AGAR MRS: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các MRS agar là một chất rắn văn hóa môi trường chọn lọc được sử dụng để cách ly và đếm vi khuẩn axit lactic, đặc biệt là của Lactobacillus chi. Loại thạch này được tạo ra vào năm 1960 bởi Man, Rogosa và Sharpe, mang cùng một tên, nhưng do độ phức tạp của nó nên người ta thường sử dụng tên viết tắt MRS.

Nó bao gồm peptone proteose, chiết xuất thịt, chiết xuất nấm men, glucose, sorbitan monoleate, dipotassium phosphate, natri axetat, amoni xitrat, magie sulfat, mangan sulfat và thạch.

Man Rogosa và Sharpe Agar (MRS) được gieo hạt với Lactobacillus sp. Nguồn: Ảnh tặng cho bài viết này của các tác giả: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Ảnh chụp trong quá trình điều tra có tên: Đánh giá vi khuẩn axit lactic và vi khuẩn Bifidobacteria có tiềm năng lợi khuẩn trong sữa mẹ và phân trẻ sơ sinh .

Chế phẩm này cho phép sự phát triển thích hợp của vi khuẩn axit lactic từ các mẫu lâm sàng, chẳng hạn như phân, dịch tiết âm đạo, mẫu miệng và sữa mẹ, cũng như thực phẩm từ sữa và thịt.

Nó không được sử dụng thường xuyên trong các phòng thí nghiệm lâm sàng, vì vi khuẩn axit lactic hiếm khi tham gia vào các quá trình bệnh. Tuy nhiên, trong lĩnh vực vi sinh thực phẩm, việc sử dụng thạch MRS thường xuyên hơn.

Mặt khác, môi trường này được sử dụng bởi một số Trung tâm nghiên cứu với mục tiêu là nghiên cứu vi khuẩn axit lactic.

Nền tảng

Man, Rogosa và Sharpe agar có thành phần khá phức tạp. Bằng cách chia nhỏ chức năng của từng thành phần, nền tảng của nó có thể được giải thích.

Proteose peptone, chiết xuất thịt, chiết xuất nấm men và glucose là những chất dinh dưỡng cung cấp nguồn carbon, nitơ, vitamin và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Hơn nữa, glucose là nguồn năng lượng phổ quát được sử dụng trong hầu hết các môi trường nuôi cấy.

Mặt khác, để tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của vi khuẩn axit lactic, sự hiện diện của các đồng yếu tố (cation) cần thiết trong quá trình chuyển hóa của Lactobacillus và các vi khuẩn liên quan là cần thiết; Các hợp chất này là muối natri, magiê và mangan.

Tương tự như vậy, sorbitan monoleate hoặc polysorbate 80 là một nguồn axit béo quan trọng khi chúng được hấp thụ dưới dạng chất dinh dưỡng.

Hơn nữa, sorbitan monoleate và ammonium citrate hoạt động bằng cách ức chế sự phát triển của hệ thực vật đi kèm, đặc biệt là vi khuẩn Gram âm, cung cấp đặc tính chọn lọc của thạch này.

Cuối cùng, agar-agar là thứ cung cấp độ đặc chắc cho môi trường.

Có các biến thể khác của Man Rogosa Sharpe agar; một trong số chúng được bổ sung cysteine ​​(MRSc), rất hữu ích cho việc phân lập bifidobacteria, trong số các vi sinh vật khác. Mặt khác, có môi trường MRS được bổ sung neomycin, paromomycin, axit nalidixic và liti clorua, đặc biệt để đếm chọn lọc vi khuẩn bifidobacteria trong các sản phẩm sữa.

Sự chuẩn bị

Cân 68,25 gam môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Để yên trong 5 phút. Để hòa tan hoàn toàn, chuyển sang nguồn nhiệt, khuấy thường xuyên và đun sôi trong 1 đến 2 phút. Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Khi rời khỏi nồi hấp, để yên trong vài phút và phân phối khi còn nóng vào các đĩa Petri vô trùng.

Để đông cứng và đảo đĩa, xếp vào giá để đĩa và bảo quản lạnh cho đến khi sử dụng. Để đĩa ấm đến nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.

PH của môi trường phải là 6,4 ± 0,2. Một số nhà thương mại khuyến nghị pH từ 5,5 đến 5,9.

Môi trường khử nước có màu be và chuẩn bị có màu hổ phách sẫm.

Cả môi trường khử nước và các đĩa đã chuẩn bị phải được bảo quản ở 2-8 ° C.

Các ứng dụng

Đĩa thạch MRS có thể được tạo hạt bề mặt (cạn kiệt hoặc thìa Drigalski). Nó cũng có thể được gieo theo độ sâu. Các tấm phải được ủ ở 37 ° C trong môi trường vi sinh (4% O ₂ và 5-10% CO ₂ ) trong 24 đến 72 giờ.

Phương pháp gieo được chọn tùy theo mục đích theo đuổi (cách ly hoặc đếm).

Đặc điểm của các thuộc địa

Các khuẩn lạc giả định của Lactobacillus phát triển có màu trắng và có dạng nhầy hoặc kem trên thạch này. Sau đó chúng phải được xác định.

Phân lập vi khuẩn axit lactic

Đối với điều này, gieo hạt bề mặt được sử dụng. Các mẫu được gieo yêu cầu một quy trình trước đó.

Đối với mẫu sữa mẹ, nên ly tâm 1 ml mẫu ở tốc độ 14.000 vòng / phút trong 10 phút, để loại bỏ lớp béo. 900 µl được loại bỏ, và trong 100 µl còn lại, cặn lơ lửng và đổ lên bề mặt của thạch MRS. Sau đó, nó phải được phân phối đều bằng thìa Drigalski.

