VOGEL-JOHNSON AGAR: CƠ SỞ LÝ LUẬN, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các agar Vogel-Johnson là một lựa chọn vừa và khác biệt rắn văn hóa, công thức đặc biệt cho sự cô lập của Staphylococcus aureus. Môi trường này được tạo ra bởi Vogel và Johnson vào năm 1960 từ việc sửa đổi công thức thạch tellurite glycine vào năm 1955 bởi Zebovitz, Evans và Niven.

Sự thay đổi bao gồm việc tăng nồng độ mannitol có trong môi trường và kết hợp chất chỉ thị pH. Công thức hiện tại bao gồm triptein, chiết xuất nấm men, mannitol, dipotassium phosphate, lithium chloride, glycine, phenol red, agar, dung dịch 1% potassium tellurite và nước.

Nguồn: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Cần lưu ý rằng có những môi trường khác, như thạch Vogel-Johnson, được chọn lọc để phân lập S. aureus, chẳng hạn như thạch mannitol mặn và thạch Baird Parker. Theo nghĩa này, có thể nói rằng nền tảng của thạch Vogel-Johnson là một hỗn hợp giữa thạch mannitol mặn và thạch Baird Parker.

Đầu tiên, các khuẩn lạc S. aureus được phân biệt bằng cách lên men mannitol và chuyển chỉ thị pH sang màu vàng. Mặt khác, trong lần thứ hai, S. aureus có đặc điểm là khử Tellurite thành Tellurium và hình thành các khuẩn lạc màu xám đến đen. Cả hai đặc tính đều được quan sát thấy trong thạch Vogel-Johnson.

Phương tiện này, giống như các phương tiện tương tự, rất hữu ích để phát hiện Staphylococcus aureus trong các mẫu thực phẩm, kiểm soát vệ sinh các sản phẩm công nghiệp và trong các mẫu lâm sàng.

Nền tảng

Cung cấp chất dinh dưỡng

Môi trường Vogel-Johnson chứa triptein và chiết xuất nấm men; Cả hai chất đều cung cấp các axit amin chuỗi dài đóng vai trò như nguồn cacbon và nitơ cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn. Vi khuẩn có khả năng phát triển trong môi trường này sẽ lấy các chất dinh dưỡng từ các chất này.

Quyền lực chọn lọc

Thạch Vogel-Johnson có khả năng ức chế sự phát triển của vi khuẩn Gram âm và cả một số vi khuẩn Gram dương, tạo điều kiện cho tụ cầu coagulase dương phát triển. Các chất ức chế là kali Tellurite, clorua liti và glycine.

Sức mạnh khác biệt

Các chất tạo ra môi trường phân biệt này là mannitol và tellurite kali. Mannitol là một carbohydrate, và khi nó được lên men axit được tạo ra làm cho môi trường chuyển từ màu đỏ sang màu vàng, điều này xảy ra nhờ sự có mặt của chỉ thị pH phenol màu đỏ.

Trong khi đó, Tellurite không màu khi nó bị khử thành Tellurium kim loại tự do, sẽ có màu xám đen đến đen.

Staphylococcus aureus lên men mannitol và khử Tellurite thành Tellurium. Vì lý do này, các khuẩn lạc điển hình của S. aureus trong môi trường này có màu xám hoặc đen được bao quanh bởi môi trường màu vàng.

Vi khuẩn phát triển trong môi trường này và không khử Tellurite hoặc lên men mannitol sẽ tạo thành các khuẩn lạc trong suốt được bao quanh bởi môi trường có màu đỏ, thậm chí còn đậm hơn màu ban đầu, do sự kiềm hóa của môi trường bằng cách sử dụng pepton.

Mặt khác, vi khuẩn khử Tellurite nhưng không lên men mannitol sẽ phát triển thành các khuẩn lạc màu xám hoặc đen được bao quanh bởi môi trường màu đỏ đậm.

Nếu môi trường được chuẩn bị mà không bổ sung thêm kali tellurit, các khuẩn lạc S. aureus sẽ phát triển thành các khuẩn lạc màu vàng, được bao quanh bởi môi trường màu vàng, như trong thạch mannitol mặn.

