SALMONELLA-SHIGELLA AGAR: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các agar Salmonella Shigella hay còn gọi là SS thạch là một lựa chọn và vừa khác biệt vừa phải, thiết kế đặc biệt để phân lập vi khuẩn gây bệnh đường ruột của chi Salmonella và Shigella, cả hai mẫu môi trường như lâm sàng.

Thạch SS có thành phần phức tạp; Nó được tạo thành từ chiết xuất thịt, peptone, lactose, muối mật, natri citrat, natri thiosulfat, citrat sắt, thạch, màu đỏ trung tính, màu xanh lá cây tươi và nước cất. Với khả năng chọn lọc cao, các mẫu có hệ thực vật hỗn hợp phong phú có thể được gieo.

Thạch SS có khuẩn lạc Salmonella sp. Nguồn: Manurx27, từ Wikimedia Commons

Trong các phòng thí nghiệm vi sinh, môi trường Salmonella-Shigella được sử dụng rộng rãi để khảo sát sự hiện diện của Salmonella và Shigella trong mẫu phân tiêu chảy, nước thải, nước uống và thực phẩm.

Đôi khi cần sử dụng canh tăng sinh trước (canh đường lactose) và canh canh tăng sinh (canh thang selenite cystine) để thu hồi các chủng Salmonella.

Các bước này là bắt buộc khi nghi ngờ có sự tồn tại của Salmonella với số lượng rất thấp hoặc khi chủng vi khuẩn này có thể bị lạm dụng bởi các quy trình điển hình của sản xuất công nghiệp, chủ yếu là thực phẩm chế biến. Cũng nên làm giàu mẫu phân của bệnh nhân đã được điều trị bằng kháng sinh.

Sau đó, nước dùng đã được làm giàu có thể được cấy trên thạch Salmonella-Shigella và các môi trường tương tự khác, chẳng hạn như thạch xylose, lysine deoxycholate (XLD) và thạch Hektoen trong ruột (HE).

Nền tảng

Mỗi thành phần của môi trường nuôi cấy Salmonella-Shigella có một chức năng cụ thể và hỗn hợp nói chung cung cấp cho nó các đặc tính đặc trưng cho nó.

Nuôi dưỡng sức mạnh

Chiết xuất thịt và peptone (được tiêu hóa với casein và mô động vật) cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết (nitrogens, carbon và vitamin) cho sự phát triển của vi sinh vật có khả năng dung nạp các thành phần còn lại.

Tính nhất quán

Agar-agar có nhiệm vụ cung cấp độ đặc chắc cho môi trường.

Chọn lọc

Môi trường này có tính chọn lọc cao vì nó chứa muối mật, natri xitrat và màu xanh lục tươi sáng. Do đó, nó ức chế sự phát triển của tất cả các vi khuẩn Gram dương và hầu hết các trực khuẩn Gram âm, kể cả một số coliform.

Trong khi vi khuẩn thuộc giống Salmonella và một số chủng Shigella hỗ trợ các hợp chất này.

Chủ yếu, giống Salmonella rất đề kháng với muối mật, đến mức chúng có thể sống trong túi mật của một số bệnh nhân mang mầm bệnh liên tục thải vi khuẩn trong phân của họ.

Khác biệt

Lactose là carbohydrate có thể lên men giúp phân biệt các chủng lên men lactose với các chủng không lên men. Tính chất này được chứng minh bằng sự có mặt của chất chỉ thị pH, trong môi trường này có màu đỏ phenol.

Các chủng lên men lactose cho khuẩn lạc màu đỏ, còn các chủng không lên men thì không màu. Đặc điểm này rất quan trọng, vì Salmonella và Shigella không lên men đường lactose.

Mặt khác, môi trường này chứa natri thiosunfat là nguồn cung cấp sunfua và xitrat sắt là nguồn cung cấp sắt. Cả hai hợp chất đều có thể phân biệt vi khuẩn có khả năng tạo ra hydro sunfua. Những phản ứng này tạo thành kết tủa sắt sunfua màu đen, không tan, có thể nhìn thấy được.

