BAIRD PARKER AGAR: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các thạch Baird Parker là một môi trường chọn lọc rắn và văn hóa khác biệt. Nó được tạo ra vào năm 1962 để phát hiện và đếm các tụ cầu dương tính với coagulase (Staphylococcus aureus).

Nó được tạo thành từ quá trình thủy phân từ tụy của casein, chiết xuất thịt, chiết xuất nấm men, clorua liti, glycine, natri pyruvate, kali tellurite, thạch và nhũ tương lòng đỏ trứng.

Khuẩn lạc Staphylococcus aureus điển hình trên thạch Baird Parker. Nguồn: Daizy John

Baird Parker Agar dựa trên khả năng của S. aureus để giảm Tellurite và tạo ra lecithinase. Cả hai thuộc tính tạo ra một thuộc địa với các đặc điểm cụ thể cho loài này. Do đó, nó có hiệu quả cao trong việc phát hiện vi sinh vật này.

Các khuẩn lạc điển hình của S. aureus có màu đen hoặc xám đen, có viền không màu và có quầng sáng bao quanh, giúp phân biệt chúng với các vi sinh vật khác. Tác nhân gây bệnh này có thể được tìm thấy trong các mẫu lâm sàng, nước, mỹ phẩm và thực phẩm sống hoặc nấu chín.

Việc chẩn đoán hoặc phát hiện nó là vô cùng quan trọng, do nhiều loại bệnh lý mà nó tạo ra, chẳng hạn như ngộ độc thực phẩm, hội chứng da tróc vảy, hội chứng sốc nhiễm độc, áp xe, viêm màng não, nhiễm trùng huyết, viêm nội tâm mạc, trong số những bệnh khác.

Nền tảng

Nuôi dưỡng sức mạnh

Dịch thủy phân từ tụy của casein, chiết xuất thịt và chiết xuất nấm men là nguồn cung cấp chất dinh dưỡng, vitamin và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của vi sinh vật nói chung, trong khi pyruvate và glycine là những hợp chất có lợi cho sự phát triển cụ thể của Staphylococcus aureus.

Chọn lọc

Baird Parker Agar được chọn lọc vì nó chứa các chất ức chế sự phát triển của hệ thực vật đi kèm, đồng thời thúc đẩy sự phát triển của S. aureus. Các hợp chất ức chế là liti clorua và kali tellurit.

Khác biệt

Môi trường này có thể giúp phân biệt S. aureus với phần còn lại của Staphylococci âm tính với coagulase. S. aureus có khả năng khử Tellurite thành Tellurium màu đen kim loại tự do, tạo thành các khuẩn lạc màu đen hoặc xám đen.

Tương tự như vậy, lòng đỏ trứng cung cấp chất nền để chứng minh sự hiện diện của enzyme lecithinase và lipase. S. aureus dương tính với lecithinase và do đó sẽ quan sát thấy một quầng rõ ràng xung quanh khuẩn lạc, cho thấy lecithin đã bị thủy phân.

Theo nghĩa này, sự xuất hiện trên thạch của các khuẩn lạc màu đen bóng hoặc xám đen với quầng sáng xung quanh cho thấy sự hiện diện của S. aureus.

Nếu vùng kết tủa hình thành thì đó là dấu hiệu của hoạt động lipase. Một số chủng S. aureus dương tính với lipase và những chủng khác âm tính.

Trong trường hợp S. aureus dương tính với lipase, sẽ quan sát thấy một vùng mờ đục xung quanh khuẩn lạc màu đen hoặc xám đen, sau đó xuất hiện quầng sáng do hoạt động của lecithinase.

Các khuẩn lạc không phải S. aureus có khả năng phát triển trên môi trường này sẽ phát triển các khuẩn lạc không màu hoặc nâu, không có quầng xung quanh.

Các khuẩn lạc màu đen không điển hình cũng có thể được nhìn thấy, có hoặc không có viền không màu, nhưng không có quầng sáng. Không nên tính đến những khuẩn lạc này, chúng không tương ứng với S. aureus.

Sự chuẩn bị

Nhũ tương lòng đỏ trứng

Lấy một quả trứng gà tươi, rửa sạch rồi cho vào cồn 70% ngâm trong 2 đến 3 giờ. Trứng sau đó được mở vô trùng và lòng trắng được tách cẩn thận khỏi lòng đỏ. Sau đó, lấy 50 ml lòng đỏ và trộn với 50 ml dung dịch sinh lý vô trùng.

Kali Tellurite 1% w / v

Một số nhà thương mại bán 1% kali Tellurite đã sẵn sàng để sử dụng. Nó được thêm vào môi trường trước khi môi trường đông đặc.

Để chuẩn bị dung dịch này trong phòng thí nghiệm, người ta cân 1,0 g kali tellurit và hòa tan trong một phần nước. Sau đó, lượng nước được hoàn thành cho đến khi đạt 100 ml. Dung dịch phải được khử trùng bằng phương pháp lọc.

Chuẩn bị môi trường nuôi cấy

Cân 60 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong 940 ml nước cất. Để hỗn hợp trong khoảng 5-10 phút.

