NHUỘM HEMATOXYLIN-EOSIN: ĐẶC ĐIỂM, CÔNG DỤNG, KỸ THUẬT - HÓA HỌC - 2026

Các hematoxylin - eosin là một kỹ thuật nhuộm màu bằng cách sử dụng sự kết hợp của thuốc nhuộm hematoxylin và eosin. Cặp thuốc nhuộm này tạo thành một bộ đôi hoàn hảo, vì hematoxylin đóng vai trò là thuốc nhuộm cơ bản và eosin là thuốc nhuộm axit.

Việc chỉ định thuốc nhuộm axit hoặc bazơ không đề cập đến độ pH mà chúng thu được trong dung dịch, mà nói lên tỷ lệ phổ biến về điện tích anion hoặc cation mà chúng sở hữu hoặc theo vị trí của nhóm mang màu.

Hematoxylin - eosin (HE) biểu mô trụ nhuộm màu Nguồn: Todd Straus và Vladimir Osipov

Theo nghĩa này, hematoxylin được coi là thuốc nhuộm cơ bản (cation) và do đó có ái lực với các cấu trúc axit, chẳng hạn như nhân tế bào. Trong khi eosin, là một chất nhuộm axit (anion), có ái lực với kiềm hoặc các cấu trúc cơ bản, chẳng hạn như tế bào chất của tế bào.

Vì lý do này, sự kết hợp của thuốc nhuộm này được sử dụng rộng rãi để nhuộm mô, vì nó cho phép phân biệt rõ ràng nhân và tế bào. Nhân nhuộm màu xanh đậm hoặc tím và tế bào chất màu hồng.

Nhuộm Hematoxylin-eosin là một trong những kỹ thuật nhuộm được sử dụng rộng rãi nhất trong lĩnh vực mô học và tế bào học, do dễ xử lý và chi phí thấp. Nó được sử dụng để hình dung các tế bào, các sợi thần kinh dày và sự hiện diện của một số vi sinh vật trong mô, chẳng hạn như: ký sinh trùng, nấm và vi khuẩn, trong số những loại khác.

nét đặc trưng

Hematoxylin

Hematoxylin là một loại thuốc nhuộm trung tính. Tuy nhiên, thành phần cung cấp màu sắc (mang màu) nằm ở trung tâm cation hoặc cơ bản của phân tử. Do đó nó có ái lực với các cấu trúc axit. Công thức hóa học của nó là C ₁₆ H ₁₄ O ₆ và tên khoa học của nó là 7,11b-dihydroindeno chromene-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Nó chủ yếu làm bẩn nhân tế bào, vì chúng rất giàu axit nucleic. Nó cũng có thể nhuộm các tạp chất trong tế bào chất có nguồn gốc virut.

Để hematoxylin có thể nhuộm màu, nó phải ở trạng thái bị oxy hóa và liên kết với kim loại. Chất sau sẽ đóng vai trò cố định vào mô, tức là nó sẽ hoạt động như một chất kết dính.

Khi hematoxylin bị oxy hóa, nó được gọi là hematein. Quá trình oxy hóa đạt được bằng cách tiếp xúc với oxy (lão hóa) của thuốc thử hoặc bởi các chất giúp quá trình oxy hóa của nó (oxy hóa hóa học).

Eosin

Eosin là một loại thuốc nhuộm có màu đỏ hoặc hồng. Nó không hòa tan trong nước mặc dù có một phiên bản hòa tan trong nước. Nói chung, eosin được điều chế bằng cách hòa tan trong rượu (etanol 95 °).

Nó nhuộm tế bào, sợi cơ, bào quan tế bào chất và collagen, nhưng không nhuộm nhân tế bào. Điều này là do nó mang điện tích âm, do đó, nó có ái lực với các cấu trúc tích điện dương.

