BENGAL ROSE: CƠ SỞ LÝ LUẬN, QUY TRÌNH, KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG - THUỐC - 2025

Rose Bengal là một xét nghiệm trong phòng thí nghiệm dựa trên phản ứng kháng nguyên-kháng thể để chẩn đoán bệnh brucella. Kỹ thuật này cho phép phát hiện các kháng thể đặc hiệu chống lại vi khuẩn Brucella abortus trong các mẫu huyết thanh người. Kết quả có thể được báo cáo định tính hoặc bán định lượng.

Hình thức định tính thể hiện bệnh nhân dương tính hay âm tính với xét nghiệm, tức là có kháng thể hay không. Trong khi đó, báo cáo bán định lượng được báo cáo bằng IU / ml và cho biết lượng kháng thể hiện có gần đúng. Cần lưu ý rằng kháng thể sẽ chỉ được tạo ra nếu bệnh nhân đã tiếp xúc với vi sinh vật.

Phản ứng Rose Bengal trong đĩa ngưng kết. Nguồn: lấy từ video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY

Do tính đơn giản, độ nhạy và độ đặc hiệu cao, đây là một trong những kỹ thuật ngưng kết huyết thanh được sử dụng nhiều nhất trong y học như một xét nghiệm ban đầu để chẩn đoán bệnh này.

Một số nhà nghiên cứu đã so sánh hiệu quả của xét nghiệm Rose Bengal với các kỹ thuật khác, chẳng hạn như ngưng kết huyết thanh (kháng nguyên sốt) và nhận thấy rằng mặc dù có mối tương quan tốt, họ đã thấy những trường hợp cá biệt trong đó xét nghiệm kháng nguyên sốt âm tính và Rose de Pháo sáng dương.

Sự khác biệt thu được là do những bệnh nhân này có phân lớp kháng thể IgG chống lại Brucella abortus với khả năng liên kết tốt hơn ở pH axit, do đó họ có thể phản ứng với thuốc thử Rose Bengal nhưng không phản ứng với kháng nguyên sốt.

Theo nghĩa này, họ đã đề xuất rằng thuốc thử của kỹ thuật kháng nguyên sốt được sửa đổi thành pH có tính axit để họ có thể phát hiện ra loại trường hợp này.

Nền tảng

Thuốc thử Rose Bengal bao gồm một huyền phù kháng nguyên. Nó được tạo thành từ chủng Brucella abortus S99, được pha loãng trong dung dịch đệm axit lactat (pH 3,6), cộng với phenol và thuốc nhuộm Rose Bengal.

Do đó, trong mẫu được tìm kiếm là các kháng thể kháng Brucella, nếu có các kháng thể này, chúng sẽ phản ứng với kháng nguyên của thuốc thử và sẽ quan sát thấy phản ứng ngưng kết có thể nhìn thấy trên bề mặt vĩ mô. Xét nghiệm phát hiện kháng thể IgM hoặc kháng thể IgG.

Điều này có nghĩa là nó có thể phát hiện bệnh ở cả giai đoạn cấp tính khi kháng thể IgM chiếm ưu thế hoặc ở giai đoạn mãn tính khi kháng thể IgG chiếm ưu thế.

Điều này thể hiện một ưu điểm vì nó làm tăng độ nhạy của xét nghiệm, nhưng đồng thời cũng là nhược điểm vì nó không phân biệt giữa giai đoạn này và giai đoạn khác, vì phản ứng với kháng thể IgM và IgG là giống hệt nhau.

Thử nghiệm phải luôn được thực hiện cùng với kiểm chứng âm tính và kiểm chứng dương tính. Đối chứng âm tính chứa huyết thanh động vật không có kháng thể và đối chứng dương tính chứa huyết thanh có nguồn gốc động vật với 50 IU / ml kháng thể kháng Brucella.

Sử dụng

Bệnh Brucellosis là một căn bệnh nguy hiểm có xu hướng chuyển sang mãn tính và nguy hiểm, vì vậy điều quan trọng là cần được chẩn đoán sớm. Đây là một bệnh động vật và con người có thể bị nhiễm bệnh khi tiếp xúc trực tiếp với vật liệu bị ô nhiễm, những người dễ bị tổn thương nhất là bác sĩ thú y và người chăm sóc động vật.

Nhiễm trùng cũng có thể xảy ra khi ăn thịt sống bị nhiễm bệnh, trong số các hình thức nhiễm trùng khác.

Bệnh này tấn công cục bộ hoặc toàn thân. Dạng toàn thân là nghiêm trọng nhất, vì các cơ quan khác nhau có thể bị ảnh hưởng, bao gồm hệ thống nội mô lưới (gan, lá lách, tủy xương), da (viêm mô tế bào và bệnh hạch), hệ hô hấp (viêm phổi), hệ thống cơ xương (viêm khớp, viêm xương cùng và viêm cột sống), trong số những bệnh khác.

Xét nghiệm Rose Bengal là một kỹ thuật rất hữu ích để thực hiện tầm soát ban đầu, vì nó rất rẻ, dễ sử dụng và có độ đặc hiệu và độ nhạy cao.

Các trường hợp âm tính giả và dương tính giả rất hiếm, và có thể xảy ra ở những người có hiệu giá kháng thể rất thấp (<25 IU / ml) hoặc cực cao (> 1000 IU / ml).

Quá trình

nguyên vật liệu

-Rose Bengal Kit

- Tấm kết hợp nền trắng

-50 µl pipet

-Rotator (tùy chọn)

-Vortex

Kỹ thuật (phương pháp định tính)

Bộ dụng cụ Rose Bengal thương mại đi kèm với thuốc thử sẵn sàng sử dụng.

