SABOURAUD AGAR: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các thạch Sabouraud , còn được gọi là Sabouraud Dextrose thạch, là một môi trường rắn, đặc biệt là làm giàu cho cô lập và phát triển của nấm, chẳng hạn như nấm men, nấm mốc và dermatophytes.

Vì vậy, không thể thiếu môi trường này trong phòng thí nghiệm vi sinh để khảo sát sự hiện diện của nấm gây bệnh hoặc nấm cơ hội, từ mẫu lâm sàng hoặc phi lâm sàng. Tương tự như vậy, nó cũng lý tưởng cho sự phát triển của các vi khuẩn dạng sợi như Streptomyces và Nocardias. Việc sử dụng nó rất rộng rãi, vì nó có thể được sử dụng trong cơ thể người, động vật, thực vật và công nghiệp.

A. Thạch Sabouraud không tráng. B. Thạch Sabouraud cấy giống với một loại nấm men. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa gil

Phương tiện này được tạo ra vào năm 1896 bởi bác sĩ da liễu nổi tiếng Raimond Sabouraud, người đã trở thành một chuyên gia nổi tiếng thế giới về các rối loạn của da đầu, chủ yếu do nấm da liễu gây ra.

Việc tạo ra nó quan trọng đến mức nó đã được sử dụng kể từ đó và vẫn còn cho đến ngày nay, mặc dù có một số sửa đổi.

Mặc dù đặc biệt đối với nấm, vi khuẩn có thể phát triển trong môi trường này, do đó, đối với các mẫu có hỗn hợp thực vật, cần phải bao gồm kháng sinh trong chế phẩm của chúng để ức chế sự phát triển của hệ vi khuẩn có thể có mặt.

Việc lựa chọn kháng sinh phải được thực hiện cẩn thận và tính đến loại nấm được phục hồi, vì một số loại bị ức chế khi có một số chất nhất định.

Nền tảng

Sabouraud dextrose agar là môi trường mà trong công thức ban đầu của nó có tính chọn lọc yếu, do pH có tính axit là 5,6 ± 0,2, tuy nhiên, vi khuẩn vẫn có thể phát triển, chủ yếu trong thời gian ủ bệnh kéo dài.

Môi trường chứa peptone casein và dịch tụy của mô động vật, cung cấp nguồn cacbon và nitơ cho sự phát triển của vi sinh vật.

Nó cũng chứa một hàm lượng cao glucose, hoạt động như một nguồn năng lượng, thúc đẩy sự phát triển của nấm hơn vi khuẩn. Tất cả những thứ này được trộn với agar-agar, một thành phần tạo cho nó độ đặc phù hợp.

Mặt khác, thạch Sabouraud dextrose có thể chọn lọc nếu thêm kháng sinh.

Với thuốc kháng sinh, nó đặc biệt hữu ích trong các mẫu vết thương, vết loét hở hoặc bất kỳ mẫu nào nghi ngờ nhiễm vi khuẩn lớn.

Sự kết hợp phổ biến nhất của thạch Sabouraud dextrose với kháng sinh

-Saburaud agar with chloramphenicol: lý tưởng để phục hồi nấm men và nấm sợi.

- Thạch Sabouraud với gentamicin và chloramphenicol: hầu như tất cả nấm sợi và nấm men đều phát triển trong môi trường này, và nó ức chế một số lượng lớn vi khuẩn, bao gồm Enterobacteriaceae, Pseudomonas và Staphylococcus.

- Thạch Sabouraud với cycloheximide: đặc biệt hữu ích cho các mẫu từ da hoặc đường hô hấp, miễn là nghi ngờ là nấm lưỡng hình.

Cycloheximide nên được sử dụng một cách thận trọng; Mặc dù nó được sử dụng để ức chế sự phát triển của nấm và nấm men không gây bệnh hoặc môi trường có thể có mặt dưới dạng chất gây ô nhiễm trong mẫu, nó cũng ức chế sự phát triển của một số loại nấm như Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp và các loại nấm cơ hội khác.

- Thạch Sabouraud với chloramphenicol cộng với cycloheximide: được sử dụng chủ yếu để phân lập nấm da và nấm lưỡng hình. Nó có nhược điểm là ức chế một số loài nấm cơ hội như Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes hoặc C. neoformans.

