ORCEIN: NỀN TẢNG VÀ CHUẨN BỊ - HÓA HỌC - 2025

Các orceína là một cách tự nhiên màu tím, chiết xuất từ nhiều địa y như orchilla hoặc thuốc nhuộm màu đỏ tím, fruticose lichen Rocella tinctoria và Lecanora parella chủ yếu. Rocella tinctoria được tìm thấy ở lục địa Châu Phi và Châu Mỹ, mặc dù nó có thể bị thay thế bởi các loài khác ở Châu Âu.

Vết bẩn này đã được sử dụng rộng rãi trong các nghiên cứu di truyền tế bào từ thời cổ đại. Theo nghĩa này, chế phẩm orcein bao gồm axit axetic được LaCourt giới thiệu vào năm 1941, đó là lý do tại sao ban đầu nó được gọi là kỹ thuật LaCourt.

Cấu trúc hóa học của orcein và dung dịch orcein. Nguồn: Wikipedia.org/ Oguenther tại de.wikipedia (Tiến sĩ Guenther)

Tương tự như vậy, do tính đơn giản và chi phí thấp, nó đã được sử dụng để sản xuất giấy quỳ (một chất nhuộm chiết xuất từ ​​địa y) và trong các nghiên cứu mô học (nhuộm tế bào và mô).

Một số nghiên cứu đã sử dụng phương pháp nhuộm này kết hợp với các hóa chất khác, chẳng hạn như amoniac picrocarminat và axit axetic, để nhuộm các sợi đàn hồi và nhiễm sắc thể tương ứng. Hiện tại, orcein tiếp tục được sử dụng trong các nghiên cứu di truyền tế bào của động vật và thực vật.

Gần đây, Silva et al. Năm 2017 đã sử dụng thành công phương pháp nhuộm này để quan sát những thay đổi khác nhau xảy ra trong các sợi đàn hồi của da ngón tay cái ở người lớn tuổi Chile. Nghiên cứu này đã tiết lộ cách các sợi của ngón tay cái thay đổi khi lão hóa.

Theo nghĩa này, các sợi đàn hồi được quan sát thấy có màu nâu đen ở những cá thể trên 80 tuổi; trong khi ở những người trẻ nhất (từ 60 tuổi) chúng có màu nâu đỏ. Tế bào chất và các cấu trúc tế bào khác chuyển sang màu vàng xanh.

Điều này cho phép chứng thực sự hiện diện và tình trạng của các sợi đàn hồi, về cấu tạo, số lượng và tính toàn vẹn của chúng. Mặt khác, người ta cũng chỉ ra rằng orcein giúp ích rất nhiều trong việc xác định chứng phình động mạch và chẩn đoán viêm động mạch, trong số các bệnh lý khác.

Nền tảng

Orcein là một phần của nhóm thuốc nhuộm oxazine và việc nhuộm màu dựa trên ái lực của nó với DNA. Thuốc nhuộm liên kết với điện tích âm của phân tử này, được đại diện bởi nhóm photphat. Đó là lý do tại sao, các nhiễm sắc thể có màu tím.

Tuy nhiên, các cấu trúc còn lại của tế bào có màu khác. Cụ thể, trong trường hợp sợi đàn hồi, chúng có màu nâu đỏ, nhân tế bào từ xanh lam đến tím sẫm, trong khi collagen không bị ố vàng.

Vì lý do này, orcein được sử dụng để nhuộm chất nhiễm sắc và phân biệt giới tính ở một số loài ruồi. Tương tự như vậy, nhân và một số tạp chất trong gan do kháng nguyên viêm gan B tạo ra có thể bị nhuộm màu.

Các dung dịch Orcein có chức năng cụ thể trong việc nhuộm màu. Orcein A có chức năng làm mềm màng tế bào, gây chết chúng và làm tê liệt quá trình phân chia của chúng. Trong khi đó, orcein B chịu trách nhiệm hoàn thành quá trình nhuộm màu nhờ sự kết dính của nó với nhiễm sắc thể.

Sự chuẩn bị

Dung dịch aceto-orcein 1%

Để chuẩn bị dung dịch aceto-orcein 1%, 2 gam orcein được hòa tan trong 45 ml axit axetic băng, tốt nhất là dùng nóng, và thêm 55 ml nước cất ở nhiệt độ phòng.

Sau đó, nó liên tục được trộn để đồng nhất dung dịch, sau đó để nó nghỉ cho đến khi nó nguội. Cuối cùng, nó được bảo quản ở 4ºC trong các lọ tối. Chế phẩm này được Flores 2012 sử dụng để quan sát các giai đoạn trưởng thành của tế bào trứng bò.

Trong trường hợp này, ví dụ, dung dịch aceto-orcein được đặt trên mô trước đó đã được cố định trong axit axetic-etanol trong 24 giờ. Quá trình nhuộm này được thực hiện trong 30 phút và mô sau đó được đổi màu.

Tương tự như vậy, nó có thể được sử dụng để xác định các bào quan trong các mô đa bào. Trong trường hợp này, một vết bẩn của niêm mạc được nhuộm bằng một giọt dung dịch aceto-orcein, tấm phủ được đặt trên phiến kính và có thể quan sát ngay nhân tế bào với các cấu trúc nền của nó.

