sinh vật trong môi trường là điều cần thiết để có thể quan sát sự có mặt hay không có các đặc điểm mà môi trường này đánh giá.

Sản xuất hydro sunfua

Chữ S của từ viết tắt SIM đề cập đến việc sản xuất hydro sunfua (H ₂ S). Vi khuẩn có khả năng tạo thành hydro sulfua sẽ lấy lưu huỳnh từ natri thiosulfat.

Khi H ₂ S - khí không màu - được tạo thành, nó sẽ phản ứng với muối sắt có trong môi trường, tạo thành sunfua màu, có thể nhìn thấy rõ ràng (kết tủa đen). Vi khuẩn không hình thành H ₂ S, để lại môi trường có màu ban đầu (màu be).

Sự hiện diện của kết tủa đen có thể cản trở việc giải thích nhu động. Tuy nhiên, hầu hết các Enterobacteriaceae sản xuất H ₂ S được biết là có khả năng di chuyển tích cực, chẳng hạn như Salmonella, Proteus và Citrobacter. Hơn nữa, kết tủa đen bao phủ gần như toàn bộ môi trường cho thấy có chuyển động dương tính.

Hình thành indole

Chữ cái thứ hai của từ viết tắt SIM là "I", đại diện cho sự hình thành của indole.

Theo nghĩa này, triptein, ngoài vai trò là một nguồn dinh dưỡng, còn thực hiện một chức năng cơ bản khác. Loại peptone này rất giàu axit amin gọi là tryptophan, do đó, nó có thể chỉ ra vi khuẩn sản xuất tryptophanase.

Enzyme này chịu trách nhiệm phân cắt axit amin tryptophan, với kết quả là sự hình thành indole (chất không màu), axit pyruvic và amoni.

Đó là lý do tại sao để thể hiện phản ứng này, cần thêm chất làm lộ (thuốc thử Ehrlich hoặc thuốc thử Kovac). Phản ứng với indole, tạo thành chất hình vòng màu đỏ hoa vân anh trên bề mặt thạch. Nếu vòng hoa vân anh xuất hiện, xét nghiệm indole được hiểu là dương tính.

Vi khuẩn không sở hữu enzym này sẽ không hình thành vòng và nó được hiểu là xét nghiệm indole âm tính.

Điều quan trọng cần nhấn mạnh là phép thử indole phải là phép thử cuối cùng được giải thích, vì một khi thuốc thử được thêm vào, môi trường sẽ bị vẩn đục, gây khó khăn cho việc hình dung độ chuyển động.

Động lực

Cuối cùng là chữ "M" của từ SIM có nghĩa là tính năng động. Để đánh giá khả năng vận động, về mặt chiến lược, môi trường này là nửa rắn, vì đặc điểm này rất cần thiết để có thể quan sát xem có hay không sự di chuyển của vi khuẩn. Vi khuẩn có trùng roi là những vi khuẩn cho kết quả xét nghiệm dương tính.

Kết quả dương tính sẽ rõ ràng khi quan sát thấy độ đục, cả trong chất cấy ban đầu và xung quanh nó. Trong khi đó, vi khuẩn không di động chỉ phát triển theo con đường của chất cấy ban đầu.

Sự chuẩn bị

SIM trung bình

Cân 30 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Để yên hỗn hợp trong 5 phút rồi đun đến sôi, khuấy thường xuyên cho đến khi hòa tan hoàn toàn.

Phân phối hỗn hợp trong các ống nghiệm có nút bông và hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Lấy giá ống ra khỏi nồi hấp và để đông đặc theo phương thẳng đứng, sao cho môi trường có dạng khối.

Để bảo quản nó được giữ trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Môi trường đã chuẩn bị phải có pH cuối cùng là 7,3 ± 0,2.

Lúc cấy môi trường phải để ở nhiệt độ phòng. Màu giữa là màu be.

Thuốc thử của Kovac

Đong 150 ml amyl hoặc isoamyl hoặc butyl alcohol. (Sử dụng một trong ba cách được đề cập).

