NƯỚC DÙNG THIOGLYCOLLATE: LÝ DO, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các nước dùng thioglycollate là một phương tiện làm giàu nhất quán chất lỏng. Nó được biết đến với từ viết tắt FTM cho từ viết tắt của nó trong tiếng Anh Fluid Thioglycollate Medium. Nó được tạo ra bởi Brewer và được sửa đổi vào năm 1944 bởi Vera, người đã thêm casein peptone vào nó.

Môi trường này có tiềm năng oxy hóa-khử thấp, do đó nó không được khuyến khích cho sự phát triển của các vi khuẩn hiếu khí nghiêm ngặt, nhưng nó là lý tưởng để phục hồi các vi khuẩn hiếu khí dễ nuôi, kỵ khí nghiêm ngặt và không có yêu cầu.

Nước dùng thioglycollate không có chất chỉ thị. Cho thấy dịch tiết âm đạo. Nguồn: Bobjgalindo

Hiệu suất cao quan sát được với môi trường này trong việc phân lập và phục hồi nhiều loại vi sinh vật, đã được Dược điển Hoa Kỳ (USP), Hiệp hội các nhà hóa học nông nghiệp chính thức (AOAC) và Dược điển Châu Âu chấp nhận ( EP).

Các tổ chức này khuyến nghị dùng nó để kiểm tra độ vô trùng của các sản phẩm dược phẩm và để làm giàu các loại mẫu khác nhau.

Cado thioglycolat bao gồm chiết xuất nấm men, dịch tiêu hóa từ tụy của casein, dextrose khan, L-cystine, natri clorua, natri thioglycollate, resazurin và agar với số lượng nhỏ.

Có một số phiên bản của môi trường này, trong số đó là: canh thang thioglycollat ​​có chỉ thị, canh thang thioglycollat ​​không có chỉ thị, canh thang thioglycollat ​​có chỉ thị được làm giàu với hemin và vitamin K _1, và canh thang thioglycollat ​​với canxi cacbonat.

Đáng chú ý, biến thể nước dùng thioglycollate được làm giàu với hemin và vitamin K giúp tăng cường sự phát triển của các vi khuẩn kỵ khí khó tính và biến thể nước dùng thioglycollate có chứa canxi cacbonat rất hữu ích để chống lại các axit được tạo ra trong quá trình phát triển của vi sinh vật.

Nền tảng

Môi trường làm giàu thioglycollate được coi là môi trường làm giàu không chọn lọc vì nó cho phép hầu hết các vi khuẩn không khó tính phát triển. Các nhu cầu dinh dưỡng được cung cấp bởi chiết xuất nấm men, dịch tiêu hóa tuyến tụy và glucose.

Mặt khác, môi trường này, mặc dù là nước dùng, nhưng chứa một lượng nhỏ thạch; Điều này có nghĩa là nó có thế oxy hóa-khử thấp, do thực tế là nó làm chậm quá trình xâm nhập của oxy, do đó oxy giảm khi đi sâu vào ống.

Đó là lý do tại sao môi trường này là lý tưởng cho sự phát triển của vi khuẩn hiếu khí dễ nuôi, vi khuẩn ưa khí và kỵ khí nghiêm ngặt, loại sau 2 mà không cần ủ trong các điều kiện này. Môi trường tương tự điều chỉnh lượng oxy bên trong môi trường, không có ở đáy ống và lượng đủ trên bề mặt.

Tương tự như vậy, thioglycollate và L-cystine hoạt động như chất khử, giúp ngăn ngừa sự tích tụ của các chất có hại cho sự phát triển của vi khuẩn, chẳng hạn như peroxide. Ngoài ra, các hợp chất này còn chứa các nhóm sulfhydryl (-SH-), trung hòa tác dụng ức chế của các dẫn xuất thủy ngân, asen, trong số các kim loại nặng khác.

Về phần mình, resazurin là một chất chỉ thị cho quá trình khử oxit. Chất này không màu khi bị khử và có màu hồng khi bị oxi hóa. Có các biến thể nước dùng thioglycollate chỉ thị và không chỉ thị. Việc sử dụng nó sẽ phụ thuộc vào loại mẫu và sở thích của phòng thí nghiệm.

Trong khi đó, natri clorua duy trì sự cân bằng thẩm thấu của canh trường thioglycollat ​​và việc sử dụng glucose ở dạng khan ngăn cản độ ẩm dư thừa trong môi trường khử nước.

Sự chuẩn bị

Nước dùng Thioglycollate với Chỉ thị

Cân 29,75 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong 1 lít nước cất. Để hỗn hợp trong khoảng 5 phút. Đưa đến nguồn nhiệt và khuấy thường xuyên cho đến khi hòa tan hoàn toàn.

Đổ môi trường vào các ống nghiệm và hấp tiệt trùng ở 121 ° C trong 15 phút. Để nguội trước khi sử dụng. Kiểm tra bảng phụ của nhà thương mại để bảo tồn nó. Một số khuyên bạn nên bảo quản ở nhiệt độ phòng ở nơi tối, và một số khác trong tủ lạnh tránh ánh sáng.

PH của môi trường đã chuẩn bị là 7,1 ± 0,2.

Màu của môi trường khử nước là màu be nhạt và môi trường chuẩn bị có màu hổ phách nhạt với một số màu trắng đục.

Nước dùng thioglycollate với chất chỉ thị được làm giàu với hemin và vitamin K

Có những phương tiện thương mại đã chứa hemin và vitamin K ₁ , đặc biệt là để nuôi cấy vi khuẩn kỵ khí.

