PHẢN ỨNG XANTHOPROTEIN: CƠ SỞ, QUY TRÌNH, SỬ DỤNG - HÓA HỌC - 2026

Các phản ứng xanthoprotein là một thủ tục hóa học sử dụng để xác định sự hiện diện hay vắng mặt của các axit amin thơm, chẳng hạn như tyrosine và tryptophan, có thể ở dạng tự do hoặc tạo protein hòa tan, peptide hoặc polypeptide.

Nó cũng đã được sử dụng để phát hiện các chất độc hại trong máu có chứa nhóm benzen trong cấu trúc của chúng. Thử nghiệm này còn được gọi là phản ứng xanthoprotein Becher.

Phản ứng xanthoprotein dương tính Nguồn: Lấy từ video: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Phản ứng xanthoprotein sử dụng axit nitric đậm đặc, đun nóng và một chất kiềm trung hòa. Nếu dung dịch chuyển từ màu vàng sang màu da cam sau khi trung hòa phản ứng thì phép thử được coi là dương tính. Màu sắc quan sát được là do sự hình thành các hợp chất nitơ có nguồn gốc từ quá trình nitrat hóa các nhóm benzen.

Nếu lượng protein tổng số cần định lượng thì phải sử dụng các phương pháp xác định protein khác, chẳng hạn như Biuret.

Phản ứng xanthoprotein được sử dụng chủ yếu khi các chất đang được phân tích mà thành phần hóa học chưa được biết đến. Phản ứng này thường là một phần của tập hợp các thử nghiệm sẽ giúp xác định thành phần hóa học của một chất hoặc chiết xuất cụ thể. Đó là lý do tại sao nó được sử dụng rộng rãi bởi các nhà nghiên cứu.

Mặt khác, phản ứng Becher xanthoprotein được sử dụng để phát hiện các chất phenolic và indole trong máu, giúp dự đoán sự xuất hiện của bệnh thận, trước khi các thông số khác sau này được tăng lên.

Nền tảng

Phản ứng này về cơ bản phát hiện sự hiện diện của nhóm benzen, cả trong axit amin, cũng như trong protein và peptit. Axit nitric tác dụng với vòng benzen của axit amin sở hữu nó, tạo thành hợp chất nitro phenol.

Phản ứng cần nhiệt để thực hiện, nói chung một kết tủa được hình thành làm vẩn đục môi trường, chuyển sang màu trắng đục. Kết tủa có thể có màu trắng hoặc vàng. Cuối cùng, nó yêu cầu một bước kiềm hóa để làm nổi bật màu sắc. Đối với điều này, một cơ sở như natri hydroxit 40% hoặc amoniac được sử dụng.

Phản ứng sẽ được hiểu là dương tính nếu quan sát thấy màu vàng đậm trong quá trình đun nóng hoặc màu da cam đậm khi phản ứng kiềm hóa. Các axit amin mà nó phát hiện chủ yếu là tyrosine và tryptophan.

Phản ứng xanthoprotein. Nguồn: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

Trong trường hợp của phenylalanin, mặc dù là một axit amin thơm nhưng nhân benzen của axit amin này rất khó bị nitro hóa trong một phản ứng đơn giản, do đó, nó sẽ phát ra phản ứng âm hoặc dương yếu.

Nói chung, xét nghiệm xanthoprotein có thể được bổ sung bằng xét nghiệm Hopkins-Cole, được sử dụng để xác định cụ thể tryptophan. Nếu xét nghiệm xanthoprotein dương tính và xét nghiệm Hopkins-Cole âm tính, thì sự hiện diện của tryptophan trong dung dịch đó sẽ bị loại trừ, chỉ ra sự hiện diện chủ yếu của tyrosine. Tương tự, nó cũng có thể được bổ sung với phản ứng Millon để phát hiện tyrosine, trong số những thứ khác.

Phản ứng này cũng có thể được sử dụng trên các mẫu máu, huyết tương hoặc huyết thanh đã khử muối để chẩn đoán nhiễm độc niệu hoặc suy thận. Trong trường hợp này, những gì được tìm kiếm là phát hiện các chất độc hại (phenolic và indole) được tạo ra từ sự phân hủy ruột.

Những chất này có nhóm benzen và do đó cho phản ứng xanthoprotein dương tính, mặc dù chất phản ứng không phải là axit amin cũng không phải là protein.

Quá trình

- Phản ứng xanthoprotein để phát hiện các axit amin có nhóm thơm

Cho 1ml mẫu thử vào ống nghiệm khô, sạch.

-Thêm 0,5 ml axit nitric đặc.

- Ủ hỗn hợp trong nồi cách thủy ở 70 ° C trong 2 phút. Trước đó, chuẩn bị nồi cách thủy ở nhiệt độ đã đề cập.

- Khi lấy ống ra khỏi nồi cách thủy có thể quan sát thấy dung dịch chuyển sang màu trắng đục và có màu trắng vàng nhất định.

-Dung dịch được làm lạnh bằng cách nhỏ nước lạnh vào đáy ống.

-Chuẩn bị được tạo kiềm bằng cách thêm từ từ (từng giọt) dung dịch natri hydroxit 40% cho đến khi có sự thay đổi màu sắc.

-Nếu kết quả là dương tính, một vòng màu cam sẫm sẽ hình thành ở mặt phân cách của chất lỏng.

-Nếu phản ứng là âm tính, sẽ không có sự tạo màu.

- Phản ứng xanthoprotein để phát hiện các chất phenol và indol trong máu

- Nhỏ 5 cc axit trichloroacetic 20% vào 5 cc máu tĩnh mạch, huyết tương hoặc huyết thanh, loại sau được chỉ định nhiều nhất. Trộn đều và lọc.

