Các agar cetrimide hoặc cetrimide là một môi trường nuôi cấy rắn có chọn lọc được thiết kế cho sự cô lập của Pseudomonas aeruginosa. Nó dựa trên việc cho thấy sự sản sinh ra các sắc tố đặc trưng của loài này và được tạo ra từ việc sửa đổi thạch Tech, được tạo ra bởi King, Ward và Raney.
Công thức ban đầu chứa muối magiê clorua, kali sunfat, tuyến tụy phân hủy gelatin, và thạch agar. Việc sửa đổi công thức bao gồm việc thêm cetrimide (cetyl trimethyl amoni bromide) và glycerol.
Hạt giống thạch Cetrimide với Pseudomonas aeruginosa Nguồn: BiotechMichael, từ Wikimedia Commons
Thạch cetrimide rất hữu ích cho việc nghiên cứu vi sinh đối với các mẫu nghi ngờ có sự hiện diện của Pseudomonas aeruginosa. Cần lưu ý rằng vi khuẩn này cực kỳ quan trọng, bởi vì mặc dù nó là một phần của hệ vi sinh vật môi trường bình thường, nó thường hoạt động như một mầm bệnh cơ hội.
Vì lý do này, một trong những vấn đề phổ biến nhất do vi trùng này gây ra là nhiễm trùng bệnh viện, tức là những bệnh xảy ra trong môi trường bệnh viện, tấn công những bệnh nhân có hệ miễn dịch suy giảm.
Mặt khác, do ái lực của vi sinh vật này với độ ẩm, các mục tiêu ô nhiễm dễ bị nhiễm nhất là: thiết bị hỗ trợ thở, thuốc men, máy phun sương, nguồn nước, máy điều hòa không khí, chất khử trùng, dung dịch xà phòng, dung dịch tiêm, vết thương hở. , ống thông, ống dẫn nước tiểu, trong số những người khác.
Theo nghĩa này, thạch cetrimide rất hữu ích để thực hiện các biện pháp kiểm soát vi sinh và nuôi cấy các nguyên tố đã đề cập trước đó.
Nền tảng
Cetrimide agar dựa trên khả năng của môi trường để thúc đẩy sự phát triển của P. aeruginosa, kích thích sản xuất các sắc tố của nó và lần lượt ức chế sự phát triển của các vi sinh vật khác.
Những thuộc tính này là do chức năng của từng thành phần của nó. Gelatin peptone có mặt như một nguồn nitơ, vitamin và khoáng chất. Glycerol hoặc glycerin hoạt động như một nguồn cacbon.
Về phần mình, cetrimide (cetyl trimethyl amonium bromide) là chất ức chế sự phát triển của các vi khuẩn không phải P. aeruginosa, bao gồm cả các loài khác thuộc cùng một chi.
Sự ức chế xảy ra bởi vì cetramide hoạt động như một chất tẩy rửa cation, quản lý để làm mất ổn định màng sinh chất của hầu hết các vi khuẩn, ngoại trừ P. aeruginosa và một số vi khuẩn khác có thể sống sót.
Mặt khác, nó chứa magie clorua và kali sunfat. Những hợp chất này kích thích sự biểu hiện kiểu hình liên quan đến khả năng tạo ra các sắc tố khác nhau của Pseudomonas aeruginosa, bao gồm: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin, và fluorescein. Cuối cùng, nó chứa agar-agar, tạo cho nó một độ đặc chắc.
Diễn dịch
Việc giải thích sự tăng trưởng thu được trong thạch này được thực hiện như sau:
Việc quan sát các khuẩn lạc tròn, nhẵn với các cạnh đều đặn, với sự tạo ra các sắc tố xanh lam, xanh lục, nâu hoặc đỏ, cộng với mùi trái cây (aminoacetophenone), là kết quả giả định về sự hiện diện của vi khuẩn này trong mẫu thử.
Mặt khác, việc quan sát thấy sắc tố màu vàng lục sáng trên các khuẩn lạc là dấu hiệu của P. aeruginosa khi đĩa được chiếu tia cực tím.
Sự phát huỳnh quang của khuẩn lạc P. aeruginosa trên thạch cetrimide dưới ánh sáng cực tím.
Cần lưu ý rằng mỗi màu quan sát được là do sự sản xuất của một sắc tố cụ thể. Sắc tố xanh lam tương ứng với việc sản xuất pyocyanin, màu xanh lá cây thành pyoverdin, màu đỏ tạo thành pyorubin, màu nâu thành pyomelanin, và phát huỳnh quang màu vàng lục sáng dưới ánh sáng UV thành fluorescein.
