NƯỚC DÙNG URÊ: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các nước dùng urê là một môi trường nuôi cấy lỏng, dùng để phát hiện sự có mặt của enzym urease trong các vi sinh vật nhất định. Urease là một enzym vi sinh vật được sản xuất theo cách cấu tạo, tức là nó được tổng hợp bất kể có hay không cơ chất mà nó hoạt động.

Chức năng của urease liên quan đến sự phân hủy các hợp chất hữu cơ. Không phải tất cả các vi sinh vật đều có khả năng tổng hợp enzym này, do đó việc xác định enzym này trong phòng thí nghiệm cho phép xác định một số chủng vi khuẩn nhất định và thậm chí phân biệt giữa các loài cùng một chi.

Xét nghiệm urê âm tính và dương tính. Nguồn: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Có hai loại xét nghiệm urê: Stuart và Christensen. Chúng khác nhau về thành phần và độ nhạy. Đầu tiên là đặc biệt cho thấy một lượng lớn urease được tạo ra bởi các loài thuộc chi Proteus.

Loại thứ hai nhạy hơn và có thể phát hiện một lượng nhỏ urease được tạo ra muộn bởi các chi vi khuẩn khác, chẳng hạn như Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter và Mycobacterium.

Stuart's Urea Broth bao gồm Urê, Natri Clorua, Dipotassium Phosphate, Monopotassium Phosphate, Chiết xuất nấm men, Phenol Red và Nước cất.

Trong khi đó, canh hoặc thạch urê của Christensen bao gồm pepton, natri clorua, mono kali photphat, glucose, urê, phenol đỏ, nước cất và agar-agar. Cái sau chỉ nếu nó là môi trường rắn.

Nền tảng

Enzyme urease thủy phân urê để tạo thành carbon dioxide, nước và hai phân tử amoniac. Các hợp chất này phản ứng để tạo thành sản phẩm cuối cùng được gọi là amoni cacbonat.

Stuart's Urea Broth

Nước canh urê của Stuart có tính đệm hơn với độ pH là 6,8. Vì vậy, vi sinh vật phải có khả năng tạo thành một lượng lớn amoniac để làm phenol chuyển sang màu đỏ. Độ pH phải tăng trên 8.

Do đó, canh urê của Stuart được chọn lọc đối với các loài Proteus, cho kết quả dương tính trong vòng 24 đến 48 giờ sau khi ủ, và nó không có hiệu quả đối với vi khuẩn tạo ra lượng urê thấp hoặc thủy phân urê chậm.

Điều này là do các loài Proteus có thể sử dụng urê làm nguồn nitơ. Thay vào đó, các vi khuẩn sản xuất urease khác cần một nguồn bổ sung.

Tuy nhiên, Pérez et al. (2002) xác định rằng canh urê của Stuart có hiệu quả như thạch urê của Christensen trong việc xác định men urease trong các chủng nấm men thuộc các giống Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon và Saccharomyces.

Các tác giả nghiên cứu khẳng định đã đạt được sự đồng ý 100% với cả hai môi trường (Stuart và Christensen) khi ủ trong 24 và 48 giờ; ngoại trừ những chủng biến đổi môi trường sang màu hoa vân anh hồng đậm được coi là dương tính.

Việc làm rõ này là cần thiết, vì Lodder (1970) đã phát biểu rằng hầu hết tất cả các loại nấm men đều có thể biến phần vát của thạch Christensen urê thành màu hồng nhạt. Điều này là do thực tế là chúng có thể thủy phân urê với lượng tối thiểu, và sự hình thành các amin bằng cách khử cacboxyl oxy hóa của các axit amin trên bề mặt. Điều này không nên được hiểu là tích cực.

Christensen's Urea Agar hoặc Broth

Môi trường thạch hoặc thạch urê của Christensen ít đệm hơn, có thể phát hiện một lượng nhỏ amoniac. Hơn nữa, môi trường này được làm giàu với pepton và glucose. Các hợp chất này làm phát triển các vi sinh vật sản xuất urease khác mà không phát triển trong nước dùng Stuart.

Tương tự như vậy, xét nghiệm Christensen urê cho kết quả nhanh hơn, đặc biệt đối với Proteus, có thể cho kết quả dương tính mạnh chỉ trong 30 phút là thời gian tối thiểu và tối đa là 6 giờ.

Phần còn lại của các vi sinh vật sản xuất urease quản lý để chuyển màu của môi trường nhẹ sau 6 giờ, và mạnh sau 24, 48, 72 giờ hoặc hơn, và thậm chí một số chủng có thể cho phản ứng yếu sau 5 hoặc 6 ngày.

Giải thích cả hai phương tiện (Stuart và Christensen)

Môi trường ban đầu có màu vàng cam và phản ứng dương tính sẽ chuyển màu của môi trường sang màu hồng nhạt. Cường độ của màu tỷ lệ thuận với lượng amoniac tạo ra.

Phản ứng âm tính sẽ làm cho môi trường có màu ban đầu trừ nấm men, có thể chuyển sang màu hồng nhạt trên môi trường thạch urê Christensen.

Sự chuẩn bị

Stuart's Urea Broth

Cân các gam cần thiết theo chỉ dẫn của công ty thương mại. Tốt nhất là hòa tan trong nước cất vô trùng. Không sử dụng nhiệt để hòa tan, vì urê rất nhạy cảm với nhiệt.