- 2 cc dịch lọc được lấy và trộn với 0,5 cc axit nitric. Sau đó, nó được làm nóng đến sôi, để ống này được đặt trực tiếp trên ngọn lửa nhẹ hơn trong 30 giây. Nó được làm mát bằng nước và thêm 1,5 trong số 33% natri clorua.

Nó được hiểu như sau:

-Kết quả âm tính: màu hơi vàng.

-Kết quả dương tính (+) màu vàng chanh.

- (++) vàng vàng.

- (+++) vàng đậm đến nâu

Nó cũng có thể được giải thích bằng cách sử dụng thang đo màu Autenrieth tham chiếu, bao gồm các nồng độ khác nhau của kali dicromat. Chất này được chuẩn bị thành 10 trong 10 độ pha loãng từ dung dịch gốc 0,03874%. Mỗi ống thể hiện một tỷ lệ phần trăm.

Giải thích thang đo

Có hai thang điểm diễn giải được gọi là cổ đại và hiện đại. Các giá trị bình thường là:

Bảng cũ: từ 75 đến 85%

Bàn hiện đại: từ 15 đến 25%

Nếu màu của ống nghiệm nằm giữa hai ống chuẩn thì lập trung bình cộng giữa hai lần đo.

Dung dịch chuẩn kali dicromat được chuẩn bị như sau: 7,9 ml kali dicromat 10 N được đo và định mức đến 100 ml trong bình định mức. Các độ pha loãng được tuân theo như trong bảng so màu Autenrieth.

Bảng đo màu Autenrieth. Nguồn: Vásquez A. Phản ứng xanthoprotein. Tạp chí lâm sàng Tây Ban Nha. Năm 1949; 35 (5): 326-327. Có tại: Elsevier

Sử dụng

Việc sử dụng phản ứng xanthoprotein là một phần của bộ các xét nghiệm sinh hóa giúp biết được thành phần hóa học của một số chất chưa biết. Thử nghiệm này góp phần vào việc phân tích hóa học để phát hiện các protein có chứa nhóm benzen trong cấu trúc của chúng.

Phản ứng này được các nhà nghiên cứu sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu khác nhau về các chất được quan tâm.

Theo ý nghĩa này, Vásquez-Jorge và các cộng sự đã sử dụng phản ứng này và các phản ứng khác để khảo sát hàm lượng protein trong chất lỏng chiết xuất từ ​​hàu rừng ngập mặn (Crassostrea rhizophorae).

Tương tự như vậy, Rojas và cộng sự (2009) đã sử dụng một loạt các thử nghiệm, bao gồm cả phản ứng xanthoprotein, để phân tích glycomacropeptides trong các kết tủa whey ricotta.

Mặt khác, phản ứng Becher xanthoprotein đã được Volhard sửa đổi để sử dụng cho các mục đích khác. Trong trường hợp này, để phát hiện các chất phenolic và indole có thể tăng sớm hơn nhiều (vài tuần hoặc vài tháng) trước khi nồng độ urê và nitơ dư trong máu tăng lên.

Những chất thải độc hại này được hình thành từ quá trình phân hủy thức ăn trong ruột.

Những chất này tích tụ trong máu khi chúng không được loại bỏ một cách chính xác, do đó, xét nghiệm xanthoprotein dương tính có thể dự đoán sự khởi đầu sớm của suy thận hoặc tình trạng nhiễm độc niệu.

Tùy thuộc vào cường độ của màu sắc, bạn có thể xác định mức độ cao cấp của nó. Trong trường hợp này, thử nghiệm là định lượng.

Ở những người khỏe mạnh, xét nghiệm này có màu vàng nhẹ, tương ứng với mức bình thường của tryptophan và tyrosine có thể có trong máu.

Trong khi, ở bệnh nhân thận, phản ứng xanthoprotein dương tính mạnh do sự hiện diện của các chất sau: phenol, indole, paracresol, oxyacid thơm, trong số những chất khác.

Các biện pháp phòng ngừa

Thử nghiệm này phải được thực hiện bởi các chuyên gia được đào tạo. Tất cả các quy định về an toàn sinh học phải được xem xét, vì thuốc thử được sử dụng là axit và bazơ ăn mòn.

Nếu vô tình một vài giọt axit nitric rơi trên da hoặc trên móng tay, chúng sẽ chuyển sang màu vàng, vì cả hai cấu trúc đều chứa protein. Ngoài ra, trên da và niêm mạc còn gây bỏng nặng.

Nếu xảy ra tiếp xúc với da, quy trình cần tuân theo là rửa khu vực đó ngay lập tức bằng xà phòng và nước trong khoảng 20 phút.

Nếu bị bắn vào mắt, cần rửa sạch bằng nhiều nước ngọt, cố gắng để mắt mở.

Người giới thiệu

1. "Phản ứng Xanthoprotein" Wikipedia, The Free Encyclopedia. Ngày 2 tháng 9 năm 2019, 17:49 giờ UTC. Ngày 21 tháng 10 năm 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Đặc điểm hóa lý và hàm lượng protein trong dịch chiết của hàu rừng ngập mặn (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Có sẵn trong Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Cô lập và thực hiện GMP bằng cách kết tủa whey với axit trichloroacetic. Cient. (Maracaibo) năm 2009; 19 (3): 295-302. Có sẵn tại: ve.scielo.
4. Vásquez A. Phản ứng xanthoprotein. Tạp chí lâm sàng Tây Ban Nha. Năm 1949; 35 (5): 326-327. Có tại: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Phản ứng của Becher và Andrewes trong phẫu thuật tiết niệu. Dịch vụ Tiết niệu của Bệnh viện Tây Ban Nha. Tạp chí tiết niệu Argentina 395-404