Đặc tính này được tìm thấy ở một số chủng thuộc giống Salmonella. Bình thường các khuẩn lạc của chúng phẳng không màu với một chấm đen ở giữa. Phần còn lại của Salmonellas không tạo ra H ₂ S và phát triển dưới dạng khuẩn lạc không màu.

Mặt khác, các khuẩn lạc của giống Shigella phẳng không màu mà không bị thâm đen.

Sự chuẩn bị

Phương tiện này rất đơn giản để chuẩn bị.

Cân 63 g môi trường thương mại đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Đun nóng dung dịch và khuấy đều. Hỗn hợp có thể sôi lên đến vài phút.

Môi trường này không được hấp tiệt trùng. Sau khi hòa tan, nó được phục vụ trực tiếp trên các đĩa vô trùng đơn hoặc kép.

Khi đông đặc, chúng được sắp xếp theo chiều ngược trên các tiểu cầu và bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C) cho đến khi sử dụng.

Môi trường sau khi chuẩn bị phải duy trì ở pH 7,2 ± 0,2 và có màu đỏ cam.

Điều quan trọng là phải để các đĩa ấm lên trước khi gieo mẫu. Mẫu ban đầu có thể được gieo trực tiếp, thải vật liệu lên một phần của thạch và sau đó tạo vệt từ đó.

Trong trường hợp sử dụng nước dùng đã được làm giàu, hãy đổ một phần nước dùng selen và gieo bằng thìa drigalski.

Ủ ở 37 ° C trong 24 giờ trong môi trường hiếu khí.

Hãy nhớ rằng số gam cần cân và độ pH cuối cùng của môi trường có thể khác nhau giữa các nhà thương mại. Phần đế giữa luôn mang lại những dấu hiệu cho sự chuẩn bị của nó.

Sử dụng

Nó thường được sử dụng trong phân tích nuôi cấy phân và trong nghiên cứu vi sinh của nước thải, nước uống và mẫu thực phẩm.

Thường chuẩn bị các đĩa kép, trên một mặt thạch Salmonella-Shigella được đặt và trên thạch XLD còn lại.

Hạn chế

-Một số chủng Shigella không phát triển trong môi trường này. Do đó, nó không được khuyến cáo để phân lập chính của chi này.

-Không phải mọi khuẩn lạc trong suốt với tâm màu đen đều là biểu hiện của Salmonella; Các xét nghiệm sinh hóa phải được thực hiện để xác định chính xác, vì các khuẩn lạc của một số chủng Proteus không thể phân biệt được với khuẩn lạc của Salmonella.

- Môi trường khử nước phải cẩn thận khi tiếp xúc với môi trường, vì nó rất dễ hút ẩm. Vì vậy, nó phải được giữ trong một môi trường khô ráo và đóng kín. Mở trong thời gian rất ngắn.

- Đôi khi, muối mật trong môi trường có thể kết tủa, tạo thành hình ảnh tương tự như một lớp nền bên trong thạch, nhưng điều này không ảnh hưởng đến kết quả.

-Một số chủng Shigella có thể lên men đường lactose chậm.

QA

Để chứng minh rằng môi trường hoạt động chính xác, nên trồng các chủng đối chứng đã biết hoặc đã được chứng nhận và quan sát xem sự phát triển có đáp ứng các đặc tính mong đợi hay không.

Đối với điều này, có thể sử dụng các chủng E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium hoặc Enterococcus faecalis.

Kết quả mong đợi là:

Enterobacter và Klebsiella ------ khuẩn lạc lớn và chất nhầy màu đỏ hoặc hồng.

Shigella flexneri ---------- khuẩn lạc phẳng trong suốt hoặc không màu.

Salmonella typhimurium ------ khuẩn lạc không màu với tâm màu đen.

Enterococcus faecalis -------- ức chế toàn bộ.

Người giới thiệu

1. Phòng thí nghiệm Difco Francisco Soria Melguizo. Thạch Salmonella-Shigella. 2009. Có sẵn tại: f-soria.es
2. Phòng thí nghiệm BD. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Có sẵn tại: bd.com
3. Phòng thí nghiệm Britannia. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
4. Chẩn đoán Valtek. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar) .2010. Có sẵn tại: andinameica.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.