THẠCH ĐẬU NÀNH TRYPTICASEIN: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CÁCH BÀO CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các nành agar tryptone hoặc Trypticase đậu nành Agar là một môi trường nuôi cấy rắn, và không chuyên biệt về dinh dưỡng. Nó được ký hiệu bằng các chữ cái TSA cho từ viết tắt của nó trong tiếng Anh là Trypticase Soy Agar. Nó bao gồm triptein, peptone đậu nành, natri clorua và agar-agar.

Do sức mạnh dinh dưỡng cao, nó là lý tưởng cho việc nuôi cấy các vi sinh vật có nhu cầu vừa phải và không đòi hỏi khắt khe. Môi trường không có chất bổ sung không được khuyến khích cho nuôi cấy sơ cấp, nhưng nó rất hữu ích để nuôi cấy phụ các chủng thuần chủng và giữ cho chúng sống sót, trong số các cách sử dụng khác.

Nêm thạch đậu nành trypticasein trong ống có nắp bakelite. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Ngoài ra, thạch này dùng làm cơ sở để chuẩn bị môi trường làm giàu như thạch máu, đặc biệt là khi cần quan sát các kiểu tán huyết và gắn phân loại optoquine và bacitracin, cần thiết trong chẩn đoán Streptococcus pneumoniae và Streptococcus pyogenes tương ứng.

Mặt khác, khi kết hợp với kháng sinh, rất hữu ích để phân lập các vi sinh vật kỵ khí quan trọng về mặt lâm sàng từ các mẫu có hỗn hợp thực vật.

Cuối cùng, thành phần của thạch đậu nành trypticasein và hiệu suất của nó đáp ứng các yêu cầu của các dược điển khác nhau (Châu Âu, Nhật Bản và Bắc Mỹ).

Nền tảng

Đối với sự phát triển thích hợp của vi khuẩn, sự hiện diện của các nguồn cung cấp năng lượng là cần thiết, chẳng hạn như axit amin, vitamin, bazơ puric và pyrimidic.

Theo nghĩa này, triptein và peptone đậu nành cung cấp các chất dinh dưỡng này cho vi sinh vật, do đó cho phép chúng phát triển đầy đủ. Tuy nhiên, đối với những vi khuẩn khó tính cần bổ sung thạch này với máu đã khử hoặc máu đã được làm ấm để tăng độ phong phú.

Mặt khác, nếu thêm kháng sinh vào môi trường, nó sẽ trở thành môi trường chọn lọc. Chiết xuất nấm men 0,6% cũng có thể được thêm vào để tạo thuận lợi cho việc phân lập các loài thuộc giống Listeria, trong khi việc bổ sung cystine tellurite và máu cừu là lý tưởng cho Corynebacterium diphteriae.

Cuối cùng, natri clorua cung cấp sự cân bằng thẩm thấu cho môi trường và thạch tạo độ đặc.

Sự chuẩn bị

Tấm thạch đậu nành trypticasein

Để chuẩn bị thạch đậu nành trypticasein, cần cân 40 g môi trường thương mại đã khử nước trên cân kỹ thuật số. Nó được hòa tan trong một lít nước cất chứa trong bình.

Để hỗn hợp nghỉ trong 5 phút và sau đó được đưa đến nguồn nhiệt để giúp hòa tan môi trường. Nó nên được khuấy thường xuyên và đun sôi trong 1 đến 2 phút. Sau đó, môi trường được khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Để nguội đến 50 ° C và phân phối vào các đĩa Petri vô trùng. Để đông đặc, đảo ngược, xếp thành từng mảng và bảo quản trong tủ lạnh.

PH cuối cùng của môi trường phải là 7,3 ± 0,2.

Cần lưu ý rằng màu của môi trường nuôi cấy khử nước là màu be nhạt và cần được bảo quản ở nhiệt độ từ 10 đến 35 ° C, ở nơi khô ráo.

Về phần mình, thạch đã chuẩn bị có màu hổ phách nhạt. Đĩa đã chuẩn bị nên được bảo quản trong tủ lạnh (2-8 ° C) cho đến khi sử dụng.

Tấm phải đạt nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.

Đĩa thạch đậu nành trypticasein bổ máu

Thạch máu được chuẩn bị bằng cách thêm 5% máu đã khử sắt tại thời điểm làm lạnh thạch đậu nành trypticasein đến 50 ° C. Hỗn hợp được đồng nhất bằng cách quay với các chuyển động nhẹ nhàng.

Cho vào đĩa Petri vô trùng. Màu giữa phải là màu đỏ anh đào.

Đĩa thạch đậu nành trypticasein bổ sung máu ấm

Để chuẩn bị thạch máu dựa trên TSA, tiến hành tương tự như các quy trình đã mô tả, nhưng khi rời khỏi nồi hấp, phải để yên cho đến khi nhiệt độ của môi trường xấp xỉ từ 56 đến 70 ° C. Khi đó máu được đặt và trộn cho đến khi môi trường chuyển sang màu nâu.

