SAFRANIN: ĐẶC ĐIỂM, CÔNG DỤNG, KỸ THUẬT, ĐỘC TÍNH - HÓA HỌC - 2025

Các safranin là một loại thuốc nhuộm meriquinoide, đặt tên theo cấu trúc hóa học của nó có hai vòng benzenoid và 2 chiếc nhẫn quinoid, những thứ hai là những người cung cấp màu đỏ.

Nó còn được gọi là dimethyl safranin hoặc base đỏ 2 ở dạng ngắn, vì tên khoa học của nó là 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-phenyl-phenaziniumchloro dimethyl safranin và công thức hóa học là C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Cấu trúc hóa học của safranin chỉ ra vòng benzenoid và quinoid / Dung dịch nước của safranin. Nguồn: NEUROtiker do ThS. Marielsa Gil / LHcheM

Có một biến thể được gọi là trimethyl-safranin nhưng không có sự khác biệt đáng kể giữa hai chất.

Safranin là một chất nhuộm đơn sắc và tùy thuộc vào đặc điểm của công thức hóa học, là một chất mang điện tích dương. Do đó, nó có ái lực với các cấu trúc tích điện âm. Những cấu trúc này sẽ bị nhuộm đỏ.

Tính chất này giúp nó có thể ứng dụng trong nhiều kỹ thuật mô học để nhuộm các cấu trúc tế bào khác nhau, cả của sinh vật nhân thực và sinh vật nhân sơ.

Safranin được sử dụng như một chất cản quang trong các kỹ thuật quan trọng và nổi tiếng để sử dụng thường quy trong vi khuẩn học. Các kỹ thuật này là: nhuộm Gram-Hucker, nhuộm Schaeffer Fulton để tìm bào tử hoặc nhuộm nang vi khuẩn, trong số những kỹ thuật khác.

nét đặc trưng

Màu của nghệ tây (một loại gia vị thu được từ các nhụy của hoa Crocus sativus) là nguồn cảm hứng để đặt tên cho loại thuốc nhuộm này. Từ thuật ngữ nghệ tây có tên là safranin. Điều này là do sự tương đồng lớn giữa màu của nghệ tây và màu mà loại thuốc nhuộm này cung cấp.

Safranin có sẵn dưới dạng tinh thể hoặc bột, cả hai dạng trình bày đều có thể hòa tan trong nước. Thuốc nhuộm safranin không mùi. Cấu trúc vết bẩn có màu đỏ. Các cấu trúc thu hút thuốc nhuộm safranin được gọi là safranophile.

Cấu trúc của safranin rất phức tạp, nó có hai vòng benzenoid ở hai đầu và ở trung tâm là hai vòng quinoid nơi tìm thấy cation N ⁺ . Trung tâm của cấu trúc là hệ thống phụ trách cung cấp màu sắc. Do đặc tính này, chất tạo màu này được xếp vào loại II.

Sử dụng

Safranin được sử dụng để nhuộm các cấu trúc khác nhau. Đặc biệt làm nổi bật các tế bào Kulchitsky có trong đường tiêu hóa, còn được gọi là tế bào enterochromaffin.

Nó có khả năng nhuộm các vi sinh vật thuộc họ Rickettsiaceae. Tương tự như vậy, nó được sử dụng trong các kỹ thuật khác nhau, chẳng hạn như phương pháp Koster, một phương pháp được sửa đổi được sử dụng để nhuộm vi khuẩn thuộc giống Brucella.

Mặt khác, safranin được sử dụng trong kỹ thuật nhuộm bào tử Schaeffer Fulton và nhuộm Gram-Hucker. Trong cả hai kỹ thuật, safranin hoạt động như một chất nhuộm tương phản.

Trong lần đầu tiên, các bào tử có màu xanh lục malachit và các cấu trúc còn lại có màu đỏ bởi safranin. Ở bước thứ hai, vi khuẩn Gram âm làm mất màu của tinh thể tím ở bước đổi màu, do đó safranin là chất làm cho vi khuẩn Gram âm chuyển màu đỏ.