Cân bằng thẩm thấu và chất đông đặc

Dipotassium phosphate duy trì sự cân bằng thẩm thấu của môi trường và điều chỉnh pH về mức trung tính 7.2. Trong khi thạch tạo độ đặc cho môi trường nuôi cấy.

Sự chuẩn bị

Dung dịch kali Tellurite 1% w / v

Dung dịch này không có trong môi trường khử nước, vì nó không thể được khử trùng trong nồi hấp. Vì lý do này, nó được chuẩn bị riêng và được thêm vào môi trường đã được khử trùng.

Một số nhà thương mại bán dung dịch tellurite 1% kali đã pha sẵn. Nếu bạn muốn chuẩn bị trong phòng thí nghiệm, tiến hành như sau:

Cân 1,0 g kali tellurit và định mức 100 ml nước cất. Hòa tan kali tellurit trong một phần nước và sau đó hoàn thành lượng nước cho đến khi đạt 100 ml. Khử trùng dung dịch bằng phương pháp lọc.

Môi trường cơ sở thạch Vogel-Johnson

Cân 60 gr môi trường đã khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Hỗn hợp được đun đến sôi để giúp hòa tan hoàn toàn. Trong quá trình hòa tan, môi trường được khuấy thường xuyên.

Khử trùng trong nồi hấp ở áp suất 15 pound và 121 ° C trong 15 phút. Lấy ra khỏi nồi hấp và để yên cho đến khi môi trường đạt nhiệt độ khoảng 45 đến 50 ° C. Thêm 20 ml dung dịch kali Tellurit 1% đã chuẩn bị trước đó.

Trộn và đổ vào đĩa Petri vô trùng. Để cho đông đặc và đảo thứ tự trên khay đựng đĩa để sau đó cất vào tủ lạnh cho đến khi sử dụng.

PH cuối cùng của môi trường đã chuẩn bị phải là 7,2 ± 0,2.

Trước khi gieo mẫu, chờ đĩa đạt nhiệt độ phòng.

Màu của môi trường đã chuẩn bị là màu đỏ.

Sử dụng

Mặc dù nó có thể được sử dụng để phân lập S. aureus trong bất kỳ loại mẫu nào, nhưng nó chủ yếu được sử dụng để phân tích vi sinh trong các sản phẩm dược phẩm, mỹ phẩm và thực phẩm.

Khuyến cáo rằng chất cấy phải dày đặc. Việc gieo hạt có thể được thực hiện bằng cách chấm bằng tay cầm bằng bạch kim hoặc bằng bề mặt bằng thìa Drigalski.

Đĩa được ủ ở 35-37 ° C trong 24 đến 48 giờ aerobiosis.

QA

Các chủng đối chứng sau có thể được sử dụng để thực hiện kiểm soát chất lượng trên môi trường Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 hoặc Proteus mirabilis ATCC 43071.

Kết quả mong đợi như sau: đối với các chủng S. aureus sinh trưởng đạt yêu cầu với các khuẩn lạc màu đen được bao quanh bởi môi trường màu vàng. Đối với S. biểu bì sinh trưởng thường xuyên với các khuẩn lạc trong mờ hoặc đen được bao quanh bởi môi trường đỏ.

Tương tự như vậy, dự kiến ​​sẽ ức chế toàn bộ đối với E. coli và ức chế một phần hoặc toàn bộ đối với Proteus mirabilis; nếu nó phát triển nó sẽ làm như vậy rất ít và các khuẩn lạc sẽ có màu đen bao quanh bởi một màu đỏ.

Người giới thiệu

1. Phòng thí nghiệm BD. VJ (Vogel và Johnson Agar). 2006. Có tại: bd.com
2. Phòng thí nghiệm Britannia. Vogel- Johnson Agar. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
3. Phòng thí nghiệm Britannia. Kali Tellurite. 2015. Có sẵn tại: britania.com
4. Phòng thí nghiệm Himedia. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Có sẵn tại: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar Base. Sổ tay Vi sinh Merck. Tái bản lần thứ 12, trang 502-503. Có sẵn tại: Người dùng / Nhóm / Tải xuống
6. Những người đóng góp cho Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia một bách khoa toàn thư miễn phí, có tại: wikipedia.org.
7. Tiêu chuẩn Venezuela Covenin 1292-89. (1989). Thực phẩm. Phân lập và định lượng Staphylococcus aureus. Có tại: sencamer.gob.ve