Sự chuẩn bị
Cân 43 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong nước cất. Thêm 10 ml glixerol. Đưa hỗn hợp đến nguồn nhiệt. Để nó sôi trong vài phút cho đến khi hòa tan hoàn toàn.
Hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Để yên và phục vụ trong đĩa Petri vô trùng khi nhiệt độ khoảng 50 ° C.
Để đông đặc, đảo đều, xếp thành từng mảng và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi dùng. Đĩa thạch cetrimide nên được lấy ra khỏi tủ lạnh trước khi cấy giống và để ở nhiệt độ phòng.
PH cuối cùng của môi trường phải là 7,2 ± 0,2.
Màu của môi trường khử nước là màu be và chế phẩm có màu trắng đục.
Các ứng dụng
Tất cả các loại mẫu nghi ngờ sự hiện diện của Pseudomonas aeruginosa đều có thể được gieo trên thạch cetrimide. Do đó, nó rất hữu ích trong tất cả các lĩnh vực vi sinh (môi trường, công nghiệp, lâm sàng, nước và thực phẩm).
Việc phân tích môi trường bệnh viện và do đó có thể áp dụng các biện pháp khắc phục là rất quan trọng vì vi sinh vật này đến bệnh nhân thông qua thiết bị, thuốc, dung dịch và vật tư bị ô nhiễm mà bệnh nhân sử dụng.
Bằng cách này, vi sinh vật có thể lây nhiễm sang đường hô hấp dưới, đường tiết niệu và vết thương của bệnh nhân bị ức chế miễn dịch.
Số lượng khuẩn lạc P. aeruginosa cũng có thể được thực hiện trong các xét nghiệm giới hạn vi sinh vật.
Gieo
Cetrimide agar có thể được sử dụng làm môi trường nuôi cấy chính. Tấm được cấy vào một trong các cạnh của nó và từ đó nó được phân phối theo cách cạn kiệt đến phần còn lại của tấm. Các mẫu chất lỏng có thể được tạo hạt trên bề mặt bằng thìa khoan drigalski.
Các đĩa được ủ hiếu khí ở 37 ° C trong 24 giờ ủ.
Hạn chế
- Một tỷ lệ nhỏ các chủng Pseudomonas aeruginosas không tạo ra pyocyanin, do đó có thể hiểu âm tính giả.
-Một số loài Pseudomonas có tầm quan trọng về mặt lâm sàng bị ức chế trong môi trường này.
- Mặc dù quan sát thấy các đặc điểm được mô tả cho Pseudomonas aeruginosa, chúng phải được chứng thực bằng các xét nghiệm nhận dạng bổ sung. Một thử nghiệm không thể bỏ qua là thử nghiệm oxidase, nó phải cho kết quả dương tính.
-Một số Enterobacteriaceae có thể phát triển trong môi trường này và phát triển một sắc tố màu vàng, nhưng nó khác với Pseudomonas aeruginosa ở chỗ khi phiến kính chiếu tia cực tím sẽ không có huỳnh quang.
- Serratia marcescens quản lý để phát triển và tạo ra một sắc tố màu hồng.
-Nếu các đĩa được cấy thạch cetrimide được phơi trong một thời gian ở nhiệt độ phòng, các chủng P. aeruginosa có thể mất huỳnh quang quan sát được dưới ánh sáng cực tím, tuy nhiên đặc tính được phục hồi nếu chúng được ủ lại ở 37 ° C.
QA
Để phân tích hiệu suất tốt của thạch cetrimide, có thể sử dụng các chủng đối chứng, chẳng hạn như: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 và Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Kết quả mong đợi là:
- P. aeruginosa phát triển tốt, với sắc tố xanh lam và huỳnh quang dương tính.
- S. maltophilia và S. aureus sẽ bị ức chế một phần đến hoàn toàn.
- Escherichia coli được cho là sẽ bị ức chế hoàn toàn.
Người giới thiệu
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Đặc điểm kiểu hình và huyết thanh của các chủng Pseudomonas aeruginosa phân lập lâm sàng. VacciMonitor. Năm 2004; 13 (3): 1-9.
- Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Cetrimide agar base. 2014. Có tại: condalab.com
- Phòng thí nghiệm Britannia. Cetrimide agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
- Phòng thí nghiệm BD. BD Pseudosel agar (thạch Cetrimide). 2013. Có sẵn tại: bd.com
- Phòng thí nghiệm Francisco Soria Melguizo, CA Cetrimide agar. 2009 Có tại: http://f-soria.es