THẠCH LIA (SẮT LYSINE): NỀN TẢNG, CÁCH PHA CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các LIA agar (Lysine sắt) là một xét nghiệm sinh hóa dùng để xác định vi khuẩn của gia đình Enterobacteriaceae. Phương tiện này được tạo ra bởi Edwards và Fife, dựa trên công thức Falkow.

Ban đầu, thử nghiệm này là một loại canh có chứa pepton, chiết xuất nấm men, glucose, L-lysine, bromocresol tím và nước cất. Edwards và Fife đã thêm agar-agar, sắt amoni xitrat, và natri thiosunfat.

Xét nghiệm dương tính và âm tính đối với sự khử carboxyl của lysine. Nguồn: Ảnh và sơ đồ tài sản của tác giả ThS. Marielsa gil

Về cơ bản, thử nghiệm bao gồm việc chứng minh sự hiện diện của enzyme lysine decarboxylase, có khả năng phản ứng với nhóm cacboxyl của axit amin L-lysine. Sự khử amin của axit amin cũng có thể xảy ra do sự hiện diện của enzym lysine deaminase.

Ngoài ra, thành phần của môi trường cho thấy khả năng sản xuất hydro sunfua của một số chi vi khuẩn. Cuối cùng, cũng có thể quan sát sự sinh ra hay không sinh ra của khí trong môi trường.

Nền tảng

Peptones và chiết xuất nấm men

Giống như hầu hết các môi trường nuôi cấy, Lysine Iron Agar chứa các thành phần cung cấp nguồn dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Các thành phần này được đại diện bởi pepton và chiết xuất nấm men.

Đường glucoza

Tương tự như vậy, thạch này chứa glucose là một loại carbohydrate có thể lên men. Tất cả các vi khuẩn trong họ Enterobacteriaceae đều được biết là lên men glucose.

Bước này rất quan trọng, vì nó sẽ chịu trách nhiệm axit hóa môi trường, một điều kiện thiết yếu để enzyme lysine decarboxylase -nếu có mặt- hoạt động trên cơ chất của nó.

Ở một số chi vi khuẩn, có thể quan sát thấy sự sinh khí do lên men glucose.

Khí được chứng minh khi có sự dịch chuyển của thạch trong ống, để lại một khoảng trống ở đáy ống, hoặc bằng cách bẻ gãy môi trường thành hai hoặc nhiều phần.

L-lysine

Khi lysine bị khử cacboxyl, một diamine (cadaverine) và carbon dioxide được hình thành.

Quá trình khử carboxyl xảy ra với sự có mặt của coenzym pyridoxal phosphat. Phản ứng này là không thể đảo ngược.

Chỉ thị PH (màu tím bromocresol)

Tất cả các thay đổi pH xảy ra trong môi trường bởi các phản ứng khác nhau được phát hiện bằng chất chỉ thị pH bromocresol màu tím.

Theo nghĩa này, khi có axit hóa, môi trường chuyển sang màu vàng, và khi có kiềm hóa, môi trường trở lại màu tím hoặc màu tím ban đầu.

Khi sự khử amin của lysine xảy ra do sự hiện diện của enzyme lysine deaminase, màu đỏ được hình thành trên bề mặt, đặc trưng ở các chi Proteus, Providencia và một số loài Morganella.

Điều này là do thực tế là trong quá trình khử amin, axit alpha-keto-cacbonic được tạo thành, phản ứng với amoni xitrat khi có oxy, gây ra màu sắc nói trên.

Ferric amoni xitrat và natri thiosunfat

Mặt khác, vi khuẩn tạo ra hydro sunfua sẽ được chứng minh bằng sự hiện diện của natri thiosulfat (nguồn cung cấp lưu huỳnh) và sắt amoni xitrat, là chất phát triển của H ₂ S.

Vi khuẩn có enzyme thiosulfate reductase có khả năng hoạt động bằng cách khử natri thiosulfate có mặt, tạo thành sulfit và hydro sulfua (H ₂ S).

Sau cùng là một chất khí không màu, nhưng khi phản ứng với muối sắt, nó tạo thành sunfua kim loại màu, là một hợp chất không tan (có thể nhìn thấy kết tủa màu đen).

Tuy nhiên, khả năng tạo H ₂ S với môi trường này không đáng tin cậy lắm, vì một số vi khuẩn âm tính với lysine decarboxylase có khả năng tạo H ₂ S sẽ không tạo thành kết tủa đen, do tính axit của môi trường cản trở. Do đó, bạn nên kiểm tra với các phương tiện khác có chứa sắt.

