NƯỚC PEPTON: CƠ SỞ LÝ LUẬN, ĐIỀU CHẾ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Nước peptone là một môi trường làm giàu chất lỏng, không lọc, chủ yếu được sử dụng làm chất pha loãng mẫu thực phẩm hoặc các vật liệu khác. Môi trường này theo quan điểm hóa học rất đơn giản, nó chứa peptone thịt, natri clorua và nước.

Nó có giá trị dinh dưỡng nhất định, cho phép làm phong phú mẫu. Nếu có vi khuẩn bị xâm hại, môi trường này có khả năng sửa chữa khả năng tồn tại. Nó đặc biệt hữu ích trong việc phục hồi vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Peptone nước trong chai. Nguồn: ThS. Marielsa gil

Trong trường hợp phục hồi Salmonellas, nên sử dụng biến thể nước peptone tự chọn; Đây là môi trường làm giàu sơ bộ cho mẫu, trong trường hợp này, nó có chứa các nguyên tố khác như dinatri photphat và dikali photphat.

Thông thường nước peptone được chuẩn bị ở pH trung tính, tuy nhiên có những biến thể khác mà độ pH cần thiết là 8,5 ± 0,2 (kiềm), vì vi khuẩn được phân lập là alkaliphilic, chẳng hạn như Vibrio cholerae.

Hơn nữa, môi trường này có thể được sử dụng làm môi trường cơ bản cho các thử nghiệm lên men carbohydrate.

Nền tảng

Peptone cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn, đặc biệt là nitơ và các axit amin chuỗi ngắn, trong khi natri clorua duy trì sự cân bằng thẩm thấu.

Hơn nữa, môi trường này có thể phân tán, đồng nhất và sửa chữa các tế bào vi khuẩn đã bị hư hỏng bởi các quy trình công nghiệp.

Là một chất pha loãng, nó lý tưởng, thay thế hiệu quả dung dịch sinh lý (SSF) hoặc dung dịch đệm phosphat (PBS).

Sự phát triển của vi khuẩn có thể thấy rõ bằng cách quan sát độ đục của nó.

Sự chuẩn bị

Chuẩn bị tại nhà (không thương mại)

Cân 1 g pepton và 8,5 g natri clorua, hòa tan trong 1 lít nước cất. Độ pH phải được điều chỉnh đến 7,0. Đối với điều này, natri clorua 1N có thể được sử dụng.

Chuẩn bị bằng phương tiện thương mại

Cân 15 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Đồng nhất hỗn hợp. Nếu cần, hỗn hợp được đun sôi trong 1 phút để giúp hòa tan hoàn toàn. Phục vụ trong chai 100 ml hoặc ống 10 ml khi cần thiết. Hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút.

Để nguội và sử dụng hoặc bảo quản trong tủ lạnh. PH cuối cùng của môi trường là 7,2 ± 0,2.

Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và môi trường chuẩn bị có màu hổ phách nhạt.

Chuẩn bị cho các thử nghiệm lên men

Đối với việc chuẩn bị trước - trước khi khử trùng - carbohydrate phải được thêm vào nồng độ cuối cùng là 1%, cộng với chỉ thị Andrade (axit fuchsin) hoặc phenol đỏ (0,018 g / L). Các ống này phải được gắn chuông Durham để quan sát sự hình thành khí.

Các biến thể khác của nước peptone

Nước peptone đệm hoặc đệm

Nó chứa enzym thủy phân casein, natri clorua, kali photphat dihydro và natri hydro photphat dodecahydrat. PH cuối cùng là 7,0 ± 0,2.

Để chuẩn bị, cân 20 g môi trường khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Để nó nghỉ khoảng 5 phút. Đun trong 1 phút cho đến khi tan hoàn toàn.

Đổ vào các lọ thích hợp khi cần thiết. Khử trùng bằng nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút.

-Nước peptone kiềm

Cân 25 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong 1 lít nước. Tiến hành như mô tả ở trên. Độ pH dao động từ 8,3 đến 8,7.

Sử dụng

Việc cấy mẫu được thực hiện bằng cách đặt mẫu trực tiếp.

Nó được sử dụng để pha loãng mẫu, đặc biệt khi nghi ngờ rằng có thể có vi khuẩn bị hư hỏng. Thông thường, độ pha loãng là 1:10 và 1: 100.

Ủ 24 giờ trong môi trường hiếu khí ở 35-37 ° C.