- Thạch Sabouraud với chloramphenicol, streptomycin, penicillin G và cycloheximide: rất lý tưởng cho các mẫu cực kỳ nhiễm vi khuẩn và nấm hoại sinh, nhưng có nhược điểm là ức chế sự phát triển của Actinomyces và Nocardias, ngoài các loại nấm cơ hội nêu trên.

Sự chuẩn bị

Nếu bạn có các thành phần riêng biệt, nó có thể được chuẩn bị như sau:

Sabouraud dextrose agar

Cân:

- 40 gr dextrose

- 10 g peptone

- 15 gr thạch agar

- Đong 1000 ml nước cất

Tất cả các thành phần được trộn đều, độ pH được điều chỉnh đến 5,6. Các chất tan được hòa tan bằng cách đun sôi, 20 ml môi trường được phân phối trong các ống 25 x 150 mm, không có vành và tốt nhất là có nắp bông.

Ống có nắp bông. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa gil

Các kích thước ống khác cũng có thể được sử dụng, tùy thuộc vào tình trạng sẵn có.

Chúng được hấp tiệt trùng trong 10 phút ở áp suất không khí (121 ° C). Không được vượt quá thời gian hấp. Khi rời khỏi nồi hấp, các ống này được nghiêng với sự trợ giúp của giá đỡ cho đến khi chúng đông đặc lại trong mỏ ống sáo.

Một cách khác là hòa tan nguyên liệu bằng cách đun cho đến khi sôi. Hấp trong 10 phút trong cùng một lọ và sau đó phân phối 20 ml vào đĩa Petri.

Nếu bạn có môi trường thạch Sabouraud dextrose đã chứa tất cả các thành phần, hãy tiến hành cân lượng nước do công ty thương mại chỉ định cho một lít nước. Các bước còn lại tương tự như các bước đã mô tả ở trên.

Sabouraud dextrose agar (sửa đổi Emmons)

Cân:

- 20 gr dextrose

- 10 g peptone

- 17 gr thạch agar

- Đong 1000 ml nước cất

Tất cả các thành phần được trộn đều, độ pH được điều chỉnh đến 6,9. Tiến hành tương tự như trường hợp trước.

Có những nhà thương mại cung cấp phương tiện với đầy đủ các thành phần. Trong trường hợp này, cân và chuẩn bị như mô tả trên tờ hướng dẫn.

Thạch Sabouraud dextrose (sửa đổi Emmons) với chloramphenicol

Dung dịch gốc cloramphenicol

- Cân 500 mg cloramphenicol base

- Đong 100 ml etanol 95%

- Pha trộn

Môi trường thạch Sabouraud dextrose (Emmons) được chuẩn bị như đã mô tả trước đó và thêm vào mỗi lít môi trường, thêm 10 ml dung dịch gốc cloramphenicol trước khi hấp.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar với Cycloheximide

Giải pháp gốc Cycloheximide

- Cân 5 gr xycloheximide

- Đong 100 ml axeton

- Pha trộn

Môi trường thạch Sabouraud dextrose (Emmons) được chuẩn bị như đã mô tả và thêm vào mỗi lít môi trường, thêm 10 ml dung dịch gốc xycloheximide trước khi hấp.

Thạch Sabouraud dextrose (Emmons) với chloramphenicol và cycloheximide

Môi trường thạch Sabouraud dextrose (Emmons) được chuẩn bị như đã mô tả trước đó và thêm vào mỗi lít môi trường, thêm 10 ml dung dịch gốc cloramphenicol và 10 ml dung dịch gốc xycloheximide trước khi hấp.

Các kháng sinh khác có thể được bổ sung

20.000 đến 60.000 đơn vị penicillin trên một lít môi trường.

30 mg streptomycin trên một lít môi trường.

Cả hai phải được kết hợp sau khi môi trường đã được hấp tiệt trùng, làm nguội nhẹ (50-55 ° C).

0,04 g neomycin trên một lít môi trường.

0,04 g gentamicin trên một lít môi trường.

