BHI AGAR: NỀN TẢNG, CÁCH PHA CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các thạch BHI hay Brain Tim Infusion thạch vừa là một nền văn hóa vững chắc dinh dưỡng. Trong tiếng Tây Ban Nha, chúng tôi gọi nó là thạch truyền tim não. Nó là một môi trường nuôi cấy không chọn lọc, có nghĩa là tất cả các loại vi khuẩn Gram dương và Gram âm đều có thể phát triển, cũng như một số nấm men và nấm sợi.

Nó bao gồm dịch truyền của não và tim bê, dịch thủy phân trong dạ dày từ mô động vật, dịch thủy phân tụy của casein, natri clorua, glucose, dinatri photphat và thạch.

Các tấm BHI. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Cần lưu ý rằng thạch BHI là một trong những môi trường nuôi cấy được sử dụng thường xuyên nhất trong các phòng thí nghiệm vi khuẩn học. Nó có thể được sử dụng mà không có chất bổ sung như nuôi cấy chính, nuôi cấy phụ các khuẩn lạc thu được trên các môi trường chọn lọc khác hoặc để duy trì các chủng trong phòng thí nghiệm.

Mặt khác, nó là môi trường lý tưởng được sử dụng làm cơ sở trong việc chuẩn bị các môi trường làm giàu, chẳng hạn như thạch máu và thạch sô cô la. Cả hai đều lý tưởng cho việc phân lập các vi sinh vật có nhu cầu từ quan điểm dinh dưỡng. Tuy nhiên, cần lưu ý rằng vì nó chứa glucose nên không thích hợp để quan sát các kiểu tán huyết.

Tương tự như vậy, thạch BHI có thể được sử dụng để chuẩn bị môi trường đặc biệt để phân lập các vi sinh vật gây bệnh khó phát triển trong các môi trường thông thường, trong số đó: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae và Histoplasma capsulatum.

Với chất phụ gia kháng sinh, thạch BHI trở thành môi trường chọn lọc để phân lập nấm.

Nền tảng

Nó là một môi trường nuôi cấy dinh dưỡng để phân lập các vi sinh vật có nhu cầu vừa phải, và sự phong phú của nó có thể được tăng lên khi bổ sung máu và các chất bổ sung dinh dưỡng khác.

Nó là một môi trường nuôi cấy không chọn lọc, do đó nó cho phép sự phát triển của hầu hết các vi khuẩn Gram dương và Gram âm, cũng như một số loại nấm. Tuy nhiên, nó có thể được thực hiện có chọn lọc với việc bổ sung kháng sinh.

Môi trường có chứa dịch truyền não và tim bê, dịch thủy phân trong dạ dày của các mô động vật và dịch thủy phân từ tụy của casein; Tất cả các hợp chất này đóng vai trò là nguồn cung cấp vitamin, axit amin, nitơ và cacbon.

Glucose là một loại carbohydrate cung cấp năng lượng cho vi sinh vật khi chúng đã lên men. Trong khi đó, natri clorua và dinatri photphat duy trì sự cân bằng thẩm thấu và cung cấp độ pH gần với mức trung tính. Cuối cùng, thạch tạo độ đặc vừa phải.

Sự chuẩn bị

Cân 52 gam môi trường đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Đun hỗn hợp trên nguồn nhiệt cho đến khi sôi, khuấy thường xuyên trong quá trình hòa tan.

Đĩa hoặc nêm BHI agar có thể được chuẩn bị mà không cần phụ gia.

Giày cao gót đế bằng

Đối với việc chuẩn bị hạt nêm, hãy chuẩn bị cho đến khi một nửa mỗi ống được lấp đầy, đậy nắp và khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút, khi rời khỏi, đặt trên đế cho đến khi chúng đông đặc. Sau đó bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.

BHI nêm cho vi khuẩn. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Tấm

Hỗn hợp hòa tan được hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút, khi để nguội, nó được để nguội đến 50 ° C và 20 ml môi trường được cho vào đĩa Petri vô trùng. Chúng được để đông đặc, đảo đều và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng. Để đĩa ở nhiệt độ phòng trước khi gieo hạt.

PH của môi trường phải duy trì ở mức 7,4 ± 0,2.

Môi trường thô có màu be và môi trường chuẩn bị có màu hổ phách nhạt.

Chuẩn bị thạch máu

Sau khi khử trùng môi trường, làm nguội đến nhiệt độ khoảng 45 đến 50 ° C, sau đó thêm máu (50 ml), trộn nhẹ để đồng nhất và cho vào mỗi đĩa Petri 20 ml vô trùng. Nếu bong bóng hình thành trên đĩa, ngọn lửa nhẹ hơn phải được đưa nhanh qua các bong bóng để loại bỏ chúng.

Tương tự như vậy, có thể chuẩn bị môi trường đặc biệt bằng cách thêm các chất phụ gia tương ứng khi hỗn hợp đạt nhiệt độ từ 45 đến 50 ° C.

Môi trường vẫn còn màu đỏ anh đào.

Các ứng dụng

Sử dụng không bổ sung

BHI Agar không có chất phụ gia hữu ích như một chất nuôi cấy sơ cấp và để gieo các chủng vi sinh vật yêu cầu thấp hoặc trung bình thuần khiết để xác định chúng sau này.