- Kiểm tra thuốc thử trước khi bắt đầu làm việc.

-Các đĩa ngưng kết có vẽ các hình tròn, mỗi đĩa cho một mẫu khác nhau. Sử dụng 3 vòng tròn, hình tròn đầu tiên cho đối chứng tiêu cực, thứ hai cho mẫu và thứ ba cho đối chứng dương tính.

- Nhỏ một giọt hoặc 50 µl mẫu chứng và mẫu vào vòng tròn tương ứng của chúng.

- Trộn thuốc thử Rose Bengal bằng cách sử dụng xoáy. Đặt một giọt bên cạnh những cái đã đặt trước đó.

-Trộn bằng tăm gỗ (dùng một cái cho mỗi mẫu vật hoặc đối chứng). Tạo chuyển động tròn và dàn trải để bạn bao phủ toàn bộ hình tròn.

Nguồn: hình ảnh lấy từ Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Đã chỉnh sửa bố cục hình ảnh.

-Đặt đĩa lên máy quay tự động ở tốc độ 80 đến 100 vòng / phút hoặc quay bằng tay trong 4 phút. Đọc bằng chứng vào cuối thời gian này.

-Xác minh rằng các điều khiển đã đưa ra như mong đợi. So sánh phản ứng của mẫu thử với mẫu chứng. Báo cáo là dương tính nếu quan sát thấy có ngưng kết và là âm tính nếu không có ngưng kết.

Xét nghiệm dương tính cho thấy bệnh nhân có lượng kháng thể kháng Brucella bằng hoặc lớn hơn 25 IU / ml.

Diễn giải phản ứng dương tính (có ngưng kết) và phản ứng âm tính (không ngưng kết). Nguồn: Citrulline. Đã chỉnh sửa hình ảnh.

Kỹ thuật (bán định lượng)

Nếu trong phản ứng định tính, mẫu dương tính mạnh thì có thể bán định lượng. Đối với điều này, các dung dịch pha loãng kép nối tiếp của mẫu được thực hiện bằng dung dịch nước muối sinh lý. Quy trình được mô tả trước đây được thực hiện với mỗi độ pha loãng.

Nó cũng được giải thích bằng cách quan sát vĩ mô ngưng kết. Kết quả sẽ là hiệu giá của độ pha loãng cao nhất mà kết quả dương tính được quan sát.

Công thức sau đây được sử dụng để tính giá trị gần đúng của kháng thể kháng Brucella:

25 IU / ml x hiệu giá phản ứng = IU / ml

Ví dụ, nếu bệnh nhân trong xét nghiệm bán định lượng dương tính ở độ pha loãng ½, ¼ và 1/8 và bắt đầu âm tính từ độ pha loãng 1/16 trở đi, điều này có nghĩa là bệnh nhân có hiệu giá là 8 .

Áp dụng công thức:

25 IU / ml x 8 = 200 IU / ml

QA

- Bộ dụng cụ có ngày hết hạn và nó phải được tôn trọng. Không nên sử dụng nếu thuốc thử đã hết hạn.

- Sử dụng lâu dài, đảm bảo rằng thuốc thử không chứa các hạt rắn, vì đây là dấu hiệu của sự hư hỏng.

-Giữ từ 2 đến 8 ° C.

-Không được đóng băng, hành vi này làm hỏng thuốc thử không thể khắc phục được.

-Luôn thực hiện thử nghiệm cùng với các đối chứng âm tính và dương tính.

-Kỹ thuật dung nạp các mẫu huyết thanh có nồng độ lipid máu và tán huyết nhất định, tuy nhiên không nên sử dụng quá mức lipid huyết và huyết thanh tán huyết, cả hai điều kiện đều làm thay đổi kết quả xét nghiệm.

-Luôn đưa thuốc thử về nhiệt độ phòng trước khi bắt đầu phân tích.

-Không giải thích các phản ứng kéo dài hơn thời gian khuyến cáo, vì điều này tạo ra báo cáo dương tính giả, vì sau một thời gian nhất định, thuốc thử kết tủa, mô phỏng phản ứng dương tính.

-Kỹ thuật nhạy 100% và độ đặc hiệu 98%.

-Sau khi bán định lượng 1000 IU / ml có khả năng quan sát thấy hiệu ứng prozone (âm tính giả do lượng kháng thể dư thừa so với lượng kháng nguyên).

Người giới thiệu

1. Rubio M, Barrio B và Díaz R. Giá trị của Rosa de Bengala, Coombs và các xét nghiệm điện di phản ứng miễn dịch để chẩn đoán các trường hợp mắc bệnh brucella ở người trong đó ngưng kết huyết thanh âm tính. Khoa Vi sinh. Dịch vụ vi sinh lâm sàng. Phòng khám Đại học. Đại học Navarra. 406-407. Có tại: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
2. "Bệnh Brucellosis." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 6 tháng 12 năm 2019, 14:37 giờ UTC. Ngày 18 tháng 12 năm 2019, 18:09 en.wikipedia.org.
3. Phòng thí nghiệm Monlab. Monlab Bengal Rose - thử nghiệm. 2016. Có tại: monlab.es/
4. Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Linh mục Peru. Med. Exp. Y tế công cộng 1997; 14 (1): 63-66. Có tại: scielo.org
5. Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Theo dõi phản ứng chuỗi polymerase, huyết thanh và lâm sàng của một gia đình mắc bệnh brucella. Linh mục. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Có sẵn tại: scielo.conicyt.