Cho vào đĩa Petri vô trùng. Màu của môi trường là nâu sô cô la.

Nêm đậu nành Trypticasein

Quy trình chuẩn bị thạch cũng giống như quy trình được mô tả đối với đĩa, với sự khác biệt là thay vì dùng môi trường trên đĩa Petri, nó được phân phối từ 10 đến 12 ml trong các ống có nắp Bakelite trước khi khử trùng.

Sau đó, các ống này được hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Khi họ rời đi, họ nghiêng về sự giúp đỡ của một sự hỗ trợ và được phép vững chắc hơn.

Các hạt nêm đã chuẩn bị được gieo theo diện tích bề mặt và giữ cho một số vi sinh vật không đòi hỏi khắt khe có thể tồn tại trong một thời gian nhất định.

Các ứng dụng

Trypticasein Soy Agar được dùng trong những trường hợp sau:

-Là cơ sở để chuẩn bị thạch máu cổ điển được sử dụng thường xuyên trong hầu hết các phòng thí nghiệm.

-Sự phân lập vi khuẩn đòi hỏi.

-Bảo quản mẫu tán huyết.

-Thực hiện các xét nghiệm chẩn đoán.

-Là cơ sở để chuẩn bị thạch máu đặc biệt cho vi khuẩn Corynebacterium diphteriae, với cystine tellurite và máu cừu.

-Là cơ sở để chuẩn bị thạch máu cừu, cộng với kanamycin-vancomycin cho sự phát triển của vi khuẩn kỵ khí, đặc biệt là Bacteroides sp.

- Để duy trì các chủng không đòi hỏi (Bacterioteca).

- Số lượng vi sinh vật hiếu khí trong nghiên cứu giới hạn vi sinh vật trong nước, môi trường, thực phẩm và mỹ phẩm.

Gieo

Mẫu có thể được gieo trực tiếp lên bề mặt của Trypticasein Soy Agar được bổ sung máu hoặc các chất phụ gia khác. Nó được gieo bởi sự kiệt quệ.

Trong khi đó, đĩa thạch đậu nành trypticasein không có chất phụ gia thường được sử dụng để cấy các chủng vi sinh vật (vi khuẩn hoặc nấm men).

QA

Kiểm soát vô trùng

Để kiểm tra độ vô trùng của các môi trường khác nhau được chuẩn bị bằng thạch gốc đậu nành trypticasein, khuyến cáo như sau: từ mỗi mẻ đã chuẩn bị, nên ủ 1 hoặc 2 đĩa hoặc ống chưa cấy ở 37 ° C trong 24 giờ để chứng minh tính vô trùng của chúng. Trong mọi trường hợp, nó phải duy trì mà không tăng trưởng.

Nếu phát hiện có ô nhiễm, toàn bộ lô phải được loại bỏ.

Kiểm soát tăng trưởng

Các chủng vi khuẩn sau đây có thể được sử dụng để nghiên cứu hoạt động thích hợp của thạch đậu nành trypticasein: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 và Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Các chủng này được gieo hạt và ủ trong môi trường hiếu khí ở 37 ° C trong 24 giờ.

Trong mọi trường hợp tăng trưởng phải đạt yêu cầu.

Các loại nấm như Candida albicans Complex ATCC 10231 và Aspergillus niger ATCC 16404. Cũng có thể được sử dụng. Sự phát triển tốt được mong đợi cho cả hai chủng.

Kiểm soát tăng trưởng và mô hình tán huyết của thạch đậu nành trypticasein bổ sung cho máu

Để xác minh hoạt động thích hợp của thạch máu được chuẩn bị với cơ sở này, có thể sử dụng các chủng sau: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 và Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Chúng được gieo hạt và ủ ở 37 ° C trong trạng thái vi nhân giống trong 24 giờ.

Trong mọi trường hợp, sự tăng trưởng phải đạt yêu cầu, lưu ý rằng cần quan sát thấy hiện tượng tán huyết beta (quầng sáng xung quanh khuẩn lạc) ở S. pyogenes và tán huyết alpha (quầng sáng xanh xung quanh khuẩn lạc) phải được quan sát ở cả hai chủng S. pneumoniae. thuộc địa).

Người giới thiệu

1. Những người đóng góp Wikipedia. Trypticase Tôi là agar. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 17 tháng 12 năm 2018, 15:47 UTC. Có tại: https://en.wikipedia.org
2. Phòng thí nghiệm Britannia. Thạch đậu nành Triptein. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
3. Phòng thí nghiệm Neogen. Thạch đậu nành thử nghiệm. Có tại: Foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
5. Phòng thí nghiệm BD. Trypticase Tôi là Agar. 2014. Có tại: .bd.com