XLD AGAR: CƠ SỞ LÝ LUẬN, ĐIỀU CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các thạch XLD hoặc Xylose Lysine desoxycholate thạch vừa là một chọn lọc và văn hóa rắn khác biệt cho cô lập của enteropathogens. Taylor đã thiết kế công thức thạch XL (Xylose, Lysine) để cải thiện sự phân lập của chi Shigella.

Ông quan sát thấy rằng chi này bị ức chế trong hầu hết các môi trường nhằm mục đích phân lập các tác nhân gây bệnh đường ruột. Sau đó, natri deoxycholat, natri thiosulfat và sắt amoni xitrat được thêm vào để tăng tính chọn lọc của nó. Công thức này đã được chứng minh là hữu ích cho cả việc phân lập Shigella và Salmonella.

Sự khác biệt của các khuẩn lạc Shigella, Salmonella và coliforms trên thạch XLD. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Nguồn: A. Bởi: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, Tiến sĩ; Audra Marsh, Courtesy: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Bởi: CDC / Dr. Nông dân JJ, Lịch sự: Thư viện Hình ảnh Y tế Công cộng

Thạch XLD bao gồm chiết xuất nấm men, natri deoxycholate, xylose, lysine, lactose, sucrose, natri thiosulfate, ferric ammonium citrate, natri clorua, phenol đỏ và thạch. Bộ đôi XLD Agar và SS Agar được sử dụng trong hầu hết các phòng thí nghiệm vi khuẩn học để nghiên cứu các mẫu phân tìm vi khuẩn Shigella và Salmonella.

Các phòng thí nghiệm khác thích sự kết hợp của CHROMagar Salmonella và thạch XLD, trong số các lựa chọn có sẵn khác. Các bộ đôi này có thể được chế biến trong các đĩa Petri đôi. Ở một bên, họ đặt thạch XLD và ở phía đối diện với môi trường đã chọn khác.

Nền tảng

-Năng lượng dinh dưỡng

Thạch XLD có chiết xuất từ ​​nấm men, là nguồn cung cấp chất dinh dưỡng cho các vi sinh vật phát triển trên thạch này. Ngoài ra, sự hiện diện của carbohydrate (xylose, sucrose và lactose) cung cấp năng lượng cho vi khuẩn có thể lên men chúng.

- Tính chọn lọc của môi trường

Là một chất ức chế, nó có natri deoxycholate; Điều này ngăn cản sự phát triển của vi khuẩn Gram dương, tạo cho môi trường một đặc tính chọn lọc.

-Công suất chênh lệch

Khuẩn lạc Shigella điển hình

Như đã đề cập, thạch XLD chứa xylose; Carbohydrate này được lên men bởi tất cả các vi khuẩn phát triển trong môi trường này, ngoại trừ chi Shigella.

Đây là một trong những đặc điểm tạo nên đặc điểm khác biệt của nó, vì các khuẩn lạc Shigella được phân biệt với các khuẩn lạc còn lại bằng cách phát triển các khuẩn lạc màu đỏ, trong khi các vi khuẩn khác tạo ra các khuẩn lạc màu vàng.

Các khuẩn lạc điển hình của Salmonella

Chi Salmonella cũng lên men xylose, ban đầu tạo ra các khuẩn lạc màu vàng. Tuy nhiên, sau khi làm cạn kiệt xylose carbohydrate, nó tấn công lysine để lấy enzyme lysine decarboxylase của nó. Quá trình khử cacboxyl của lysine tạo ra các chất kiềm làm chuyển màu của khuẩn lạc và môi trường xung quanh thành màu đỏ ban đầu.

Hành vi này chỉ được thực hiện bởi Salmonella, vì coliforms decarboxylate lysine không thể kiềm hóa môi trường. Điều này là do coliform cũng lên men đường lactose và sucrose; do đó, việc sản xuất axit rất cao, để lại khuẩn lạc màu vàng ở các vi khuẩn này.

Cần lưu ý rằng chi Salmonella không lên men đường sucrose hoặc lactose.

Sản xuất H

Thạch XLD cũng cho phép phát hiện các loài Salmonella sinh H ₂ S; Đối với điều này, nó dựa vào nguồn lưu huỳnh được đại diện bởi natri thiosulfat và một nhà phát triển phản ứng, đó là sắt amoni xitrat.

Chất sau phản ứng với H ₂ S (khí không màu) và tạo thành kết tủa sắt sunfat không tan màu đen. Theo nghĩa này, các đặc điểm của khuẩn lạc salmonella sẽ có màu đỏ với tâm màu đen.

Cần lưu ý rằng để phản ứng tạo H ₂ S xảy ra , cần có pH kiềm. Đó là lý do tại sao các Enterobacteriaceae khác tạo thành H ₂ S không thể làm được hoặc hoạt động kém trong môi trường này, vì nồng độ axit cao được tạo ra khi lên men cacbohydrat có mặt ức chế hoặc cản trở phản ứng.

-Sodium clorua, thạch và phenol đỏ

Cuối cùng, natri clorua duy trì cân bằng thẩm thấu; agar là chất làm đông đặc và màu đỏ phenol phát hiện sự thay đổi pH, làm chuyển màu của khuẩn lạc và môi trường.