Có hai loại eosin "Y" và "B". Eosin "Y" được gọi là eosin màu vàng. Tên khoa học của nó là tetrabromo fl uorescein và công thức hóa học của nó là C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

Mặt khác, eosin "B" đôi khi được gọi là erythrosine B màu xanh lam. Tên khoa học của nó là dibromodynitro fl uorescein và công thức là C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Cả hai đều rất giống nhau và sự khác biệt giữa việc sử dụng cái này hay cái kia không thực sự đáng chú ý. Tuy nhiên, phổ biến nhất là eosin "Y".

Eosin có đặc tính phân biệt giữa tế bào sống và tế bào chết, vì nó chỉ có khả năng vượt qua màng để nhuộm tế bào chất của nó khi tế bào chết, làm cho tế bào chất của tế bào không có màu nếu nó vẫn còn sống.

Các ứng dụng

Nhuộm sợi thần kinh

Các sợi thần kinh dày có thể được nhuộm và xác định bằng hematoxylin-eosin. Tuy nhiên, nó không hữu ích cho việc nhuộm các sợi thần kinh mỏng, vì cần phải nhuộm bạc để hình dung sợi thần kinh sau.

Vết bẩn phần da mô học

Khi nhuộm lớp sừng của da, thuốc nhuộm hoạt động là eosin, vì ở cấp độ này các tế bào không có nhân.

Trong lớp hạt của da, hematoxylin nhuộm mạnh các hạt keratohyalin bên trong tế bào hạt. Ngược lại, lớp gai của da được nhuộm hematoxylin yếu, trong khi lớp đáy hoặc lớp mầm bị nhuộm khá nhiều.

Eosin nhuộm màu tế bào chất của tất cả các tế bào và cường độ của màu sắc có thể thay đổi theo từng lớp.

Nhuộm Hematoxylin-eosin mẫu phân

Gómez và cộng sự, năm 2005 đã chứng minh rằng phương pháp nhuộm hematoxylin-eosin có hiệu quả hơn trong việc xác định các trường hợp nhiễm amip do Entamoeba histolytica và Entamoeba dispar so với phương pháp soi tươi (nước muối và lugol) ở bệnh nhân tiêu chảy cấp tính.

Nó cũng được chứng minh là có độ nhạy cao trong việc phát hiện bệnh thực hồng cầu (amip có hồng cầu bị nhấn chìm).

Nhuộm các phần mô học để chẩn đoán nhiễm trùng

Walwyn và cộng sự, năm 2004 đã đề xuất việc sử dụng các vết bẩn mô học để phát hiện các vi sinh vật gây nhiễm trùng.

Sử dụng phương pháp nhuộm hematoxylin-eosin, họ có thể hình dung ra các bệnh nhiễm trùng do Clostridium, Actinomyces, spirillae hoặc Candida gây ra. Họ cũng có thể quan sát thấy sự hiện diện của ký sinh trùng Sarcoptes Escapebiei trong các phần da và sự bao phủ của virus bởi cytomegalovirus và herpes trong các phần của các mô khác nhau.

Kỹ thuật

Đối với các mẫu mô học

Nhuộm phần mô học trải qua một loạt các bước. Điều đầu tiên là lấy phần mô học. Loại này phải được tẩy lông để sau này có được các vết cắt (siêu mịn) bằng microtome. Kỹ thuật này bao gồm các bước sau:

1-Loại bỏ parafin dư thừa : đối với điều này, bạn có thể sử dụng xylol hoặc Heme-D, ngâm trong 3-5 phút.

2-Sự hấp thụ nước của mẫu: điều này đạt được bằng cách ngâm mẫu trong các nồng độ cồn (etanol) khác nhau theo thứ tự giảm dần (100 °, 90 °, 70 °). Trong mọi trường hợp trong 7 phút.

3-Loại bỏ cồn dư thừa: cho nó được ngâm trong nước trong 7 phút.