Hòa tan 10 g p-đimetylaminobenzandehit. Sau đó thêm từ từ 50 ml axit clohydric đậm đặc.

Thuốc thử sẵn sàng sử dụng không màu hoặc màu vàng nhạt. Nó nên được giữ trong một chai màu hổ phách và bảo quản trong tủ lạnh. Không sử dụng nếu nó chuyển sang màu nâu sẫm; điều đó chỉ ra rằng nó bị hư hỏng. Thuốc thử này được ưu tiên hơn khi nói đến Enterobacteriaceae.

Thuốc thử của Erlich

Cân 2 g p-đimetylaminobenzandehit hoà tan trong 190 ml rượu etylic và trộn từ từ với 40 ml axit clohydric đặc. Bảo quản theo cách giống như thuốc thử của Kovac. Thuốc thử Ehrlich được sử dụng nhiều nhất cho vi khuẩn không lên men và kỵ khí.

Các ứng dụng

Môi trường SIM được sử dụng nhiều trong các phòng thí nghiệm vi khuẩn học. Ưu điểm của nó là có thể quan sát thấy ba đặc điểm thiết yếu trong cùng một ống trong việc xác định Enterobacteriaceae.

Gieo

Cách chính xác để gieo môi trường này là sử dụng kim, trong đó một phần khuẩn lạc thuần khiết cần nghiên cứu được lấy và đưa vào giữa môi trường theo chiều dọc. Nên thực hiện một động tác lunge. Vết thủng không được chạm đến đáy ống, điều chính xác là chỉ phủ 2/3 độ sâu.

Việc lặp lại chất cấy không được khuyến khích, vì điều này có thể dẫn đến những diễn giải sai về khả năng chuyển động dương tính. Môi trường đã cấy được ủ hiếu khí ở 37 ° C trong 24 giờ.

Sau khi thời gian kết thúc, người ta quan sát xem có sản xuất H ₂ S hay không và đọc tính di động. Cuối cùng, chất indole được tiết lộ, thêm 3 đến 4 giọt thuốc thử Ehrlich hoặc Kovac, trộn nhẹ và giải thích.

Nguồn: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

QA

Để kiểm soát độ vô trùng, một hoặc hai ống được ủ mà không cần cấy trong tủ sấy ở 37 ° C trong 24 giờ. Dự kiến sau thời gian này không có sự phát triển hoặc thay đổi màu sắc.

Để kiểm soát chất lượng, các chủng đã được chứng nhận có thể được sử dụng, chẳng hạn như: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Kết quả mong đợi là: Escherichia coli H ₂ S âm tính, indole và nhu động dương tính, Enterobacter aerogenes chỉ có nhu động dương tính, Salmonella typhimurium H ₂ S và nhu động dương tính, với indole âm tính. Proteus vulgaris đều dương tính, trong khi Klebsiella pneumoniae và Shigella đều âm tính.

Hạn chế

-Một số chủng Morganella morganii, trong số các chủng khác, có thể tạo ra sắc tố màu nâu trong môi trường này do sản xuất melanin, không nên nhầm lẫn điều này với kết tủa của sulfua sắt. Ở những chuyên gia thiếu kinh nghiệm, tình huống này có thể tạo ra dương tính giả khi diễn giải phép thử H ₂ S.

- Vi khuẩn hiếu khí hạn chế sẽ chỉ phát triển trên bề mặt của ống, gây khó khăn cho việc giải thích nhu động.

Người giới thiệu

Phòng thí nghiệm BD. BBL SIM Trung bình. 2008. Có tại: bd.com
Phòng thí nghiệm Neogen. SIM Trung bình. Có tại: foodafety
Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Trung bình. 2009 Có tại: http://f-soria.es
Phòng thí nghiệm Brizuela-Lab. SIM trung bình. Có tại: .brizuela-lab.com
Phòng thí nghiệm Britannia. SIM trung bình. 2015. Có tại: studyres.es/doc
Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

SIM VỪA: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026