Đối với mẫu phân, một (1) gam phân được cân và làm đồng nhất trong 9 mL nước peptone vô trùng 0,1%, tương ứng với độ pha loãng 1/10. Sau đó, pha loãng nối tiếp được thực hiện cho đến khi ^{thu được độ} pha loãng cuối cùng là 10 ^-4 .

Cuối cùng, 100 µl của các độ pha loãng 10 ^-2 , 10 ^-3 và 10 ^-4 được lấy và mỗi độ pha loãng được cấy trên thạch MRS, phân phối đều bằng thìa Drigalski.

Số lượng vi khuẩn lactic

Trong trường hợp này, việc gieo hạt được thực hiện theo độ sâu.

Đối với mẫu sữa mẹ, 1 mL được lấy và cho vào ống nhựa hình nón vô trùng. Thạch MRS được thêm ở nhiệt độ xấp xỉ 40 ° C đến thể tích cuối cùng là 25 mL, thu được hỗn hợp đồng nhất. Sau đó, nó được đổ vào các đĩa Petri vô trùng một cách đồng nhất và để yên cho đến khi trùng hợp.

Đối với mẫu phân, các dung dịch pha loãng được thực hiện, như đã mô tả trước đây. Lấy 1 mL của mỗi độ pha loãng và cho vào các ống nhựa hình nón vô trùng. Thạch MRS nóng chảy được thêm vào thể tích 25 mL.

Hỗn hợp của mỗi độ pha loãng được đổ đều vào các đĩa Petri vô trùng. Cuối cùng, nó được để cho phần còn lại cho đến khi trùng hợp.

Số lượng khuẩn lạc trên thạch Man Rogosa và Sharpe (MRS). Nguồn: Ảnh tặng cho bài viết này. Các tác giả: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Ảnh chụp trong quá trình Nghiên cứu có tên: Đánh giá vi khuẩn axit lactic và Bifidobacteria với tiềm năng lợi khuẩn trong sữa mẹ và phân trẻ sơ sinh.

Mức độ nghiên cứu

Mỗi ngày, nghiên cứu về vi khuẩn axit lactic ngày càng được quan tâm; Các nhà nghiên cứu đặc biệt tìm cách tìm hiểu về các chủng mới và tiềm năng của chúng khi lên men khởi động để tiêu chuẩn hóa trong sản xuất các sản phẩm từ sữa, trong số các ứng dụng khác.

Theo nghĩa này, Alvarado et al. (2007) đã sử dụng thạch MRS để thực hiện một nghiên cứu, trong đó họ phân lập, xác định và đặc trưng vi khuẩn axit lactic có trong pho mát hun khói Andean thủ công của Venezuela.

Trong pho mát, họ tìm thấy sự hiện diện của vi khuẩn thuộc các giống Lactococcus và Lactobacillus, và kết luận rằng hỗn hợp của các chủng phân lập thích hợp làm chủng khởi động trong sản xuất pho mát từ sữa tiệt trùng.

Mặt khác, Sánchez et al. (2017) đã sử dụng thạch MRS để điều tra sự hiện diện của vi khuẩn axit lactic trong đường tiêu hóa của heo con, nhằm sử dụng chúng như chế phẩm sinh học bản địa giúp tăng năng suất của heo con khỏe mạnh.

Với môi trường này, họ đã phân lập được 4 loài: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae và Pediococcus pentosaceus.

Tương tự như vậy, Báez et al. (2019) đã sử dụng thạch MRS để đánh giá vi khuẩn axit lactic (LAB) và vi khuẩn bifidobacteria có tiềm năng lợi khuẩn trong sữa mẹ và phân của trẻ sơ sinh.

Họ đã phân lập được 11 BAL và 3 Bifidobacteria sp trong sữa mẹ, và 8 BAL và 2 Bifidobacteria sp. trong phân. Tất cả đều đáp ứng các thông số nhất định chứng minh chúng là vi khuẩn có hoạt tính probiotic.

Các tác giả kết luận rằng cả sữa mẹ và phân của trẻ bú mẹ hoàn toàn đều đóng vai trò là nguồn vi khuẩn probiotic tự nhiên.

QA

Để đánh giá chất lượng của thạch MRS, kiểm soát các chủng như:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli và Bacillus cerei.

Kết quả mong đợi là sự phát triển khả quan của 6 vi khuẩn đầu tiên, trong khi E. coli và Bacillus cereus phải bị ức chế hoàn toàn.

Người giới thiệu

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Phân lập, xác định và đặc tính của vi khuẩn axit lactic từ pho mát nghệ nhân Andean hun khói của Venezuela. Sử dụng nó như một nền văn hóa khởi đầu. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Có tại: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Phân lập vi khuẩn axit lactic từ đường tiêu hóa của lợn con. Ông điều tra. bác sĩ thú y. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Có tại: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Đánh giá vi khuẩn axit lactic và Bifidobacteria có tiềm năng lợi khuẩn trong sữa mẹ và phân của trẻ sơ sinh ở thành phố Acevedo, Miranda 2017. Làm việc đại học để đủ điều kiện cho bằng Cử nhân trong Phân tích sinh học. Đại học Carabobo, Venezuela.
4. Phòng thí nghiệm Britannia. Thạch MRS. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
5. Những người đóng góp Wikipedia. Thạch MRS. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 10 tháng 1 năm 2018, 19:44 UTC. Có tại: wikipedia.org Truy cập ngày 17 tháng 2 năm 2019.
6. Roy D. Phương tiện để phân lập và định lượng bifidobacteria trong các sản phẩm sữa. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.