4-Nhuộm bằng hematoxylin: mẫu được ngâm từ 6-10 phút trong khay chứa hematoxylin. Thời gian phơi phụ thuộc vào kích thước và độ dày của mẫu.

5-Loại bỏ hematoxylin dư thừa: nó được rửa bằng nước trong 5 phút và sau đó một quá trình nhanh chóng (10-20 giây) được thực hiện qua cồn axit. Sau đó nó được rửa bằng nước một lần nữa trong 5 phút. Sau đó, nó được ngâm trong etanol ở 96 ° trong 1 phút.

6-Nhuộm bằng eosin: đối với trường hợp này, mẫu được ngâm 5 phút trong khay eosin.

7-Làm mất nước của mẫu : để làm điều này, nó đi qua các khay cồn (etanol), nhưng lần này theo thứ tự tăng dần. (70 °, 90 °, 100 °). (Lần lượt là 5 giây, 5 giây, 1 phút).

8-Làm rõ mẫu : đối với điều này, nó được tiếp xúc với xylol trong 5-10 phút và làm khô để niêm phong vĩnh viễn bằng Canada balsam hoặc vật liệu tương tự khác.

Đối với mẫu phân đang tìm kiếm

Một vết bẩn được thực hiện trên một phiến kính với phân của bệnh nhân và cố định bằng cồn 80% trong 5 phút. Tấm giấy được ngâm trong hematoxylin trong 5 phút và ngay lập tức rửa sạch bằng nước.

Sau đó, nó nhanh chóng được ngâm trong rượu có tính axit và sau đó trong nước amoniac. Nó được rửa sạch bằng nước. Nó được tô màu trong 5 phút trong eosin. Mẫu được khử nước như đã giải thích ở phần trước và cuối cùng được tráng bằng xylen.

Chuẩn bị thuốc thử

- Hematoxylin

Trong một lít nước cất hòa tan 50 gam kali hoặc amoni nhôm sunfat. Khi hòa tan hoàn toàn, thêm 1 gam hematoxylin kết tinh. Khi hòa tan hoàn toàn, 1 g axit xitric được thêm vào cùng với 50 g clohydrat và 0,2 g natri iotat.

Hỗn hợp được đun sôi trong 5 phút, sau đó để nguội và lọc để loại bỏ các hạt rắn còn sót lại. Thuốc thử được chuẩn bị như vậy có thể được sử dụng ngay lập tức.

- Eosin

Nó có thể được chuẩn bị với một cơ sở cồn hoặc với một cơ sở nước.

Eosin có cồn

Trong 100 ml etanol ở 95 ° hòa tan 0,5 gam eosin "Y". Sau đó thêm một vài giọt axit axetic băng.

2% eosin dạng nước

Trong 1250 ml nước cất hòa tan 25 gam eosin "Y" tan trong nước. Sau đó thêm một vài giọt axit axetic băng.

Rượu axit

Định mức 0,5 ml axit clohydric đậm đặc và định mức đến 100 ml bằng cồn tuyệt đối.

Nước amoniac

Đong 0,5 mL amoniac đậm đặc và thêm nước cất đến 100 mL.

Người giới thiệu

1. Navarrete, G. Mô học của da. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Có tại: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Xác định Entamoeba histolytica / E. Loại bỏ amip bằng kỹ thuật tươi so với nhuộm bằng hematoxylin-eosin trong bệnh tiêu chảy cấp. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Có tại: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Tính hữu ích của các kỹ thuật mô học để chẩn đoán nhiễm trùng trong các mẫu giải phẫu. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Có tại: scielo.sld
5. Thuốc thử PanReac AppliChem ITW. Vết Hematoxylin-eosin. 2017, Tây Ban Nha. Có tại: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 7 tháng 11 năm 2018, 08:18 giờ UTC. 4 tháng 8, 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 3 tháng 5 năm 2019, 11:23 giờ UTC. 4 tháng 8, 2019, 22:48 wikipedia.org