THẠCH XANH SÁNG: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CÁCH BÀO CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các thạch màu xanh lá cây rực rỡ là một môi trường nuôi cấy rắn với mức độ cao của tính chọn lọc. Nó được sử dụng riêng để phân lập các chủng thuộc giống Salmonella, tuy nhiên vẫn có một số ngoại lệ, chẳng hạn như các loài typhi và paratyphi không phát triển trên môi trường này.

Việc tìm kiếm giống Salmonella thường xuyên trong phân, nước hoặc mẫu thức ăn. Theo nghĩa này, phương tiện này có thể rất hữu ích. Loại thạch này được tạo ra vào năm 1925 bởi Kristensen, Lester và Jurgens, sau đó nó được Kauffmann cải tiến.

Thạch xanh tươi. Khuẩn lạc lên men và không lên men tương ứng. Nguồn: MJ Richardson / triển lãm Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Giấy phép Creative Commons.

Nó bao gồm các pluripepton từ dịch tiêu hóa ở mô động vật và dịch tiêu hóa casein ở tuyến tụy, nó cũng chứa chiết xuất nấm men, natri clorua, lactose, sucrose, phenol đỏ, xanh lá cây tươi và agar-agar.

Nó được đặc trưng bởi là một môi trường khá khắc nghiệt đối với hầu hết các vi khuẩn, tạo điều kiện thuận lợi cho sự phát triển của Salmonella, tuy nhiên một số coliform có khả năng tồn tại trong đó và phát triển yếu.

Điều quan trọng cần lưu ý là chi Shigella không phát triển trên môi trường này, cũng như Salmonella typhimurium hoặc Salmonella paratyphi. Do đó, nếu bạn muốn phân lập các vi sinh vật này, nên sử dụng các môi trường khác, chẳng hạn như thạch XLD, trong số các môi trường khác.

Nền tảng

Thạch xanh tươi

Mỗi thành phần tạo nên môi trường đáp ứng một chức năng cụ thể xác định các đặc tính và tính chất của thạch.

Pluripeptone và chiết xuất nấm men là nguồn dinh dưỡng mà từ đó vi sinh vật lấy nitơ và khoáng chất cần thiết cho sự phát triển của chúng. Lactose và sucrose là nguồn cung cấp năng lượng cho vi sinh vật có khả năng lên men chúng.

Màu xanh sáng là chất ức chế, ngăn cản sự phát triển của vi khuẩn Gram dương và một số lượng lớn vi sinh vật Gram âm.

Natri clorua cung cấp độ ổn định thẩm thấu cho môi trường. Trong khi màu đỏ phenol là chỉ thị pH, nó sẽ chuyển sang màu khi phát hiện sản xuất axit từ quá trình lên men carbohydrate.

Các khuẩn lạc không lên men của lactose và sucrose phát triển trên môi trường này có màu hơi hồng hoặc trắng trong suốt, trên nền đỏ. Ví dụ, vi khuẩn thuộc giống Salmonella.

Trong khi vi khuẩn lên men lactose hoặc sucrose có khả năng phát triển trên môi trường này phát triển các khuẩn lạc màu vàng xanh hoặc vàng xanh trên nền vàng xanh. Ví dụ, Escherichia coli và Klebsiella pneumoniae.

Các biến thể thạch xanh sáng (BGA)

Có các biến thể khác của thạch xanh sáng; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar và Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Thạch Glucose xanh sáng

Chứa thạch đậu nành Trypticase, Ferric Ammonium Citrate, Sodium Thiosulfate Pentahydrate, Phenol Red, Glucose, Màu xanh lá cây tươi sáng, Novobiocin và Nước cất.

Nó được sử dụng để phân lập các khuẩn lạc Salmonella từ các mẫu phân.

Trong trường hợp này, màu xanh lục sáng và novobiocin là chất ức chế ngăn cản sự phát triển của vi khuẩn Gram dương và một số vi sinh vật Gram âm.

Natri thiosunfat là nguồn cung cấp sunfua và xitrat sắt là nguồn cung cấp sắt, cả hai đều cần thiết để tạo ra hiđro sunfua thông qua việc hình thành kết tủa sunfua sắt đen.

