CLED AGAR: CƠ SỞ LÝ LUẬN, SỬ DỤNG VÀ ĐIỀU CHẾ - SINH HỌC - 2026

Các agar CLED (Cystine-Lactose-điện giải thiếu) là một khác biệt môi trường nuôi cấy rắn, được sử dụng để chẩn đoán các bệnh nhiễm trùng đường tiết niệu. Thành phần của môi trường nuôi cấy được thiết kế cho sự phát triển tốt của mầm bệnh tiết niệu và lý tưởng để định lượng các đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU).

Môi trường nuôi cấy CLED không chọn lọc, vì vi sinh vật Gram âm và Gram dương có thể phát triển trong đó. Nhưng đây không phải là vấn đề, vì hầu hết các trường hợp nhiễm trùng tiểu chỉ do một loại vi sinh vật gây ra.

Thạch CLED

Trong trường hợp nhiễm vi trùng, có thể lấy 2 hoặc 3 loại vi khuẩn khác nhau, nhưng rất hiếm và phần lớn là các mẫu bị nhiễm.

Trong số các vi khuẩn Gram âm có thể phát triển trong môi trường này là trực khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae và các trực khuẩn đường ruột khác, các vi khuẩn đường ruột thường được phân lập nhiều nhất trong mẫu nước tiểu như sau: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, trong số những loài khác.

Tương tự như vậy, trong số các vi khuẩn Gram dương có thể phát triển trong môi trường này là Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp và thậm chí cả nấm men, chẳng hạn như phức hợp Candida albicans, có thể phát triển.

Tuy nhiên, do thành phần hóa học của môi trường, nó không cho phép sự phát triển của một số tác nhân gây bệnh đường sinh dục khó phát triển, chẳng hạn như Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, trong số những loại khác.

Cơ sở lý luận về thạch CLED

Môi trường nuôi cấy CLED có dịch chiết thịt, dịch tụy của casein và dịch thủy phân của gelatin làm nguồn năng lượng. Chúng cung cấp các chất dinh dưỡng cho sự phát triển của vi khuẩn không cần thiết.

Nó cũng chứa cystine, một axit amin cho phép sự phát triển của coliform, có thể phân biệt được bằng kích thước nhỏ của chúng.

Tương tự như vậy, nó chứa lactose như một loại carbohydrate có thể lên men, vì lý do này mà môi trường này là khác biệt; có thể phân biệt vi khuẩn lên men với vi khuẩn không lên men lactose.

Vi khuẩn lên men làm cho pH của môi trường thay đổi do tạo ra axit, phát triển các khuẩn lạc màu vàng, trong khi vi khuẩn không lên men không tạo ra sự thay đổi trong môi trường, do đó chúng có màu của thạch ban đầu là xanh lục.

Phản ứng lên men được bộc lộ nhờ sự có mặt của chất chỉ thị pH, trong môi trường này có màu xanh bromothymol.

Mặt khác, nồng độ điện giải thấp của môi trường ức chế sự phát triển xâm lấn điển hình của chi Proteus, được gọi là hiệu ứng bầy đàn. Điều này tạo ra lợi thế so với các phương tiện khác, vì nó cho phép đếm các CFU, bao gồm cả chi Proteus.

Tuy nhiên, nồng độ chất điện giải thấp sẽ ức chế sự phát triển của một số loài thuộc giống Shigella, đây là một nhược điểm so với các môi trường khác.

Cơ sở lý luận cho thạch CLED (Bevis)

Có một biến thể hoặc sửa đổi của môi trường này được thực hiện bởi Bevis, người đã kết hợp axit fuchsin (chỉ thị của Andrade) vào chế phẩm ban đầu. Nó hoạt động kết hợp với bromothymol blue để phân biệt vi khuẩn lên men với vi khuẩn không lên men.

Sự khác biệt giữa môi trường thông thường và môi trường biến tính là màu sắc của các khuẩn lạc. Trong trường hợp vi khuẩn lên men lactose, khuẩn lạc chuyển sang màu đỏ cam với quầng hồng hoặc đỏ, trong khi khuẩn lạc không lên men có màu xám xanh.

Các ứng dụng

Thạch CLED được sử dụng riêng để cấy mẫu nước tiểu. Việc sử dụng phương tiện này đặc biệt thường xuyên trong các phòng thí nghiệm ở Châu Âu, trong khi ở Châu Mỹ thì ít được sử dụng hơn.

Việc thu thập mẫu phải đáp ứng các thông số nhất định để có được kết quả đáng tin cậy, bao gồm:

• Không được dùng thuốc kháng sinh trước khi lấy mẫu.
• Tốt nhất là lấy nước tiểu của giờ đầu tiên vào buổi sáng, vì nó cô đặc hơn, khi không thể lấy mẫu bằng phương pháp xâm lấn.
• Rửa sạch bộ phận sinh dục trước khi lấy mẫu.
• Bỏ dòng đi tiểu đầu tiên và sau đó đặt bình chứa.
• Lấy 25 đến 30 ml nước tiểu trong một hộp đựng vô trùng được dán nhãn rõ ràng.
• Đưa ngay đến phòng thí nghiệm được bao quanh trong băng.
• Nó phải được xử lý trong vòng 2 giờ sau khi phát hành hoặc được bảo quản lạnh ở 4 ° C trong tối đa 24 giờ.