Vì nó là một môi trường sáng màu, nó là môi trường lý tưởng để quan sát các chất màu và vì nó không chứa các chất gây nhiễu nên có thể thực hiện một số phép thử sinh hóa, chẳng hạn như oxidase và catalase, hoặc các phép thử sinh hóa khác có thể được gắn từ các khuẩn lạc từ môi trường này thạch.

Tương tự như vậy, nêm BHI agar được sử dụng rộng rãi để duy trì các chủng trong một thời gian nhất định trong phòng thí nghiệm (vi khuẩn).

Các đĩa hoặc hạt nêm được gieo bằng bề mặt với các chủng vi khuẩn được ủ ở 37 ° C trong 24 đến 48 giờ. Trong khi đó, ở nấm nhiệt độ và thời gian ủ sẽ phụ thuộc vào loại nấm đang tìm.

Là thạch gốc để chuẩn bị các môi trường khác

Với cơ sở này, có thể chuẩn bị các phương tiện được làm giàu và chọn lọc.

Làm giàu

Chức năng chính của nó là làm cơ sở cho việc chuẩn bị thạch máu để sử dụng thường xuyên trong các phòng thí nghiệm vi sinh. Đặc biệt, cơ sở BHI có lợi cho việc phân lập vi khuẩn Streptococcus sp. Tuy nhiên, nó có nhược điểm là không thích hợp để quan sát các kiểu tán huyết vì có chứa glucose.

Nó cũng được sử dụng trong việc chuẩn bị thạch máu thỏ hoặc ngựa để phân lập vi khuẩn Haemophilus sp. Để có kết quả tốt nhất, có thể thêm chất bổ sung làm giàu (IsoVitaleX).

Nếu mẫu lấy từ đường hô hấp, có thể thêm bacitracin vào thạch để ức chế hệ thực vật đi kèm và tăng xác suất phục hồi chủng Haemophilus sp.

Ngoài ra, thạch máu (thịt cừu hoặc người) với cystine tellurite có thể được chuẩn bị để phân lập vi khuẩn Corynebacterium diphtheriae. Tương tự, rất hữu ích khi chuẩn bị thạch máu thỏ, với việc bổ sung cystine và glucose để phân lập Francisella tularensis.

Việc tạo hạt cho các đĩa thạch máu được thực hiện bằng cách vắt kiệt và chúng được ủ ở 35-37 ° C trong 24-48 giờ trong điều kiện vi sinh (5-10% CO ₂ ).

Chọn lọc

Môi trường này có bổ sung kháng sinh có thể thay thế thạch Sabouraud để phân lập nấm.

Sự kết hợp của thạch BHI với chloramphenicol - gentamicin hoặc penicillin -, streptomycin và máu ngựa là lý tưởng để phân lập Histoplasma capsulatum.

Tùy thuộc vào vi sinh vật cần phân lập, nên ủ ở 35-37 ° C hoặc ở nhiệt độ phòng trong môi trường hiếu khí. Đôi khi cần ủ ở cả hai dải nhiệt độ, sử dụng 2 đĩa cho việc này.

Một số nấm như Trichophyton mentagrophytes phải ủ ở nhiệt độ phòng đến 7 ngày.

QA

Từ mỗi mẻ đã chuẩn bị, nên ủ 1 đĩa hoặc nêm ở 37 ° C trong 24 giờ và xác minh rằng không có sự phát triển; Điều đặc biệt quan trọng khi chuẩn bị thạch máu, vì nó là môi trường dễ bị ô nhiễm.

Mặt khác, chất lượng của môi trường có thể được đánh giá bằng cách cấy các chủng tiêu chuẩn đã biết hoặc đã được chứng nhận và quan sát sự phát triển của chúng.

Theo nghĩa này, để đánh giá thạch BHI không có phụ gia, có thể sử dụng các chủng Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 hoặc Candida albicans ATCC 10231. Chúng được ủ ở 37 ° C trong môi trường hiếu khí trong 24 đến 48 giờ. Trong mọi trường hợp, sự tăng trưởng khả quan được mong đợi.

Các chủng Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, hoặc Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 có thể được gieo hạt để đánh giá đĩa thạch máu.

Các chủng vi khuẩn được ủ ở 37 ° C trong trạng thái vi nhân trong 24 giờ, trong khi nấm được ủ ở nhiệt độ phòng trong buồng ẩm trong tối đa 7 ngày. Tăng trưởng thỏa đáng được mong đợi trong mọi trường hợp.

Người giới thiệu

1. Phòng thí nghiệm Britannia. Agar Heart Infusion Agar. 2015. Có tại: britanialab.com.
2. Phòng thí nghiệm BD. Agar của Brain Heart Infusion (BHI). 2013. Có sẵn tại: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Não truyền dịch tim. Năm 2009.
4. Phòng thí nghiệm Neogen. Agar Heart Infusion Agar. Có tại: Foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Blood agar: nền tảng, công dụng và cách pha chế. 2018. Có sẵn tại: liveseder.com.
6. Những người đóng góp Wikipedia. Truyền tim não. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 19 tháng 9 năm 2018, 03:58 giờ UTC. Có tại: wikipedia.org. Truy cập ngày 2 tháng 3 năm 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.