Lọc màng được sử dụng để khử trùng. Đối với điều này, một bộ lọc Millipore với các lỗ có đường kính 0,45 µ được sử dụng. Không sử dụng nồi hấp. Sau khi dung dịch được lọc, nó được phân phối vào các ống vô trùng. Để có được kết quả đáng tin cậy, nên chuyển lượng nhỏ nhất từ ​​1,5 ml và 3 ml là lượng tối đa cho mỗi ống.

Bảo quản trong tủ lạnh và làm ấm trước khi sử dụng.

Nếu không có phương pháp lọc, môi trường cần được sử dụng ngay lập tức để thu được kết quả đáng tin cậy.

Một cách khác để chuẩn bị Stuart's Urea Broth như sau:

Một số nhà thương mại bán môi trường cơ bản để kiểm tra urê, không bao gồm urê.

Số lượng được chỉ định bởi công ty thương mại được cân. Nó được hòa tan trong nước cất và được khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Để yên một chút và khi môi trường ấm, thêm 100 ml dung dịch urê đã chuẩn bị ở 20% và được khử trùng bằng cách lọc.

Nó được phân phối trong các ống vô trùng, như đã mô tả trước đây.

Christensen's Urea Agar hoặc Broth

-Chuẩn bị dung dịch urê

Cân 29 g urê khử nước và hòa tan trong 100 ml nước cất. Sử dụng phương pháp lọc để khử trùng. Không hấp tiệt trùng.

-Urea base agar

Hòa tan 24 g thạch gốc đã khử nước trong 950 ml nước cất. Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Để yên cho đến khi đạt đến nhiệt độ 50 ° C và thêm urê đã chuẩn bị trước đó một cách vô trùng.

Đổ 4-5 ml vào các ống vô trùng và nghiêng cho đến khi rắn. Cần có một mỏ sáo dài.

Môi trường này cũng có thể được điều chế ở dạng lỏng.

Các ứng dụng

Thử nghiệm urê cực kỳ hiệu quả trong việc phân biệt chi Proteus với các chi khác trong Họ Enterobacteriaceae, nhờ phản ứng nhanh do Proteus cung cấp.

Sử dụng chế phẩm Christensen, thử nghiệm giúp phân biệt giữa các loài trong cùng một chi. Ví dụ, S. haemolyticus và S. warneri âm tính với coagulase và Staphylococcus tan huyết beta, nhưng khác nhau ở chỗ S. haemolyticus âm tính với urê và S. warneri dương tính với urê.

Mặt khác, McNulty đã sử dụng thành công canh 2% urê của Christensen để nghiên cứu sự hiện diện của Helicobacter pylori trong các mẫu sinh thiết lấy từ niêm mạc dạ dày (vùng antral).

Sự hiện diện của H. pylori được chứng minh bằng xét nghiệm urê dương tính. Thời gian quan sát kết quả tỷ lệ thuận với số lượng vi sinh vật có mặt.

Có thể thấy, đây là một phương pháp đơn giản để chẩn đoán Helicobacter pylori trong sinh thiết dạ dày.

Cuối cùng, thử nghiệm này cũng hữu ích để phân biệt các loài từ các chi Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus và Mycobacteria.

Gieo thử urê

Cả hai phương pháp đều yêu cầu chất cấy vi sinh mạnh để tối ưu hóa kết quả. Các khuẩn lạc vi khuẩn tốt nhất nên được lấy từ thạch máu và nấm men từ thạch Sabouraud, với một số ngoại lệ. Chất cấy được nhũ tương trong môi trường lỏng.

Đối với canh urê của Stuart, ủ ở 37 ºC trong 24 đến 48 giờ, biết rằng bạn chỉ tìm kiếm chủng Proteus khi chủng đó là vi khuẩn. Đối với các loại men có thể ủ ở nhiệt độ 37 ° C hoặc ở nhiệt độ phòng trong 24 đến 48 giờ ủ.

Trong trường hợp canh urê của Christensen, nó được ủ ở 37 ºC trong 24 giờ. Nếu xét nghiệm âm tính, nó có thể được ủ đến 6 ngày. Nếu xét nghiệm dương tính trước 6 giờ, chứng tỏ đó là chủng thuộc giống Proteus.

Trong trường hợp thạch urê Christensen, phần vát của thạch được cấy mạnh, không bị thủng. Nước dùng được ủ và ninh theo cách tương tự.

QA

Các chủng đối chứng như Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922, và Salmonella typhimurium có thể được sử dụng để kiểm tra môi trường. Hai kết quả đầu tiên sẽ cho kết quả tích cực và hai kết quả cuối cùng là tiêu cực.

Nguồn: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

Người giới thiệu

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. và cộng sự. Sử dụng nước canh urê của Stuart để xét nghiệm urease, như một xét nghiệm trong chẩn đoán nấm men. Linh mục Soc. Ven. Vi sinh. Năm 2002; 22 (2): 136-140. Có sẵn tại: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Ấn bản thứ 3. Biên tập Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
5. Phòng thí nghiệm Britannia. Christensen Medium (Cơ sở thạch urê) 2015. Có sẵn tại: britanialab.com