Dung dịch lacto-proponic orcein 1%

Ngoài ra, orcein có thể được điều chế bằng các hóa chất khác như axit lactic và axit propionic. Để làm điều này, một gam orcein được hòa tan trong dung dịch đã trộn sẵn ở nhiệt độ phòng của 23 ml axit lactic và 23 ml axit propionic; định mức bằng nước cất đến 100 ml.

Với dung dịch orcein lacto-propionic này, có thể quan sát các giai đoạn phân chia sinh học khác nhau của tế bào thực vật. Trong trường hợp này, mẫu đã được cố định trước và thủy phân được đặt trong 15 phút trong dung dịch lacto-propionic orcein và sau đó mô được trải trên các lam kính hiển vi.

Trong nghiên cứu năm 2016 của Duque về nhiễm sắc thể đa gen, ông đã sử dụng một chế phẩm gồm 2 gam orcein pha loãng trong axit axetic và 85% axit lactic, pha loãng với dung dịch axit axetic 65%. Cuối cùng, ông xem xét các nhiễm sắc thể trong tuyến nước bọt của Drosophila melanogaster.

Orcein A và Orcein B

Điều quan trọng cần lưu ý là tùy thuộc vào mẫu và những gì cần đánh giá, dung dịch orcein thích hợp được chuẩn bị. Vì vậy, ví dụ, axit clohydric 1N được thêm vào dung dịch orcein A để quan sát các tế bào đang phân chia.

Trong khi dung dịch orcein B được hòa tan trong axit axetic 45%. Kỹ thuật này là một phương pháp nhuộm viết tắt và thường được sử dụng như một phương pháp hỗ trợ cho quá trình nhuộm cấu trúc nhiễm sắc thể.

Suy nghĩ cuối cùng

Từ nhiều thế kỷ trước, các loại địa y như Lecanora, Parmelia và Uosystemicaria có thể được tìm thấy ở các nước thuộc lục địa Châu Mỹ như Argentina, là những nguồn cung cấp orcein tuyệt vời. Ngoài ra, các khu vực châu Âu như quần đảo Canary, vào thời điểm đó cũng là những nhà sản xuất lớn của lan hồ điệp.

Sản phẩm này đã được xuất khẩu sang các thành phố khác của cùng lục địa này như Genova và các nước như Anh, trong khi Hà Lan độc quyền sản xuất quỳ tím từ cây lan. Do đó, loài địa y này sau đó đã bị suy giảm cho đến khi sắp tuyệt chủng.

Điều này dẫn đến việc cây lan bị thay thế bằng các cây khác có đặc tính thuốc nhuộm. Tuy nhiên, sự xuất hiện của thuốc nhuộm tổng hợp đã góp phần chấm dứt việc buôn bán địa y nguồn orcein này.

Điều này có được nhờ Cocq, người vào năm 1812 đã mô tả quá trình tổng hợp orcein, biết rằng sau đó nó được tổng hợp bởi một hợp chất phenolic gọi là orcinol. Tuy nhiên, mặc dù vậy, orcein tự nhiên vẫn được ưa chuộng hơn ngày nay.

Điều này có thể là do orcinol là một hợp chất có mùi rất mạnh và việc tiếp xúc lâu dài với nó có thể gây ra các nguy cơ về sức khỏe, chẳng hạn như mất khả năng phát hiện mùi. Những tổn thương này đối với tuyến yên có thể từ tạm thời đến vĩnh viễn khi mức độ phơi nhiễm càng lớn.

Người giới thiệu

1. Ortega L, García R, Morales C. «Ứng dụng laccase do nấm tạo ra để phân hủy thuốc nhuộm vi sinh (orcein và tím pha lê).» Khoa học trẻ 2. 2015; 633-637. Có tại: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína và Sợi đàn hồi. Y học (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Có sẵn tại: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Đặc điểm mô học của da mặt bay ở ngón tay cái ở các cá thể Chile bị mờ dần. J. Morphol. Năm 2017; 35 (3): 1107-1113. Có sẵn tại: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. "Sinh học sinh sản khoai tây và di truyền tế bào." Trung tâm Khoai tây Quốc tế (CIP). Hướng dẫn kỹ thuật. Có tại: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. «Thu thập, nuôi cấy và nuôi trưởng thành trong ống nghiệm của tế bào trứng bò (bos taurus) ở vùng cao nguyên Bolivia." . Đại học Quốc gia Altiplano, Puno-Peru; 2012. Có sẵn tại: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Nhiễm sắc thể đa bội: Xem xét hiện tượng nhân đôi. Đại học Quốc gia Colombia, Medellín; 2016. Có tại: edu.
7. Camarena F. Sinh học tế bào và phân tử. Sách hướng dẫn thực hành. Đại học tự trị Baja California. 2017. Có sẵn tại: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / IAEA. 2018. Hướng dẫn phân biệt ruồi Anastrepha ludens (Loew) hoang dã và được nuôi từ dòng bình thường (“hai giới tính”) và dòng có giới tính di truyền (Tapachula-7), đã chiếu xạ và không chiếu xạ. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF và Soto García DN Tổ chức Nông lương của Liên hợp quốc. Rome, Ý, 95 tr.
9. Orcein. (2018, ngày 30 tháng 11). Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày tư vấn: 03:38, 31/07/2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, ngày 16 tháng 7). Kính hiển vi Orcein cho kính hiển vi Certistain. Có tại: merckmillipore.com