THẠCH BISMUTH SULFIT: CƠ SỞ LÝ LUẬN, ĐIỀU CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các bismuth sunfit agar là một môi trường chọn lọc rắn và văn hóa khác biệt, công thức đặc biệt để phân lập vi khuẩn Salmonella enterica phân loài enterica serotype Typhi, giữa các loài khác của Salmonella. Môi trường được gọi là thạch BSA với từ viết tắt của nó trong tiếng Anh là Bismuth Sulfite Agar.

Công thức ban đầu cho thạch bismuth sulfit được tạo ra vào năm 1927 bởi Wilson và Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); nó chứa natri sulfit, glucose, dung dịch bitmut, amoni xitrat, sulfat sắt và agar-agar.

Sự phát triển của vi khuẩn Salmonella sp trong 48 giờ trên thạch bismuth sulfit. Nguồn: Pixnio.com Tác giả: Tiến sĩ WR Erving, USCDCP

Ngày nay, có một sự thay đổi của môi trường ban đầu, bao gồm chiết xuất thịt, pepton thịt và casein, chất chỉ thị bismuth sulfit, glucose, dinatri photphat, sắt sulfat, màu xanh lục sáng và agar-agar.

Có nhiều phương tiện để phân lập các loài Salmonella, nhưng khi nói đến việc khôi phục kiểu huyết thanh Typhi, thạch bismuth sulfit có một lợi thế đáng chú ý so với chúng, vì hầu hết thu được rất thấp hoặc không thu được vi sinh vật này. .

Tuy nhiên, cần sử dụng nhiều hơn một loại môi trường khi cố gắng phân lập các tác nhân gây bệnh đường ruột, vì thạch bismuth sulphite kém hiệu quả đối với các loài Salmonella khác và đối với chi Shigella, chúng bị ức chế hoặc phát triển rất kém. trong thạch này.

Cần lưu ý rằng trong số tất cả các loài Salmonella, typ huyết thanh Typhi là một trong những tác nhân gây bệnh đường ruột quan trọng nhất ở người, đây là ổ chứa duy nhất của nó. Loại huyết thanh này gây ra sốt thương hàn, viêm dạ dày ruột, nhiễm khuẩn huyết và nhiễm trùng huyết.

Vì lý do này, cần bao gồm thạch này khi phân tích mẫu nước, phân hoặc thực phẩm khi nghi ngờ có sự hiện diện của nó.

Nền tảng

Giống như hầu hết các môi trường nuôi cấy, Bismuth Sulfite Agar chứa các chất dinh dưỡng để thúc đẩy sự phát triển của vi khuẩn, chẳng hạn như pepton và chiết xuất thịt. Tương tự như vậy, glucose có chức năng như một nguồn năng lượng và carbon.

Tuy nhiên, không phải tất cả vi khuẩn sẽ phát triển trên môi trường này, vì Bismuth Sulfite Agar là một môi trường chọn lọc. Nó chứa các hợp chất ức chế sự phát triển của vi sinh vật Gram dương và một số vi khuẩn Gram âm. Các hợp chất này là: chất chỉ thị bismuth sulfit và có màu xanh lục sáng.

Về phần mình, dinatri photphat duy trì độ thẩm thấu và độ pH của môi trường.

Ngoài ra, thạch bismuth sulfit là một môi trường khác biệt nhờ sự hiện diện của sulfat đen, cho thấy sự hình thành H ₂ S. H ₂ S do vi khuẩn tạo thành phản ứng với sulfat đen và tạo thành kết tủa đen không hòa tan có thể nhìn thấy rõ.

Cuối cùng, thạch agar cung cấp độ đặc chắc cho môi trường.

Sự chuẩn bị

Cân 52,3 g môi trường khử nước và hòa tan trong một lít nước. Đun hỗn hợp sôi trong 1 phút và thường xuyên khuấy cho đến khi tan hoàn toàn. Đừng đun quá nóng. Môi trường này không thể tiệt trùng vì nhiệt độ quá cao làm hỏng môi trường nuôi cấy.

Để nguội đến 45 ° C và lắc trước khi cho vào đĩa Petri vô trùng. Nên làm các tấm có độ dày tốt. Để làm điều này, 25 ml phải được đổ vào mỗi đĩa. Để đông đặc. Vì nó là một môi trường không được khử trùng, nó là bình thường để sử dụng ngay lập tức.