Glucose là carbohydrate có thể lên men và màu đỏ phenol là chất chỉ thị pH.

Trên môi trường này, các khuẩn lạc Salmonella phát triển lớn với tâm màu đen được bao quanh bởi một quầng đỏ và tiếp theo là vùng có thể nhìn thấy rõ ràng. Một số chủng Citrobacter freundii tạo ra các khuẩn lạc giống hệt Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Môi trường này chứa thạch đậu nành trypticase, sắt amoni xitrat, natri thiosunfat, lactose, glycerol, màu xanh lá cây sáng, novobiocin và nước cất.

Sự khác biệt giữa môi trường này và môi trường trước là glucose được thay thế bằng lactose và glycerol và màu đỏ phenol không được sử dụng.

Môi trường cũng được sử dụng để phân lập các loài Salmonella, các khuẩn lạc phát triển có màu đen, do sản xuất hydro sulfua.

Chỉ những khuẩn lạc không tạo ra axit từ glyxerol hoặc lactoza mới đạt được sản xuất đủ H ₂ S, vì pH thấp cản trở sự hình thành H ₂ S. Điều này dẫn đến khuẩn lạc không màu đối với hầu hết các loài Proteus và Citrobacter.

Sự chuẩn bị

-Cân 58 gam môi trường khử nước thương phẩm thu được. Thêm nó vào một lít nước cất lại. Trộn, để yên trong vài phút và đặt hỗn hợp trên nguồn nhiệt cho đến khi hòa tan hoàn toàn.

- Hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút, không vượt quá thời gian tiệt trùng.

- Để nó nghỉ ngơi và phục vụ khi còn nóng trong các đĩa Petri vô trùng. Độ pH cuối cùng phải là 6,9 ± 0,2.

-Để đông đặc và bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi dùng. Trước khi gieo hạt các đĩa nên để nhiệt độ phòng.

- Môi trường bột có màu xanh lục và được pha chế có màu nâu cam hoặc xanh đỏ, tùy thuộc vào độ pH và công ty thương mại. Màu rất nâu là dấu hiệu cho thấy thạch đã quá nóng.

- Khi thạch đã đông đặc, không nên nấu lại vì môi trường sẽ bị biến chất.

Sử dụng / ứng dụng

Môi trường này được sử dụng để tìm kiếm các chủng thuộc giống Salmonella từ các mẫu phân và thực phẩm từ sữa, trong số những loại khác.

Bởi vì đây là một môi trường khá khắc nghiệt, nên gieo một lượng chất cấy dồi dào nếu sử dụng mẫu trực tiếp. Nếu không, cần làm giàu sơ bộ và làm giàu mẫu vật trước khi gieo vào môi trường này.

Vì một số chủng Salmonella bị ức chế hoặc khó phát triển, nên cho môi trường này cùng với thạch chọn lọc khác để tìm Salmonella.

Mọi khuẩn lạc có đặc điểm Salmonella điển hình phải được gửi đến các xét nghiệm sinh hóa để xác định chính xác.

QA

Để kiểm tra tính năng tốt của môi trường thạch xanh sáng, có thể sử dụng các chủng ATCC để quan sát sự phát triển của chúng trên môi trường đó.

Các chủng thường xuyên nhất được sử dụng để kiểm tra chất lượng là: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus 6538.

3 đầu tiên sẽ cho các khuẩn lạc màu trắng hồng hoặc trong suốt trên nền đỏ. Salmonella phát triển tốt và Proteus phát triển ít hoặc thường xuyên.

Đối với Klebsiella và Escherichia, các khuẩn lạc màu vàng xanh với nền vàng được mong đợi và trong trường hợp Shigella và Staphylococcus, chúng nên bị ức chế.

Môi trường khử nước phải được bảo quản ở nhiệt độ phòng, nơi khô ráo, vì môi trường rất dễ hút ẩm.

Người giới thiệu

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Thạch xanh rực rỡ. 2009
2. Phòng thí nghiệm Britannia. Agar xanh sáng. 2015.
3. Phòng thí nghiệm BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. (Xuất bản lần thứ 5). Argentina, Biên tập Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA