THAYER MARTIN AGAR: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các agar Thayer Martin nó là một môi trường chọn lọc dinh dưỡng cao và vững chắc cho sự cô lập của Neisseria meningitidis và Neisseria gonorrhoeae; cả được gọi là Neisserias gây bệnh hoặc quan trọng về mặt lâm sàng.

Một trong những điểm đặc biệt quan trọng nhất của Thayer Martin Agar là hàm lượng chất bổ sung dinh dưỡng cao. Đặc tính này là cần thiết, bởi vì Neisserias là những vi sinh vật rất khắt khe theo quan điểm dinh dưỡng và do đó không phát triển trong môi trường thông thường.

Phương tiện kinh doanh Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Nguồn ảnh 1: Được chụp bởi tác giả ThS. Marielsa Gil, hình ảnh 2. Pixinio.com vi khuẩn hóa, biến đổi, Thayer, Martin, agar.

Mặt khác, vì những vi sinh vật này thường được tìm thấy ở những khu vực không vô trùng, nên việc bổ sung chất ức chế là cần thiết để ngăn chặn sự phát triển của hệ thực vật đi kèm, mà không ảnh hưởng đến sự phát triển của chi Neisseria.

Thạch này bao gồm thạch gốc GC, hemoglobin, chất bổ sung dinh dưỡng và phức hợp các chất ức chế (kháng sinh và kháng nấm). Các nhà thương mại bán từng phần bổ sung riêng biệt.

Mẫu được gieo trong môi trường này sẽ phụ thuộc vào vi sinh vật được tìm kiếm. Đối với Neisseria gonorrhoeae, bệnh phẩm lý tưởng là dịch tiết âm đạo và niệu đạo. Trong khi đối với Neisseria meningitidis, các mẫu được sử dụng nhiều nhất là dịch não tủy, dịch tiết hầu họng và mũi họng.

Nền tảng

Neisserias là vi sinh vật được phân loại là gây phiền nhiễu và do đó việc phân lập chúng rất khó khăn. Do đó, Thayer Martín là một phương tiện phức tạp và mỗi thành phần của nó đáp ứng một chức năng được giải thích dưới đây:

GC base agar

Thạch GC chứa peptone proteose, bột bắp, natri clorua, dipotassium phosphate, monopotassium phosphate và agar-agar. Các thành phần của nó cung cấp các chất dinh dưỡng cơ bản cho sự phát triển của vi sinh vật, trung hòa các axit béo độc hại, giúp duy trì sự cân bằng thẩm thấu, xác định độ pH và tạo độ đồng nhất cho môi trường.

Huyết sắc tố

Hemoglobin cung cấp các yếu tố V và X (nicotinamide adenine dinucleotide NAD và hemin tương ứng). Vì lý do này, các loài Haemophilus cũng phát triển trong môi trường này. Hemoglobin có thể được thu nhận thương mại ở dạng khử nước hoặc có thể thêm máu bò tươi đã tách lọc vào môi trường.

Bổ sung cường hóa

Mặt khác, chất bổ sung làm giàu cũng phải được thêm vào môi trường Thayer-Martin, vì các chất dinh dưỡng có trong thạch gốc không đủ cho các yêu cầu của chi Neisseria.

Chất bổ sung làm giàu được sử dụng phổ biến nhất được gọi là isovitalex. Nó chứa glutamine, adenin, NAD, cocarboxylase, guanin, nitrat sắt, axit p-amino benzoic, vitamin B12, thiamine và glucose. Tất cả các hợp chất này cần thiết cho sự phát triển thích hợp của Neisserias gây bệnh.

Chất ức chế

Vì nó là một môi trường có giá trị dinh dưỡng cao, nên phải sử dụng các chất ức chế để ngăn chặn sự phát triển của vi sinh vật từ hệ thực vật thông thường của khu vực và do đó có lợi cho việc phân lập chi Neisseria.

Phức hợp chất ức chế bao gồm vancomycin, colistin và nystatin. Vancomycin ức chế sự phát triển của vi khuẩn Gram dương, colistin ngăn chặn sự phát triển của vi khuẩn Gram âm như Pseudomonas và một số Neisserias hoại sinh, và nystatin tác động lên nấm men như Candida albicans.

Tuy nhiên, Thayer Martin Agar sau đó đã được sửa đổi; những thay đổi bao gồm việc bổ sung trimethoprim, tăng lượng thạch và bổ sung thêm glucose. Những thay đổi này đã cải thiện đáng kể sự phục hồi của các loài Neisseria gonorrhoeae.

Cần lưu ý rằng trimethoprim ức chế sự phát triển của chi Proteus và hậu quả là sự hình thành bầy đàn của nó. Theo nghĩa này, chính các chất kháng sinh cung cấp đặc tính chọn lọc cho môi trường Thayer Martin.