Nếu bạn không có môi trường làm giàu cho vi khuẩn kỵ khí, bạn có thể chuẩn bị nước dùng thioglycollate cơ bản. Đối với điều này, 10 mg hemin hydrochloride và 1 mg vitamin K _{1 được thêm vào} mỗi lít môi trường. Tuy nhiên, nếu máu hoặc huyết thanh được thêm vào nước dùng thioglycollate, thì việc bổ sung hemin hoặc vitamin K là không cần thiết.

Nước dùng thioglycollate với canxi cacbonat

Nó được bán trên thị trường và được chuẩn bị theo các hướng dẫn trên phụ trang.

Nước dùng thioglycollate không có chất chỉ thị

Loại này có cùng thành phần với thioglycollate cơ bản, nhưng không chứa resazurin.

Cân 30 g môi trường đã khử nước và hòa tan trong một lít nước cất. Phần còn lại của quá trình chuẩn bị giống như được mô tả trong nước dùng thioglycollat ​​có chất chỉ thị.

Sử dụng

Canh trường thioglycollate rất hữu ích cho việc làm giàu các mẫu lâm sàng, đặc biệt là các mẫu từ các vị trí vô trùng. Nó cũng hữu ích cho các mẫu phi lâm sàng, chẳng hạn như mỹ phẩm, thuốc, v.v.

Đối với việc cấy các mẫu chất lỏng (như CSF, chất lỏng hoạt dịch, trong số những mẫu khác), đầu tiên các mẫu được ly tâm và sau đó 2 giọt trầm tích được lấy và đặt trong canh trường thioglycollat. Ủ ở 35 ° C trong 24 giờ. Nếu không có sự phát triển (độ đục) trong thời gian này, nó được ủ đến 7 ngày.

Nếu lấy mẫu bằng tăm bông, môi trường nuôi cấy đầu tiên được cấy vào đĩa và cuối cùng đưa tăm bông vào môi trường nuôi, phần nhô ra được tách ra và đậy ống lại, để lại tăm bông bên trong. Ủ ở 35 ° C trong 24 giờ, tối đa là 7 ngày.

Đối với mẫu rắn, đồng nhất trong dung dịch nước muối sinh lý (SSF) và sau đó cấy vào canh trường thioglycollat ​​với 2 giọt huyền phù.

Đôi khi nó có thể được sử dụng như một phương tiện vận chuyển cho các mẫu mà nghi ngờ có vi khuẩn kỵ khí nghiêm trọng hoặc như một môi trường tăng sinh dự phòng.

Biến thể canh trường thioglycollate với canxi cacbonat được sử dụng để duy trì các chủng đối chứng trong thời gian dài hơn, bởi vì nó có khả năng trung hòa các axit tạo ra từ việc sử dụng glucose; Các axit này độc đối với một số vi khuẩn.

Sự tăng trưởng trong canh trường thioglycollate sẽ được quan sát bởi độ đục của môi trường. Nên thực hiện nhuộm Gram và sau đó cấy phụ trên môi trường không chọn lọc và chọn lọc, tùy thuộc vào loại mẫu và vi sinh vật nghi ngờ.

QA

Để kiểm soát độ vô trùng, nên ủ một hoặc hai loại nước dùng mà không cần cấy. Kết quả mong đợi là nước dùng trong, không có sự thay đổi màu sắc, mặc dù bình thường có thể thấy một chút màu hồng trên bề mặt của ống.

Để kiểm soát chất lượng, nên cấy từ 10 - 100 CFU các chủng đối chứng đã được chứng nhận, chẳng hạn như Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 194037, Clostridium sporogenes ATCC 19404 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Ủ ở 30 - 35 ° C trong môi trường hiếu khí trong 24 giờ đến tối đa là 3 ngày, vì những vi sinh vật này phát triển nhanh.

Sự phát triển tốt được mong đợi trong mọi trường hợp, ngoại trừ Micrococcus luteus và Bacillus subtilis, những nơi có thể có sự phát triển trung bình.

Để kiểm tra chất lượng nước dùng thioglycollate được làm giàu với hemin và vitamin K ₁ , có thể sử dụng các chủng đối chứng Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 và Bacteroides fragilis ATCC 25285. Kết quả mong đợi là sự phát triển tốt.

khuyến nghị

- Thông thường có thể quan sát thấy bề mặt của canh trường thioglycollat ​​có chất chỉ thị chuyển sang màu hồng; Điều này là do quá trình oxy hóa của môi trường. Nếu màu hồng chiếm 30% tổng lượng nước dùng trở lên thì có thể đun cách thủy trong 5 phút, để nguội lại rồi dùng.

Điều này sẽ loại bỏ oxy đã hấp thụ, trả lại môi trường về màu sắc ban đầu. Thủ tục này chỉ có thể được thực hiện một lần.

- Để cải thiện sự phát triển của vi khuẩn hiếu khí, ủ với nắp hơi lỏng. Tuy nhiên, tốt hơn là sử dụng cho mục đích này nước dùng truyền tim não hoặc nước dùng đậu nành trypticase để phát triển thích hợp các vi khuẩn hiếu khí nghiêm ngặt.

- Nên tránh sự đông cứng của môi chất hoặc quá nhiệt, vì cả hai điều kiện đều làm hỏng môi chất.

- Ánh sáng trực tiếp làm hỏng môi trường nuôi cấy, phải bảo quản tránh ánh sáng.

Người giới thiệu

1. Phòng thí nghiệm Britannia. Thioglycollate USP với chỉ thị. 2015. Có sẵn tại: labBritania.com.
2. Phòng thí nghiệm Chios Sas. 2019. Nước dùng thioglycollate. Có tại: quios.com.co
3. Phòng thí nghiệm BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Có sẵn tại: bd.com/Europe
4. Môi trường BBL được chuẩn bị trong ống để nuôi cấy vi sinh vật kỵ khí. Phương tiện thioglycollate. 2013. Có sẵn tại: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.