Sự chuẩn bị

Cân 55 g môi trường XLD đã khử nước và hòa tan trong 1 lít nước. Vừa đun vừa khuấy hỗn hợp cho đến khi sôi. Không đun quá nóng, vì nhiệt làm hỏng môi trường và tạo kết tủa làm thay đổi hình thái của các khuẩn lạc điển hình.

Môi trường này không được hấp tiệt trùng. Khi hòa tan phải cho qua nồi cách thủy ở 50oC. Khi làm nguội, nó nên được phục vụ trực tiếp trên các đĩa Petri vô trùng. Chúng có thể được đổ vào đĩa đơn hoặc đĩa kép. Chúng được để cho đông đặc và được bảo quản trong tủ lạnh cho đến khi sử dụng.

Ủ trước khi sử dụng. Vì đây là môi trường không vô trùng, nên chuẩn bị gần ngày sử dụng.

PH cuối cùng của môi trường phải là 7,4 ± 0,2. Màu của môi trường đã chuẩn bị là đỏ cam, trong mờ, không có kết tủa.

Nếu bạn có thạch gốc Xylose Lysine (XL), bạn có thể thêm natri deoxycholat, natri thiosulfat và sắt amoni xitrat. Bằng cách này, thu được công thức thạch XLD.

Các ứng dụng

Thạch XLD được sử dụng để thu hồi enteropathogens, chủ yếu thuộc giống Shigella và thứ hai thuộc chi Salmonella. Nó rất hữu ích để đánh giá mẫu phân, nước và thức ăn.

Các loại mẫu

Phân

Mẫu phân có thể được gieo trực tiếp trên thạch XLD, giúp phân bố tốt nguyên liệu để thu được các khuẩn lạc cô lập.

Để cải thiện khả năng thu hồi Salmonella, thạch XLD có thể được rải trên môi trường làm giàu Salmonella.

Món ăn

Trong trường hợp thực phẩm, có thể sử dụng nước dùng làm giàu Salmonella và Shigella. Đối với Salmonella, bạn có thể sử dụng nước dùng selenite cystine, nước dùng tetrathionate màu xanh lá cây sáng, trong số những loại khác.

Trong trường hợp Shigella, nó có thể được làm giàu bằng canh trường Shigella với 0,5 µ / ml novobiocin, ủ ở 42 ° ± 1 ° C trong 16-20 giờ.

Nước

Trong phân tích nước, kỹ thuật lọc màng và sử dụng thạch XLD được khuyến khích, trong số những kỹ thuật khác.

Điều kiện trồng và xác định

Môi trường đã gieo hạt được ủ trong môi trường hiếu khí ở 35 ° C trong 24 đến 48 giờ.

Các khuẩn lạc điển hình của mỗi chi được quan sát, các khuẩn lạc nghi ngờ phải trải qua các xét nghiệm sinh hóa để xác định chúng.

QA

Để đánh giá việc kiểm tra chất lượng của môi trường, có thể sử dụng các chủng vi khuẩn sau: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25971is, Proteus ATCC 25971is , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Chi Salmonella có đặc điểm là xuất hiện các khuẩn lạc màu đỏ với tâm màu đen hoặc các khuẩn lạc đen hoàn toàn trên môi trường này. Trong khi đó, ở chi Shigella, các khuẩn lạc phải có màu đỏ, tức là màu của môi trường.

Trong trường hợp Escherichia coli, nó được cho là sẽ bị ức chế hoàn toàn hoặc một phần; nếu nó phát triển các khuẩn lạc có màu vàng. Đối với Proteus mirabilis, sinh trưởng kém được mong đợi với các khuẩn lạc màu hồng có hoặc không có tâm màu đen. Cuối cùng chi Klebsiella sẽ phát triển thành các khuẩn lạc màu vàng.

Suy nghĩ cuối cùng

Thạch XLD được sử dụng rộng rãi trong các phòng thí nghiệm vi khuẩn học vì hiệu quả cao trong việc thu hồi Shigella và cũng có khả năng phục hồi tốt chi Salmonella.

Rall và cộng sự (2005) trong công trình của họ có tên "Đánh giá ba loại nước dùng làm giàu và năm môi trường rắn để phát hiện Salmonella ở gia cầm" đã chứng minh rằng trong số 3 môi trường cổ điển được thử nghiệm (thạch xanh sáng, thạch SS và thạch XLD) , Thạch XLD có tỷ lệ thu hồi tốt nhất.

Tỷ lệ thu hồi như sau: 13,8% đối với thạch xanh sáng, 27,6% đối với SS và 34,5% đối với XLD. Thạch Rambach với độ thu hồi 48% và CHROMagar với 79,3% chỉ bị vượt qua bởi môi trường sinh sắc tố.

Người giới thiệu

1. Các bệnh do thực phẩm. Bệnh Shigellosis. Có tại: anmat.gov.ar
2. "XLD thạch." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 9 tháng 2 năm 2019, 11:46 giờ UTC. 10 tháng 4 năm 2019, 19:25 wikipedia.org
3. Phòng thí nghiệm BBL. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (hai mặt). 2013 Có tại: bd.com
4. Phòng thí nghiệm Neogen. Thạch XLD. Có sẵn tại: foodafety.neogen
5. Phòng thí nghiệm Francisco Soria Melguizo. XLD Agar. Có tại: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Đánh giá ba loại nước dùng làm giàu và năm môi trường mạ để phát hiện Salmonella ở gia cầm. Braz. J. Microbiol. Năm 2005; 36 (2): 147-150. Có sẵn từ: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.