THẠCH DINH DƯỠNG: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các agar dinh dưỡng là một phương tiện không chuyên biệt và không có văn hóa rắn khác biệt. Tất cả các loại vi khuẩn không đòi hỏi về mặt dinh dưỡng đều phát triển trong môi trường này.

Nó là một phương tiện đơn giản và, mặc dù tên gọi của nó, nó chứa giá trị dinh dưỡng thấp hơn so với các phương tiện tương tự khác, chẳng hạn như Brain Heart Infusion Agar hoặc Trypticase Soy Agar.

Số lượng khuẩn lạc trên thạch dinh dưỡng

Tính hữu ích của nó trong phòng thí nghiệm rất đa dạng. Nó chủ yếu được sử dụng để nuôi cấy phụ các loài, duy trì chủng, đếm khuẩn lạc, làm cơ sở để chuẩn bị thạch máu, trong số những loại khác.

Tương tự như vậy, do có màu be nhạt, việc sản xuất các sắc tố do một số chủng vi khuẩn tạo ra có thể được phân biệt một cách đặc biệt, chẳng hạn như sắc tố xanh lục của Pseudomonas aeruginosa, sắc tố đỏ gạch do Serratia marcescens tạo ra ở nhiệt độ phòng, sắc tố vàng vàng của Staphylococcus aureus, trong số những người khác.

Ngoài ra, nó là một trong những phương tiện trồng trọt rẻ nhất được tìm thấy trên thị trường.

Nền tảng

Như đã đề cập ở trên, nó là một môi trường rất đơn giản dựa vào việc cung cấp các chất dinh dưỡng cho sự phát triển của vi khuẩn mà không bị hạn chế và không có các phản ứng phức tạp để giải thích.

Vì môi trường trong mờ, nên lý tưởng để đếm khuẩn lạc bằng phương pháp gieo hạt theo chiều sâu.

Thành phần

Nó được cấu tạo chủ yếu từ chiết xuất thịt hoặc chiết xuất nấm men, pepton hoặc gelatin phân hủy tuyến tụy, thạch agar, natri clorua và nước cất.

Chiết xuất từ ​​thịt hoặc men và pepton đại diện cho các nguồn cacbon và khoáng chất thiết yếu (nitơ, phốt pho và lưu huỳnh), sẽ được vi khuẩn sử dụng làm nguồn năng lượng và các yếu tố tăng trưởng.

Tương tự như vậy, agar-agar là cơ sở của tất cả các môi trường nuôi cấy rắn, sắp thay thế gelatin, là hợp chất cơ bản đầu tiên được Robert Koch sử dụng để tạo độ đồng nhất cho môi trường của ông.

Agar là một polysaccharide bao gồm galactose, galactomannan, agarose và agaropectin. Nó đặt ở 40 ° C và nóng chảy gần 100 ° C.

Về phần mình, natri clorua cung cấp cho môi trường độ thẩm thấu cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn.

Cuối cùng, nước dùng để hydrat hóa và hòa tan các hợp chất đông khô. Nên sử dụng nước cất được điều chỉnh về độ pH trung tính. Không nên sử dụng nước máy vì nó chứa canxi và magiê có thể phản ứng với phốt phát trong môi trường và tạo thành muối không hòa tan.

Sự chuẩn bị

Đối với một lít thạch dinh dưỡng, phải cân 31 g môi trường đã khử nước. Cho vào bình và hòa tan trong một lít nước cất. Sau 5 phút để yên, đun nóng trên nguồn nhiệt và trộn liên tục cho đến khi sôi trong 1 hoặc 2 phút.

Chuẩn bị môi trường nuôi cấy.

Sau đó đặt bình vào nồi hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 20 phút.

Khử trùng trong nồi hấp

Vào cuối thời gian, nó được lấy ra khỏi nồi hấp và được phục vụ trong các đĩa Petri vô trùng, sử dụng tủ hút tầng hoặc đầu đốt Bunsen.

Nếu các đĩa Petri dùng một lần (bằng nhựa), thì môi trường phải được phân phối khi thạch có nhiệt độ xấp xỉ 50 ° C, để ngăn chúng bị biến dạng do nhiệt độ quá cao.

Để đông đặc và bảo quản trên khay đĩa đảo ngược và để trong tủ lạnh ở 2-8 ° C cho đến khi sử dụng.

Các tấm phải được ủ trước khi được tạo hạt. Không nên sử dụng đĩa thạch dinh dưỡng nếu chúng bị nhiễm bẩn hoặc mất nước.

PH của môi trường đã chuẩn bị phải được điều chỉnh đến 7,3 ± 0,2.

Các ứng dụng

Đây là môi trường nuôi cấy đơn giản nhất được sử dụng trong phòng thí nghiệm vi sinh. Công thức của nó là tuyệt vời cho sự phát triển của vi khuẩn không khắt khe.

Công dụng chính của nó được giải thích dưới đây:

Làm cơ sở cho việc chuẩn bị thạch máu

Môi trường này đôi khi được sử dụng làm cơ sở để chuẩn bị thạch máu, tuy nhiên nó không phải là môi trường được sử dụng phổ biến nhất.