Cân nhắc đặc biệt

Để an toàn, nên gieo thạch Sabouraud dextrose trong các ống hình nêm (nghiêng theo hình mỏ sáo) hơn là trong đĩa Petri, để tránh phân tán và hít phải bào tử.

Điều quan trọng là các ống thạch Sabouraud phải được đậy bằng bông và không có nắp vặn, vì điều kiện bán kỵ khí đã được chứng minh là có thể ức chế sự hình thành bào tử ở một số chủng, ví dụ Coccidioides immitis. Ngoài ra, hầu hết các loại nấm đều hiếu khí.

Trong trường hợp sử dụng nắp vặn, không được đóng kín.

QA

Phương tiện đã chuẩn bị phải trải qua quá trình kiểm soát chất lượng để xác minh chức năng của nó. Đối với điều này, một số chủng kiểm soát nhất định được gieo.

Đối với thạch Sabouraud dextrose với chloramphenicol, có thể sử dụng các chủng Candida albicans ATCC, chủng này phải có khả năng sinh trưởng tốt. Một đĩa khác được cấy các chủng Escherichia coli, chủng này phải được ức chế hoàn toàn.

Một đĩa chưa cấy cũng được ủ trong đó không có vi sinh vật nào phát triển.

Đối với thạch Sabouraud dextrose với chloramphenicol và cycloheximide, có thể sử dụng các chủng Trichophyton mentagrophytes và chúng sẽ phát triển tốt. Một đĩa khác được cấy một dòng Aspergillus flavus, trong đó phải có ít hoặc không phát triển. Ngoài ra, một đĩa chưa cấy được ủ để chứng minh tính vô trùng của nó.

Đối với thạch Sabouraud dextrose với cycloheximide, các chủng Candida albicans, Trichophyton rubrum hoặc Microsporum canis được sử dụng, phải cho thấy sự phát triển tốt.

Tương tự như vậy, một dòng Aspergillus flavus được bao gồm, cho thấy ít hoặc không tăng trưởng. Cuối cùng, ủ đĩa chưa cấy để kiểm soát độ vô trùng.

Các ứng dụng

Văn hóa sơ cấp

Thạch Sabouraud dextrose cổ điển chứa 4 gam dextrose và là môi trường phân lập tuyệt vời vì nó thể hiện hình thái đặc trưng của từng loại nấm.

Nó cũng tuyệt vời để chứng minh sản xuất sắc tố. Tuy nhiên, nó không phải là phương tiện tốt nhất để quan sát sự hình thành bào tử.

Nó cũng không được khuyến khích để nuôi cấy Blastomyces dermatitidis, loại nấm này bị ức chế bởi nồng độ cao của glucose hiện tại.

Mặt khác, đối với việc tu luyện nhất định phải cân nhắc.

Một số loại nấm phát triển tốt nhất ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như nấm mốc, một số khác phát triển thành công ở 37 ° C, chẳng hạn như một số loại nấm men, và những loại khác có thể phát triển ở cả hai nhiệt độ (nấm lưỡng hình).

Vì lý do này, đôi khi cần sử dụng nhiều đĩa thạch Sabouraud cho cùng một mẫu, vì việc gieo hạt nhân đôi thường được thực hiện để ủ một đĩa ở nhiệt độ phòng và đĩa khác ở 37 ° C.

Ví dụ, Sporothrix schenckii được gieo vào hai đĩa; một loại được ủ ở nhiệt độ phòng để thu được pha nấm mốc và một loại được ủ ở 37 ° C để thu được pha men, nhưng trong trường hợp này cần thêm 5% máu vào môi trường.

Trong các trường hợp khác, chẳng hạn như các mẫu mycetoma, hai đĩa thạch Sabouraud được cấy hạt, một đĩa với chloramphenicol và đĩa kia với cycloheximide. Thứ nhất sẽ cho phép sự phát triển của các tác nhân gây bệnh mycetoma có nguồn gốc nấm (Eumycetoma) và các tác nhân gây bệnh thứ hai của mycetoma có nguồn gốc vi khuẩn, chẳng hạn như actinomycetomas.

Bào tử

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar chứa 2 gam dextrose và không chỉ được sử dụng để phân lập mà còn để tạo bào tử và bảo quản nấm.

Trong môi trường này, các chủng Blastomyces dermatitidis có thể được phục hồi.