Ngoài ra, safranin được sử dụng trong vi khuẩn học để chuẩn bị môi trường thạch Brucella với độ pha loãng của safranin 1: 5000. Môi trường này dùng để phân biệt loài Brucella suis với các loài còn lại. Brucella melitensis và Brucella abortus phát triển trên môi trường này nhưng B. suis bị ức chế.

Trong lĩnh vực công nghiệp nông nghiệp, safranin đã được sử dụng ở mức 2,25% và pha loãng 1:10 để nhuộm mẫu thân cây mía.

Loại cây này thường bị ảnh hưởng bởi vi khuẩn Leifsonia xyli subsp. xyli, làm hỏng xylem của cây. Các thân cây nhuộm màu được đánh giá để xác định chức năng của các mạch xylem.

Các kỹ thuật trong lĩnh vực vi khuẩn học

Castañeda vết để nhuộm r

Máu hoặc phết tế bào mô được đặt trong dung dịch đệm (dung dịch đệm phosphat pH 7,6). Để khô tự nhiên rồi phủ xanh methylen trong 3 phút và chống thấm bằng safranin. Rickettsiae có màu xanh lam, tương phản với nền đỏ.

Đã sửa đổi vết Koster cho

Một vết bẩn được tạo ra và đốt trong bật lửa để cố định. Sau đó, nó được bao phủ bởi một hỗn hợp gồm 2 phần safranin nước bão hòa với 3 phần dung dịch KOH 1 mol / L, trong 1 phút. Tiến hành rửa bằng nước cất và được pha bằng xanh metylen carbolic 1%.

Nếu mẫu chứa vi khuẩn thuộc giống Brucella, chúng sẽ có màu cam trên nền xanh lam.

Nhuộm nang vi khuẩn

Hỗn hợp huyền phù vi khuẩn được tạo ra với mực Ấn Độ và thêm safranin. Dưới kính hiển vi sẽ xuất hiện quầng đỏ bao quanh mỗi nang vi khuẩn với nền đen.

Nhuộm bào tử

Sự lây lan được thực hiện bằng huyền phù vi khuẩn. Sau đó, nó được cố định để làm nóng. Nó được bao phủ bởi 5% malachit xanh, thường xuyên bắt lửa cho đến khi phát ra hơi. Quá trình này được lặp lại trong 6-10 phút. Cuối cùng, nó được rửa sạch bằng nước và được sao lại với 0,5% safranin trong 30 giây. Trực khuẩn nhuộm đỏ và bào tử màu xanh lục.

Vết Gram-Hucker

Phết được tạo bằng huyền phù vi khuẩn và cố định trong nhiệt. Che phiến kính bằng thuốc tím pha lê trong 1 phút. Sau đó, lugol được đặt dưới dạng dung dịch hòa tan trong 1 phút. Sau đó, nó được tẩy trắng bằng cồn axeton và cuối cùng được sao bằng safranin trong 30 giây.

Vi khuẩn Gram dương nhuộm tím xanh và vi khuẩn Gram âm đỏ.

Một số phòng thí nghiệm đã ngừng sử dụng kỹ thuật Gram-Hucker để áp dụng kỹ thuật Gram-Kopeloff đã được sửa đổi. Sau này, safranin được thay thế bằng fuchsin cơ bản. Điều này là do safranin nhuộm yếu các loài thuộc các chi Legionella, Campylobacter và Brucella.

Các kỹ thuật trong lĩnh vực mô học

Nhuộm tế bào Kulchitsky (enterochromaffins)

Các phần mô từ ống tiêu hóa được nhuộm bằng bạc clorua. Sau đó nó được khử màu bằng natri thiosunfat và cuối cùng được tạo màu bằng safranin.

Tế bào Kulchitsky được phân biệt bởi sự hiện diện của các hạt màu nâu đen.