Kích thích sự hình thành bào tử của vi khuẩn

Môi trường nuôi cấy này đặc biệt hữu ích để kích thích quá trình sinh sản của vi khuẩn tạo bào tử như Bacillus sp.

Để làm được điều này, một dòng thuộc giống Bacillus được gieo và ủ trong 24 giờ ở 37 ° C trong môi trường hiếu khí. Khi các khuẩn lạc đã phát triển, đĩa phải chịu áp suất nhiệt, tức là nhiệt độ của tủ sấy được tăng lên 44 ° C và để trong 24 giờ nữa hoặc đặt trong tủ lạnh trong 24 giờ.

Vào cuối thời gian, các vết bẩn của mẫu cấy được tạo ra và nhuộm bằng nhuộm Gram hoặc nhuộm bào tử Shaeffer-Fulton. Trong đó sẽ quan sát được trực khuẩn có nội bào tử (bào tử bên trong trực khuẩn) và ngoại bào tử (bào tử bên ngoài trực khuẩn).

Bảo dưỡng căng thẳng

Một số phòng thí nghiệm hỗ trợ nghiên cứu hoặc giảng dạy đại học yêu cầu duy trì các vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng càng lâu càng tốt, để sử dụng ngân hàng vi khuẩn (bacterioteca) cho công việc nghiên cứu hoặc để chuẩn bị các thực hành giảng dạy, trong đó Học sinh sẽ học cách thao tác và xác định các vi sinh vật này.

Thạch dinh dưỡng, cũng như thạch truyền tim não, có thể được sử dụng cho mục đích này. Thạch được chuẩn bị, đổ vào các ống có nắp bakelite và đặt nghiêng trên đế, sao cho thạch đông đặc lại tạo thành một khối ở đáy và một đường vát trên bề mặt (mỏ sáo).

Mỗi ống được dán nhãn với tên của vi khuẩn được gieo hạt và ngày tháng. Mỗi vi khuẩn sẽ được ươm trên góc xiên và ủ trong 24 giờ. Khi các khuẩn lạc đã phát triển, các ống này được bảo quản ở nhiệt độ phòng.

Vi khuẩn phải được thay mới từ 1 đến 3 tháng, để tránh ô nhiễm và mất nước của môi trường cũng như làm chết vi khuẩn.

Chỉ những vi khuẩn không kén mới có thể được duy trì theo cách này.

Số lượng thuộc địa

Mặc dù có các phương tiện chuyên dụng để đếm khuẩn lạc, chẳng hạn như thạch đếm tiêu chuẩn, thạch dinh dưỡng có thể được sử dụng cho mục đích này, bằng cách gieo hạt bề mặt bằng thìa khoan drigalski hoặc bằng cách cấy theo chiều sâu. Vì lý do này, nó rất hữu ích trong việc phân tích vi sinh vật của thực phẩm và nước.

Chạy thử nghiệm chẩn đoán

Vì là môi trường không chứa máu, hoặc bất kỳ chất phụ gia nào khác, nên lý tưởng nhất là lấy khuẩn lạc được nuôi cấy trên môi trường này để thực hiện phép thử catalase.

Tương tự như vậy, do màu sáng của nó, nó được chỉ định để thực hiện các thử nghiệm oxidase trực tiếp trên một khu vực của hạt thạch mà không bị can thiệp.

Phục hồi vi khuẩn ưa khí từ nước muối giải trí (Bãi biển)

Thạch dinh dưỡng được chuẩn bị với 10% nước biển rất hữu ích cho việc đánh giá vi khuẩn ưa khí trong nước biển.

Bằng cách này, có thể đánh giá được mức độ ô nhiễm thực sự của nước với các vi sinh vật này, vì trong loại mẫu này, kết quả bị trùng lặp khi sử dụng môi trường nuôi cấy được chuẩn bị theo cách thông thường.

Điều này đã được chứng minh bởi Cortez et al. vào năm 2013 trong một công trình nghiên cứu.

Điều này có thể được giải thích là do sự thay đổi đột ngột mà vi khuẩn trải qua khi đi từ môi trường quá mặn sang môi trường ít muối, do đó vi sinh vật đi vào trạng thái lờ đờ mà chúng có thể sống được, nhưng không thể nuôi cấy được.

Người giới thiệu

1. "Thạch dinh dưỡng." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 13 tháng 9 năm 2016, 20:33 giờ UTC. Ngày 29 tháng 12 năm 2018, 21:04 en.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Xuất bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy được chuẩn bị với nước biển đối với các chỉ số sức khỏe trong nước biển của các spa ở Chichiriviche, bang Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M và Cardoso M. Chất lượng vi sinh của nước cho liều phối giống cho lợn. Cient.Agro.Amaz. Năm 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Thực hành vi sinh lâm sàng. Đại học Cadiz, tái bản lần thứ 2. Dịch vụ xuất bản UCA.