CZAPEK AGAR: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CHUẨN BỊ, SỬ DỤNG VÀ HẠN CHẾ - SINH HỌC - 2025

Các Czapek (CZA) là một môi trường rắn có chọn lọc được thiết kế đặc biệt cho phát triển vi khuẩn hoại sinh và nấm. Nó được tạo ra bởi nhà thực vật học Friedrich Johann Franz Czapek, người gốc Ba Lan, và nhà hóa học người Mỹ Arthur Wayland Dox; vì lý do này, thạch này còn được gọi là môi trường Czapek-Dox.

Môi trường ban đầu là chất lỏng, nhưng agar sau đó đã được thêm vào để làm cho nó trở thành một môi trường rắn. Môi trường Czapek bao gồm natri nitrat, kali photphat, magie sunfat, kali clorua, sunfat sắt, sacaroza, thạch và nước cất.

Thạch Czapek A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Nguồn: A. Medmyco / B. Ảnh: Tiến sĩ David Midgley. Wikipedia.com

Độ pH của thạch Czapek là 7,3, nhưng có một biến thể mà trong đó 10% axit lactic được thêm vào, độ pH của nó vẫn ở mức 3,5. Môi trường axit này được sử dụng để nuôi cấy vi sinh vật ưa axit.

Mặt khác, một số nhà thương mại đã sửa đổi thành phần của thạch Czapek bằng cách thay đổi magie sulfat và bipotassium phosphat bằng glycerophosphat; sự thay đổi này ngăn cản sự hình thành kết tủa magie photphat theo công thức thông thường. Tương tự như vậy, có một biến thể khác mà chiết xuất nấm men được thêm vào.

Cuối cùng, thạch Czapek được Hiệp hội Y tế Công cộng Hoa Kỳ APHA khuyên dùng để nghiên cứu các loài Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp và Penicillium sp. Các loài này có đặc điểm là vi sinh vật môi trường và mầm bệnh cơ hội.

Nền tảng

Môi trường này chứa sucrose; carbohydrate này đóng vai trò là nguồn cacbon, trong khi natri nitrat là nguồn nitơ, nhưng không giống như các phương tiện khác, nitơ được cung cấp là vô cơ.

Vì lý do này, môi trường Czapek được coi là chọn lọc, vì chỉ những vi sinh vật có khả năng sử dụng các hợp chất vô cơ làm nguồn nitơ duy nhất mới có thể phát triển.

Là chất điều chỉnh độ thẩm thấu của môi trường là bipotassium phosphate. Về phần mình, magie sulfat, clorua kali và sulfat sắt cung cấp các khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của vi sinh vật hoại sinh (sống tự do). Công thức này tạo thành kết tủa magie photphat.

Cuối cùng, agar-agar là hợp chất cung cấp độ đặc chắc cho môi trường và nước là dung môi cho tất cả các thành phần.

Với công thức thạch Czapek cải tiến, không có sự hình thành kết tủa và nó cải thiện hiệu suất sinh trưởng của một số loại nấm.

Tính axit cực cao của Axit Czapek Agar làm cho nó trở thành một môi trường chọn lọc hơn, chỉ cho phép sự phát triển của các vi sinh vật ưa axit, có khả năng sử dụng nitơ vô cơ. Trong khi đó, thạch Czapek-men cải thiện hiệu suất của một số loại nấm.

Sự chuẩn bị

Czapek-Dox trung bình

Cân 49 g môi trường nuôi cấy đã khử nước và hòa tan trong nước cất. Đun nóng cho đến khi sôi. Lắc hỗn hợp thường xuyên cho đến khi hòa tan hoàn toàn.

-Czapek Agar Wedges

Phân phối hỗn hợp đã hòa tan vào các ống và hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Khi lấy ra khỏi nồi hấp, đồng nhất trước khi đặt ống xuống và để đông đặc.

- Đĩa thạchzapek

Hấp hỗn hợp đã hòa tan ở 121 ° C trong 15 phút và để nguội đến 50 ° C, đồng nhất và rót 20 ml vào đĩa Petri vô trùng. Để đông đặc, đảo đều và cất vào tủ lạnh cho đến khi dùng.

Độ pH phải duy trì ở mức 7,3 ± 0,2. Màu của môi trường khử nước là trắng và môi trường chuẩn bị có màu hổ phách nhạt, hơi đục do có kết tủa keo tụ.

Môi trường Czapek ở pH axit

Chuẩn bị như đã mô tả, nhưng thêm 10 ml axit lactic 10% vô trùng cho mỗi lít môi trường đã chuẩn bị. Môi trường Czapek biến tính phải ở pH 3,5 ± 0,2.

Phương tiện Czapek được sửa đổi

Cân 45,4 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước. Phần còn lại của việc chuẩn bị giống như mô tả ở trên. Màu của môi trường khử nước là màu trắng và môi trường chuẩn bị có màu trắng. PH cuối cùng của môi trường là 6,8 ± 0,2.