Sự chuẩn bị

Thạch thayer Martin chính hãng

-GC agar

Cân 8,2 g môi trường GC đã khử nước và pha hỗn dịch trong 100 ml. Trộn và đun sôi trong 1 phút với khuấy thường xuyên để hòa tan hoàn toàn. Khử trùng hỗn hợp trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

- 2% huyết sắc tố

Hòa 2 g hemoglobin đã khử nước trong 2 hoặc 3 ml nước cất nóng cho đến khi tạo thành hỗn hợp đồng nhất. Thêm từng ít nước để hoàn thành thể tích 100 ml. Hỗn dịch phải đồng nhất trước khi khử trùng.

Khử trùng trong nồi hấp trong 15 phút.

-Phổ sung tăng cường

Pha lại lọ thương mại bằng chất pha loãng do cùng một công ty thương mại cung cấp. Trộn đều. Lượng chất pha loãng cần sử dụng sẽ được ghi rõ trong hướng dẫn của bộ sản phẩm.

-VCN ức chế bổ sung (vancomycin, colistin, nystatin)

Pha lại lọ bằng chất pha loãng do công ty thương mại cung cấp. Trộn đều. Lượng chất pha loãng cần sử dụng sẽ được ghi rõ trong hướng dẫn của bộ sản phẩm.

-Chuẩn bị

Cứ 100 ml thạch GC tiến hành như sau:

Khi thạch GC ra khỏi nồi hấp, để nguội đến nhiệt độ khoảng 50 ° C và thêm 2 ml dung dịch hemoglobin đã chuẩn bị, 2 ml chất bổ sung làm giàu (isobitalex hoặc britalex) và 2 ml chất bổ sung ức chế. Trộn và dùng trong đĩa Petri vô trùng.

Để đông đặc và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi dùng.

Màu của môi trường đã chuẩn bị là màu đỏ anh đào. PH cuối cùng của môi trường là 7,2 ± 0,2

Thạch Thayer Martin đã sửa đổi

Cân 8,2 g môi trường GC đã khử nước và pha hỗn dịch trong 100 ml. Thêm 1 g agar-agar và thêm 0,3 g glucose. Trộn và đun sôi trong 1 phút với khuấy thường xuyên để hòa tan hoàn toàn. Khử trùng hỗn hợp trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

Chuẩn bị hemoglobin và chất bổ sung làm giàu như đã mô tả trước đây.

Các chất bổ sung ức chế được sử dụng là VCNT (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

-Chuẩn bị

Tiến hành như mô tả đối với thạch Thayer Martin ban đầu.

Sử dụng

Thayer Martin Agar nên được để ấm trước khi mẫu thử bị sọc. Các mẫu thường được sử dụng là gạc hầu họng, gạc mũi, dịch tiết âm đạo, niệu đạo và / hoặc trực tràng và dịch não tủy.

Sử dụng các mẫu tươi và cấy mạnh vào thạch. Các mẫu được tạo hạt trực tiếp bằng cách xả vật liệu và sau đó được phun kiệt chất thành vệt trên bề mặt.

Các đĩa này được ủ ở 35-37 ° C trong 24 đến 48 giờ trong bình vi sinh (5% CO ₂ ). Vào cuối thời gian ủ, các đĩa được kiểm tra các khuẩn lạc nhỏ, màu xám và đôi khi trông như chất nhầy.

Thực hiện Gram và các xét nghiệm sinh hóa khẳng định trên các khuẩn lạc nghi ngờ.

QA

Các chủng vi sinh vật sau đây có thể được sử dụng để kiểm tra chất lượng của Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 và Neisseria meningitidis ATCC 13090; sự phát triển thỏa đáng được mong đợi ở cả hai chủng.

Các chủng sau đây cũng nên được bao gồm: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 và Candida albicans ATCC 10231. Trong tất cả chúng, sự ức chế toàn bộ hoặc một phần được mong đợi trong môi trường này.

Hạn chế

-Chúng ta phải ghi nhớ rằng vi khuẩn kháng lại các chất ức chế được sử dụng có thể phát triển trong môi trường.

-Có những chủng Neisseria gonorrhoeae có thể nhạy cảm với nồng độ vancomycin được sử dụng. Vì lý do này, nên sử dụng thạch sô cô la bổ sung isovitalex, nhưng không có chất ức chế.

-Có những chủng nấm men kháng nystatin có thể phát triển trong môi trường này và cản trở việc phân lập Neisserias gây bệnh, đặc biệt là gonococci.

Người giới thiệu

1. Phòng thí nghiệm chẩn đoán Valtek. Thayer-Martin Agar. 2016. Có tại: com
2. Phòng thí nghiệm Britannia. Thayer Martin vừa được sửa đổi. 2010. Có tại: britanialab.com
3. Những người đóng góp Wikipedia. Thạch Thayer-Martin. Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 26 tháng 10 năm 2017, 16:33 UTC. Có tại: wikipedia.org 4. Truy cập ngày 28 tháng 2 năm 2019.
4. Phòng thí nghiệm Britannia. Thạch GC. 2010. Có tại: britanialab.com.
5. Phòng thí nghiệm BBL ™ Làm giàu trung bình cho các vi sinh vật khó tính. 1999. Có tại: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.