Vết viêm xương khớp

Vì safranin có điện tích dương, nó liên kết rất tốt với các nhóm carboxyl và sulfat của glycosaminoglycans. Đây là một phần của proteoglycan tạo nên sụn khớp. Theo nghĩa này, khi nhuộm bằng safranin O có thể nhận biết được có mất sụn hay không.

Sự mất mát của mô sụn có thể được đo bằng thang Mankin hay còn gọi là thang đo viêm xương khớp.

Kỹ thuật này được giải thích dưới đây: phần mô học được nhúng vào khay với dung dịch sắt hematoxylin của Weigert, sau đó cho qua cồn axit và rửa sạch bằng nước.

Tiếp tục quá trình tạo màu bằng cách nhúng tờ giấy vào màu xanh lục nhanh, nó được rửa bằng axit axetic và bây giờ nó được ngâm trong safranin O. Để kết thúc quá trình, nó được khử nước bằng cách sử dụng rượu ở các nồng độ khác nhau theo thứ tự tăng dần. Bước cuối cùng cần xylene hoặc xylen để làm rõ mẫu.

Các slide được điều hòa bằng Canada balsam hoặc tương tự để có thể quan sát được dưới kính hiển vi.

Với kỹ thuật này, các nhân được nhuộm màu đen, xương có màu xanh lục và sụn nơi các proteoglycan được tìm thấy có màu đỏ.

Vết bẩn để xác định tảo vĩ mô

Pérez và cộng sự năm 2003 đã đề xuất một kỹ thuật đơn giản và rẻ tiền để nhuộm tảo vĩ mô. Các mẫu được chuẩn bị trong các phần mô học parafin. Các mặt cắt được cố định bằng 1% glycerin, để chúng khô hoàn toàn. Sau đó, nó được đặt trong xylol để loại bỏ parafin.

Phần này được bù nước bằng cách cho nó đi qua một loạt khay chứa etanol ở các mức độ nồng độ khác nhau (thứ tự giảm dần), trong 2 phút mỗi khay.

Sau đó, nó được nhuộm trong 5 phút với hỗn hợp 3: 1 gồm 1% safranin với 1% toluidine xanh lam, cả hai đều được chuẩn bị với 50% etanol. Ba giọt axit picric được thêm vào hỗn hợp, hoạt động như một chất kết dính.

Sau đó, nó được khử nước bằng cách đi qua các khay cồn một lần nữa, nhưng lần này là theo cách tăng dần. Cuối cùng, nó được rửa bằng xylol và mẫu được chuẩn bị bằng Canada balsam để được quan sát.

Độc tính

May mắn thay, safranin là một loại thuốc nhuộm không gây nguy hiểm cho những người xử lý nó. Nó là một chất tạo màu vô hại, không gây ung thư và không dễ cháy.

Tiếp xúc trực tiếp với da hoặc niêm mạc có thể gây đỏ nhẹ tại chỗ, không có biến chứng lớn. Đối với điều này, bạn nên rửa khu vực bị ảnh hưởng với nhiều nước.

Người giới thiệu

1. García H. Colorante safranina O. Kỹ thuật viên y tế, 2012; 1 (2): 83-85. Có tại: medigraphic.com
2. Gil M. Nhuộm Gram: nền tảng, vật liệu, kỹ thuật và công dụng. 2019. Có sẵn tại: liveseder.com
3. Gil M. Nhuộm bào tử: cơ sở lý luận, kỹ thuật và công dụng. 2019. Có sẵn tại: liveseder.com
4. Safranina. " Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 7 tháng 3 năm 2017, 10:39 giờ UTC. 3 tháng 8, 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Kỹ thuật nhuộm hữu ích trong việc giải thích giải phẫu của Gracilariopsis tenuifrons và Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Hành động Bot. Venez. Năm 2003; 26 (2): 237-244. Có tại: scielo.org.
6. Nhà thờ Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Mối quan hệ về chức năng của các tàu xylem và sự hiện diện của Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Bảo vệ người ăn chay. Năm 2007; 22 (1): 65-65. Có tại: scielo.sld