Môi trường men Czapek

Còn được gọi là Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Nó chứa các thành phần của thạch Czapek cổ điển cộng với chiết xuất nấm men.

Sử dụng

Môi trường Czapek được sử dụng để tìm kiếm các vi sinh vật hoại sinh trong các mẫu đất, rau, ngũ cốc, không khí, côn trùng, v.v.

Thạch Czapek ở pH axit được sử dụng cho sự phát triển của vi sinh vật ưa axit, trong khi thạch Czapek biến tính đặc biệt hữu ích cho sự hình thành bào tử chlamydospores ở các loài thuộc phức hợp Candida albicans.

Cuối cùng, thạch Czapek-men rất hữu ích để phân lập Aspergillus và Penicillium.

Gieo

-Czapek agar

Để tìm kiếm Xạ khuẩn trong đất, tiến hành như sau: mẫu được xử lý bằng nước phenol hóa trong 30 phút và sau đó 1 mL huyền phù được gieo trên thạch Czapek. Ủ ở 28 ° C từ 5 đến 7 ngày.

Đối với các mẫu rau, ngũ cốc và côn trùng, chúng được đặt trực tiếp trên thạch. Bạn cũng có thể pha loãng và gieo 0,1 ml lên bề mặt thạch.

- Thạch Czapek đã sửa đổi

Đối với hạt giống, một vòng tròn hoặc kim thẳng được sử dụng, nó được tẩm vào miếng gạc và cấy thạch bằng cách chọc thủng cho đến khi chạm vào đáy đĩa. Ủ trong 24 giờ ở 28 ° C và kiểm tra dưới kính hiển vi ở trên và dưới đĩa để xem có hình thành bào tử chlamydospores hay không.

Nhiệt độ và thời gian ủ

Nhiệt độ và thời gian ủ thay đổi tùy thuộc vào loại vi sinh vật cần phân lập. Các tấm thường được ủ từ một đến hai tuần trong khoảng nhiệt độ từ 20 đến 25 ° C.

Tuy nhiên, có những điều kiện cụ thể đối với một số chủng. Ví dụ, hầu hết các loài thuộc giống Aspergillus phát triển tối ưu ở 30 ° C; tuy nhiên A. fumigatus phát triển ở 50 ° C.

Về thời gian ủ bệnh một hoặc hai tuần là bình thường, tuy nhiên, Candida albicans có thể phát triển trong 24 đến 48 giờ ở 25 ° C.

Đặc điểm của một số khuẩn lạc trên môi trường này

-Penicillium atrovenetum

Nó phát triển trong 12 ngày ủ ở 27 ° C. Khuẩn lạc của chúng nhỏ (25 mm).

Các khuẩn lạc có vẻ ngoài mịn như nhung, với đường viền màu trắng xác định và màu xanh lam ở trung tâm chuyển sang màu xám khi già đi. Mặt trái của khuẩn lạc là màu da cam, làm cho phần giữa có màu giống nhau do sản xuất sắc tố.

-Aspergillus niger

Nó phát triển với các sợi nấm màu trắng đến vàng và các bào tử màu đen.

-Candida albicans

Khuẩn lạc màu be nhạt màu kem phát triển. Trong thạch Czapek biến tính, nó tạo thành bào tử chlamydospore.

-Aspergillus parasiticus

Sợi nấm màu xanh đậm phát triển trong 7 ngày ở 25 ° C.

QA

Để đánh giá chất lượng của môi trường nuôi cấy, có thể trồng các chủng đối chứng đã được chứng nhận, chẳng hạn như: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger phát triển sợi nấm màu trắng đến vàng và bào tử màu đen trong khoảng 5 ngày, trong khi Candida albicans sẽ phát triển tốt trong 24 giờ ủ ở 25 ° C; khuẩn lạc có màu kem.

Hạn chế

Một số nghiên cứu đã chỉ ra rằng để thu hồi Actinomycetes, thạch có năng suất tốt nhất là thạch khoai tây, với thạch Czapek ở vị trí thứ hai, nhưng đối với việc thu hồi Aspergillus và Penicillium, thạch Czapek là thạch có tỷ lệ thu hồi cao nhất.

Người giới thiệu

1. Dávila M và cộng sự. Xạ khuẩn đối kháng với nấm thực vật có tầm quan trọng trong nông nghiệp. Linh mục Mex. Khoa học. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Có tại: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Phân lập các chủng Aspergillus niger, sản xuất ochratoxin A, trong cà phê nhân dự trữ (Coffea arabica). Linh mục Mex. Micrô. Năm 2010; 32: 63-68. Có sẵn tại.scielo.org.
3. Những người đóng góp Wikipedia. Czapek vừa. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 13 tháng 1 năm 2019, 20:30 UTC. Có tại: en.wikipedia.org
4. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Cải tiến Czapek-Dox Agar. Có tại: condalab.com
5. Văn hóa phương tiện vi mô. Czapek-Dox Agar. Diosponible trong: Medioscultivo.com