Giải thích bài kiểm tra

Lysine khử cacboxyl

Các ống nghiệm phải được đọc sau 24 giờ ủ, nếu không sẽ có nguy cơ hiểu sai phản ứng, báo cáo âm tính giả.

Cần phải nhớ rằng phản ứng đầu tiên sẽ xảy ra là lên men glucose, do đó tất cả các ống sau 10 đến 12 giờ sẽ chuyển sang màu vàng.

Nếu cuối thời gian ủ (24 giờ) thấy nền màu vàng, bề mặt có màu tím hoặc tím thì phản ứng là âm tính. Màu tím của bề mặt tương ứng với sự kiềm hóa của môi trường bằng cách sử dụng pepton.

Phản ứng dương tính là phản ứng mà đáy và bề mặt của ống hoàn toàn có màu tím, tức là nó trở lại màu ban đầu.

Do đó, người xác định tính tích cực của phép thử là cơ sở hay nền tảng của phương tiện. Nếu nghi ngờ về màu sắc, nó có thể được so sánh với một ống LIA không cấy.

Sự khử lysine

Một ống cho thấy sự khử amin của lysine sẽ có bề mặt màu nâu đỏ và nền màu vàng (axit), hoặc toàn bộ ống màu nâu đỏ.

Phản ứng này được hiểu là âm tính với sự khử carboxyl của lysine, nhưng dương tính với sự khử khử lysine.

Phản ứng này được xác định và giải thích trên khung.

Sản xuất hydro sunfua (H

Phản ứng dương tính được quan sát bằng cách xuất hiện kết tủa đen trong toàn bộ hoặc một phần môi trường. Thường là giữa cạnh của góc xiên và đế.

Nếu kết tủa xảy ra trong toàn bộ ống, nó sẽ không tiết lộ các phản ứng khác xảy ra ở giữa.

Bản ghi kết quả

Khi giải thích thử nghiệm, kết quả được ghi lại như sau:

Đầu tiên, góc xiên được đọc, sau đó là đáy hoặc khối, sau đó là sản xuất H ₂ S, và cuối cùng là sản xuất khí.

Ví dụ: K / A + (-). Điều này có nghĩa là:

• K: Viền kiềm (màu tím)
• A: Nền có tính axit (màu vàng), tức là phản ứng khử cacboxyl âm tính và khử amin âm tính.
• +: Sản xuất hydro sunfua
• (-): Không có gas.

Sự chuẩn bị

Cân 35 g môi trường lysine thạch sắt đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất.

Đun cho đến khi thạch tan hoàn toàn, để sôi trong một phút, khuấy thường xuyên. Phân phối 4ml môi trường vào 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Lấy ra khỏi nồi hấp và để đứng ở một góc sao cho có đáy sâu và góc xiên ngắn.

Bảo quản trong tủ lạnh 2-8 ° C. Hãy để nó ấm lên trước khi gieo chủng vi khuẩn.

Màu của môi trường khử nước là màu be và môi trường chuẩn bị có màu đỏ tía.

PH cuối cùng của môi trường đã chuẩn bị là 6,7 ± 0,2

Môi trường chuyển sang màu vàng ở pH 5,2 trở xuống và có màu tím ở pH 6,5 trở lên.

Các ứng dụng

Thử nghiệm này, cùng với các xét nghiệm sinh hóa khác, được sử dụng để xác định trực khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Môi trường được gieo hạt bằng một vòng thẳng hoặc kim, một hoặc hai lỗ được tạo ra dưới đáy ống, sau đó bề mặt của môi trường được ghi theo hình zic zắc.

Ủ trong 24 giờ ở 35-37 ° C trong môi trường hiếu khí. Nếu cần, nó sẽ được ủ thêm 24 giờ.

Nó chủ yếu hữu ích để phân biệt các loài Citrobacter âm tính với lactose với Salmonellas sp.

Nguồn: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

Người giới thiệu

1. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Ấn bản thứ 3. Biên tập Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
4. Phòng thí nghiệm Britannia. Thạch sắt lysine. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
5. Phòng thí nghiệm BD. BBL Lysine Sắt Agar Slants. 2007. Có tại: bd.com
6. Phòng thí nghiệm Valtek. LIA vừa 2009. Có sẵn tại: andinameica.com