Tuy nhiên, một nghiên cứu được thực hiện bởi D'aoust năm 1977, cho thấy rằng có sự phục hồi tốt hơn của Salmonella typhimurium và Salmonella enteritidis khi thạch bismuth sulphite tuổi trung bình, không ảnh hưởng đến hiệu suất của các huyết thanh Typhi và Paratyphi B.

D'aoust khuyến cáo sử dụng đĩa vào ngày 4 của tủ lạnh, mặc dù nó cảnh báo rằng khi tuổi trung bình, độ chọn lọc giảm và các chủng Proteus vulgaris phát triển dễ dàng hơn.

Vì lý do này, đối với các mẫu bị nhiễm bẩn cao, chẳng hạn như phân, tốt hơn là sử dụng môi trường mới chuẩn bị. Nếu không, hãy sử dụng vào ngày thứ 4 của quá trình chuẩn bị. Các tác giả khác khuyên bạn nên sử dụng đĩa này vào ngày sau khi chuẩn bị, bảo quản trong tủ lạnh.

Các tấm làm lạnh phải được ủ trước khi sử dụng. Độ pH của môi trường phải là 7,5 ± 0,2. Môi trường thô có màu be và môi trường chuẩn bị có màu trắng xám xanh lục.

Các ứng dụng

Trong số các mẫu có thể trồng trong môi trường này có các mẫu phân, nước uống hoặc nước thải và thức ăn.

Để cải thiện các chủng phân lập, nên tiến hành xử lý tiền tăng sinh với canh trường lactose và sau khi làm giàu với canh trường tetrathionat hoặc canh thang cystine selen, trước khi cấy giống trên thạch bismuth sulfit.

Các đĩa được ủ ở 35 ° C ± 0,2 trong 24 đến 48 giờ, trong môi trường hiếu khí.

Đặc điểm của các khuẩn lạc trên thạch bismuth sulfit

Các khuẩn lạc Salmonella Typhi thường được nhìn thấy trên thạch này trong vòng 24 giờ với tâm màu đen và được bao quanh bởi một quầng sáng màu xanh lục. Trong khi đó, trong 48 giờ chúng chuyển sang màu đen hoàn toàn do sự hình thành của hydrogen sulfide.

- Môi trường này ức chế hầu hết các loài thuộc giống Shigella.

- S. Typhi và S. a Arizonae có thể cho các khuẩn lạc rất giống nhau.

-Các coliform sinh H ₂ S như Proteus và Citrobacter tạo ra các khuẩn lạc tương tự như Salmonella, do đó cần phải thực hiện các xét nghiệm định danh sinh hóa.

-Phải thực hiện tốt để thu được các khuẩn lạc biệt lập; Đó là cách duy nhất để quan sát các đặc điểm điển hình của các khuẩn lạc thuộc giống Salmonella.

QA

Để kiểm soát độ vô trùng, đĩa chưa cấy được ủ ở 37 ° C, dự kiến ​​sẽ không có sự phát triển hoặc thay đổi màu sắc.

Để kiểm soát chất lượng, các chủng đã biết như:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Escherichia coli và Shigella flexneri dự kiến ​​sẽ bị ức chế một phần bằng cách phát triển các khuẩn lạc nâu xanh và nâu tương ứng. Trong khi đó, cả hai loài vi khuẩn salmonellas đều phải phát triển xuất sắc với các khuẩn lạc màu đen có ánh kim loại, và cuối cùng Enterococcus faecalis phải bị ức chế hoàn toàn.

Người giới thiệu

1. Wilson, W. và EM McV. Blair. Sử dụng Môi trường Sắt Glucose Bismuth Sulphite để Phân lập B. typhosus và B. proteus. Tạp chí Vệ sinh, 1927; 26 (4), 374-391. Lấy từ .jstor.org
2. D'aoust JY. Ảnh hưởng của điều kiện bảo quản đến hiệu suất của thạch bismuth sulfit. J Clin Vi sinh vật. Năm 1977; 5 (2): 122–124. Có sẵn trong: ncbi.nlm.nih.gov
3. Phòng thí nghiệm IVD. Thạch bismuth-sulfit theo WILSON-BLAIR. 2009. Có sẵn tại: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
4. Phòng thí nghiệm Himedia. Bismuth Sulphite Agar. 2017. Có sẵn tại: himedialabs.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
6. Morales R, de la Cruz D, Leyva G và Ybarra M. Chất lượng vi khuẩn của sữa dê tươi được sản xuất ở Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54