Sự bảo tồn

Để bảo quản nấm, chúng có thể được bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C). Thời gian bảo tồn có thể thay đổi từ 2 đến 8 tuần. Sau thời gian này, chúng phải được cấy ghép để lặp lại quá trình.

Một số loại nấm giữ nhiệt tốt nhất ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum, và Microsporum audounii.

Việc duy trì dòng có thể được kéo dài để tránh đa hình nếu loại bỏ hoàn toàn dextrose khỏi thạch và nếu lượng thạch trong môi trường giảm để tránh khô.

Nuôi cấy vi mô

Để xác định một số nấm sợi, cần thực hiện vi nuôi cấy bằng cách sử dụng thạch Sabouraud hoặc các phương tiện đặc biệt khác để quan sát các cấu trúc của sinh sản hữu tính và vô tính.

Trong thần học của con người

Nó được sử dụng chủ yếu để chẩn đoán các bệnh nấm, đặc biệt là những bệnh ảnh hưởng đến da và các phần đính kèm của nó (tóc và móng tay).

Các mẫu có thể là dịch tiết, dịch tiết, da, tóc, móng, đờm, dịch não tủy hoặc nước tiểu. Các tác nhân gây bệnh thường được phân lập là nấm da, gây bệnh nấm da dưới da và toàn thân.

Thần học động vật

Động vật thường bị ảnh hưởng bởi nhiễm nấm, do đó thạch Sabouraud hữu ích trong nghiên cứu nấm học động vật cũng như ở người.

Ví dụ, nấm da thường có thể ảnh hưởng đến động vật. Đó là trường hợp của vi khuẩn Microsporum canis var distortum, thường lây nhiễm cho chó, mèo, ngựa, lợn và khỉ. Tương tự như vậy, Microsporum gypseum lây nhiễm cho chó, mèo và gia súc.

Các loài chim như gà, gà trống và gà bị ảnh hưởng bởi Microsporum gallinae.

Các loại nấm khác, chẳng hạn như Zymonema farciminosum, cũng là nguyên nhân gây bệnh cho động vật, chủ yếu ở ngựa, la và lừa, tạo ra chứng viêm đáng kể trong các mạch bạch huyết.

Sporothrix schenkii và Histoplasma capsulatum ảnh hưởng đến vật nuôi và con người.

Thần học môi trường

Nhiều loại nấm gây bệnh hoặc cơ hội có thể tập trung tại bất kỳ thời điểm nào trong một môi trường nhất định, đặc biệt là trong các phòng mổ và Khoa Chăm sóc Đặc biệt (ICU) của các phòng khám và bệnh viện. Do đó cần thực hiện kiểm soát chúng.

Các không gian dễ bị tổn thương khác là thư viện và các tòa nhà cũ, có thể bị ảnh hưởng bởi sự tập trung của nấm môi trường.

Trong các nghiên cứu môi trường, thạch Sabouraud dextrose được sử dụng để phân lập nấm.

Thần học công nghiệp

Sabouraud dextrose agar không thể vắng mặt trong việc nghiên cứu nấm gây ô nhiễm trong sản xuất mỹ phẩm, thực phẩm, đồ uống, da thuộc, dệt may, v.v.

Nấm học thực vật

Cây cũng bị bệnh do nấm gây ra, ảnh hưởng đến các bộ phận khác nhau của cây, thậm chí có thể kết thúc vụ thu hoạch, gây thiệt hại lớn về nông nghiệp.

Người giới thiệu

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Chẩn đoán vi sinh đối với mycoses và các nghiên cứu về độ nhạy kháng nấm. Khuyến nghị của Hiệp hội các bệnh truyền nhiễm và vi sinh lâm sàng Tây Ban Nha. Có tại: coesant-seimc.org
2. Phòng thí nghiệm ValteK. (2009). Thạch Sabouraud dextrose với cycloheximide. Có sẵn tại: andinameica.com.
3. Navarro O. (2013). Bệnh nấm thú y. Đại học Nông nghiệp Quốc gia. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Mycology tổng quát. 1994. Lần xuất bản thứ 2 Đại học Trung tâm Venezuela, Phiên bản Thư viện. Caracas Venezuela.