Gia nhiệt bằng cách khuấy môi trường thường xuyên để cải thiện quá trình hòa tan. Đun sôi trong một phút. Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Để yên cho đến khi nhiệt độ đạt 45 ° C và thêm 50 ml nhũ tương lòng đỏ trứng và 10 ml Tellurite 1%. Trộn đều và đổ 15-20 ml lên đĩa Petri vô trùng.

Để đông lại, đảo thứ tự trong khay và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi dùng.

PH cuối cùng của môi trường đã chuẩn bị phải là 6,8 ± 0,2.

Trước khi gieo mẫu, hãy đợi đĩa đạt nhiệt độ phòng. Gieo hạt vào đĩa bằng cách rải hoặc gieo hạt trên bề mặt bằng thìa Drigalski.

Màu của môi trường khử nước là màu nâu nhạt và màu của môi trường đã chuẩn bị là màu hổ phách nhạt.

Sử dụng

Mẫu lâm sàng

Các mẫu lâm sàng được gieo trực tiếp, thải ra một phần của vật liệu ở một đầu của đĩa, và từ đó nó được tạo thành vệt do cạn kiệt. Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 35-37 ° C.

Mẫu thức ăn

Cân 10 gr mẫu thực phẩm và đồng nhất trong 90 ml nước pepton 0,1%, từ đó chuẩn bị các dung dịch pha loãng nếu cần. Cấy 0,3 ml dung dịch đã chuẩn bị vào các đĩa làm ba lần, rồi dùng thìa Drigalski gieo hạt lên bề mặt. Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 35-37 ° C.

Phương pháp luận này cho phép đếm các khuẩn lạc điển hình thu được và lý tưởng khi nghi ngờ sự có mặt của S. aureus trên 10 CFU trên g / ml mẫu.

Nếu số lượng S. aureus nghi ngờ là nhỏ hoặc có nhiều vi khuẩn đi kèm, nên làm giàu mẫu trong nước đậu nành trypticase với 10% NaCl và 1% natri pyruvate. Điều này sẽ thúc đẩy sự phát triển của S. aureus và ức chế sự phát triển của hệ thực vật đi kèm. Các ống đục được cấy trên thạch Baird Parker.

Mẫu nước

Trong hệ thống lọc chân không tiệt trùng, 100 ml nước nghiên cứu được lọc, và sau đó màng vi xốp 0,4 micron được loại bỏ bằng kẹp vô trùng và đặt trên đĩa Baird Parker. Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 35-37 ° C. Kỹ thuật này cho phép đếm các khuẩn lạc S. aureus điển hình.

QA

Các chủng đã biết như Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 hoặc Proteus mirabilis ATCC 43071 có thể được sử dụng để đánh giá chất lượng thạch Baird Parker.

Trong trường hợp của các chủng S. aureus ATCC, nó được biết là giảm Tellurite, và chúng dương tính với lipase và lecithinase. Vì vậy, phải có sự phát triển đạt yêu cầu và mọc ra các khuẩn lạc lồi có tâm màu đen và viền không màu, có quầng đục và quầng sáng ngoài cùng.

Về phần mình, S. epidermidis phát triển kém trên môi trường này, với các khuẩn lạc màu nâu xám đến đen, không có quầng sáng.

Đối với E. coli và P. mirabilis, nó được cho là sẽ bị ức chế hoàn toàn hoặc một phần. Trong trường hợp phát triển, các khuẩn lạc màu nâu sẽ phát triển không có vùng mờ đục hoặc quầng sáng.

khuyến nghị

-Không nên đun nóng môi trường sau khi thêm Tellurite và lòng đỏ trứng.

- Chuẩn bị nhũ tương lòng đỏ trứng và thêm vào giữa là bước rất dễ bị nhiễm bẩn. Cần phải hết sức cẩn thận.

-Nếu có sự hiện diện của các khuẩn lạc điển hình của S. aureus, cần xác nhận bằng cách gắn thử nghiệm coagulase trên chủng đó.

-Nếu có kết quả nghi ngờ với coagulase, các xét nghiệm khẳng định khác nên được thực hiện.

- Cẩn thận để không nhầm lẫn sự hiện diện của các khuẩn lạc S. aureus điển hình với các khuẩn lạc đen không điển hình.

Người giới thiệu

1. Những người đóng góp Wikipedia. Thạch Baird-Parker. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 15 tháng 3 năm 2017, 19:36 giờ UTC. Có tại: wikipedia.org/ Truy cập ngày 18 tháng 2 năm 2019.
2. Phòng thí nghiệm BD. Baird Parker Agar. 2006. Có tại: bd.com
3. Phòng thí nghiệm Britannia. Cơ sở thạch Baird Parker. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
4. Phòng thí nghiệm Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Có tại: http://f-soria.es/Inform
5. Phòng thí nghiệm Britannia. Kali Tellurite. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Vận chuyển Staphylococcus aureus gây độc tố ruột loại A, trong vết bẩn mũi họng ở người chế biến thực phẩm. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Tiêu chuẩn Venezuela Covenin 1292-89. (1989). Thực phẩm. Phân lập và định lượng Staphylococcus aureus. Có tại: sencamer.gob.ve