Gieo mẫu nước tiểu

Mẫu nước tiểu nên được pha loãng 1:50.

Để pha loãng, cho 0,5 ml nước tiểu bệnh nhân và pha loãng với 24,5 ml dung dịch sinh lý vô trùng.

Đong 0,1 ml nước tiểu đã pha loãng và phết bề mặt bằng thìa khoan drigalski trên môi trường CLED. Đây là phương pháp gieo hạt tốt nhất để đếm khuẩn lạc. Vì lý do này, nó được sử dụng trong các mẫu nước tiểu, vì kết quả phải được biểu thị bằng CFU / ml.

Để định lượng khuẩn lạc thu được, tiến hành như sau: đếm khuẩn lạc trên đĩa và nhân với 10 rồi nhân với 50. Điều này cho bạn lượng CFU / ml nước tiểu.

Diễn dịch

Đếm trên 100.000 CFU / ml -– Cho biết nhiễm trùng tiết niệu

Đếm dưới 1000 CFU / ml-– Không nhiễm trùng

Đếm từ 1000-10.000 CFU / ml -– Nghi ngờ, có thể nhiễm bẩn, lấy mẫu lặp lại.

TÔI

Các khuẩn lạc được nuôi cấy trên thạch CLED phải có Gram và tùy thuộc vào đặc điểm hình thái của vi sinh vật mà tiến hành một quá trình nuôi cấy phụ nhất định.

Ví dụ, nếu là trực khuẩn Gram âm, nó sẽ được gieo trên thạch MacConkey, nơi chứng thực sự lên men hay không của lactose. Ngoài ra, một thạch dinh dưỡng được gắn vào để thực hiện thử nghiệm oxidase.

Trong trường hợp Gram phát hiện cầu khuẩn Gram dương, nó có thể được nuôi cấy trên thạch mannitol mặn và trên thạch dinh dưỡng. Sau đó, thử nghiệm catalase được thực hiện. Cuối cùng, nếu quan sát thấy nấm men, nó sẽ được gieo trên thạch Sabouraud.

Nhiều phòng thí nghiệm tránh sử dụng môi trường CLED và chỉ thích sử dụng thạch máu, MacConkey và thạch dinh dưỡng để làm mẫu nước tiểu.

Sự chuẩn bị

Hòa tan 36,2 g bột thạch CLED trong bình có một lít nước cất. Sau 5 phút để yên, đun cách thủy thạch đã đun lại, trộn liên tục để sôi trong 1 phút.

Sau đó khử trùng ở 121 ° C trong 15 phút trong nồi hấp. Khi kết thúc thời gian, nó được lấy ra khỏi nồi hấp và để nguội xuống nhiệt độ 45 ° C. Sau đó, 15-20 ml được phục vụ trong mỗi đĩa Petri vô trùng.

Quy trình phục vụ đĩa phải được thực hiện bên trong tủ hút tầng hoặc phía trước vòi đốt Bunsen để tránh nhiễm bẩn.

Các đĩa phục vụ được để cho đông lại, xếp vào giá đảo ngược và bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C) cho đến khi sử dụng.

PH cuối cùng của môi trường đã chuẩn bị phải là 7,3 ± 0,2.

Người giới thiệu

1. Khuyến cáo về chẩn đoán vi sinh đối với nhiễm trùng tiết niệu. chil. nhiễm trùng. Năm 2001; 18 (1): 57-63. Có tại: scielo.org.
2. Panchi J. Xác định tác nhân vi sinh vật gây nhiễm trùng đường tiểu ở bệnh nhân nội trú được đặt ống thông bàng quang. 2016. Làm việc bậc đại học để đủ điều kiện nhận bằng Cử nhân Xét nghiệm lâm sàng. Đại học Kỹ thuật Ambato. Ecuador.
3. Phòng thí nghiệm Britannia. Phương tiện CLED. Có sẵn tại: britanialab.com.
4. Phòng thí nghiệm Renylab. Hướng dẫn sử dụng, CLED Agar. 2013 Có tại: es.renylab.ind.br.
5. Phòng thí nghiệm trồng trọt. Sổ tay Cơ bản về Vi sinh. Có sẵn tại: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Lựa chọn thạch CLED trong quy trình cấy nước tiểu. Đánh giá tương lai và so sánh. Chẩn đoán vi khuẩn lây nhiễm vi khuẩn. Năm 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Thực hành vi sinh lâm sàng. Đại học Cadiz, tái bản lần thứ 2. Dịch vụ xuất bản UCA.