Mẫu phân

Đối với các mẫu phân tìm Salmonella, khuyến cáo sử dụng nước đệm hoặc nước đệm làm môi trường làm giàu sơ bộ.

Để thực hiện việc này, hãy tiến hành như sau:

Nếu phân được hình thành, lấy 1 g mẫu. Nếu chúng ở dạng lỏng, lấy 1 ml phân và hòa trong ống với 10 ml nước pepton đã chọn. Trong trường hợp gạc trực tràng, xả vật liệu có trong gạc vào ống bằng nước peptone đệm.

Trong mọi trường hợp, trộn và đồng nhất mẫu thật tốt.

Ủ ở 37 ° C trong 18 đến 24 giờ. Sau đó, nuôi cấy phụ trong môi trường tăng sinh như nước dùng selenite cystine hoặc nước dùng tetrathionate ở 37 ° C trong 18-24 giờ nữa. Cuối cùng, nuôi cấy trong môi trường chọn lọc Salmonella, chẳng hạn như thạch SS, thạch XLD, thạch Hektoen, trong số những môi trường khác.

Mẫu thức ăn

Nước pepton được sử dụng như một môi trường làm giàu hoặc như một chất pha loãng đơn giản, nhưng nếu các loài Salmonella được tìm kiếm, nó được sử dụng làm môi trường làm giàu sơ bộ, như đã mô tả.

Trong thực phẩm tiến hành như sau:

Đối với thực phẩm rắn, cân 25 g mẫu và đối với thực phẩm lỏng, đo 25 ml mẫu. Cho phần này vào bình có chứa 225 ml nước pepton. Trộn và đồng nhất mẫu.

Nếu nghi ngờ khối lượng vi sinh vật là cao, có thể thực hiện các dung dịch pha loãng nối tiếp hoặc thập phân để dễ dàng đếm các đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU).

Số lượng độ pha loãng sẽ phụ thuộc vào loại mẫu và kinh nghiệm của người phân tích.

Ngược lại, nếu nghi ngờ lượng vi sinh vật rất thấp thì không cần tiến hành pha loãng. Sau đó, cấy con trên các phương tiện chọn lọc.

Trong trường hợp thực phẩm từ biển, chẳng hạn như động vật có vỏ, cá, trong số những thứ khác, để tìm vi khuẩn Vibrio cholerae hoặc các loài Vibrio khác, nên sử dụng nước peptone được điều chỉnh đến pH 8,5 (nước peptone kiềm).

QA

Từ mỗi mẻ đã chuẩn bị, nên ủ một đến hai ống không cấy trong 24 giờ trong môi trường hiếu khí ở 37 ° C. Vào cuối thời gian, không quan sát thấy độ đục hoặc thay đổi màu sắc.

Các chủng đối chứng đã biết cũng có thể được sử dụng để đánh giá hiệu quả của chúng:

Đối với điều này, các chủng vi khuẩn sau có thể được sử dụng: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

Trong mọi trường hợp, dự kiến ​​sẽ có sự phát triển tốt của vi sinh vật, điều này được quan sát bằng độ đục của môi trường.

Hạn chế

-Môi trường khử nước rất dễ hút ẩm nên phải tránh ẩm.

- Môi trường không được sử dụng nếu quan sát thấy bất kỳ loại hư hỏng nào.

-Môi trường nuôi cấy khử nước nên được bảo quản trong khoảng 10 - 35 ° C

-Môi trường đã chuẩn bị phải được giữ trong tủ lạnh (2-8 ° C).

Người giới thiệu

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B và Velázquez O. Các kỹ thuật phân tích vi sinh vật trong thực phẩm. 2009, xuất bản lần thứ 2. Khoa Hóa học, UNAM. Mexico. Phiên bản dành cho Quản trị viên Tài liệu và Hướng dẫn (AMyD) của Khoa Hóa học, UNAM 1. Có tại: http://depa.fquim.unam.mx
2. Phòng thí nghiệm Britannia. Nước peptone đã được đệm. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
3. Phòng thí nghiệm Neogen. Nước pepton. Có tại: Foodsafety.neogen.com
4. Phòng thí nghiệm Britannia. Nước pepton. 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
5. Phòng thí nghiệm Merck. Đệm nước peptone. Có tại: merckmillipore.com
6. Phòng thí nghiệm Conda Pronadisa. Nước peptone kiềm. Có tại: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.