THỬ NGHIỆM COAGULASE: CƠ SỞ, QUY TRÌNH VÀ CÁCH SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2025

Các thử nghiệm coagulase là một kỹ thuật phòng thí nghiệm sử dụng để tiết lộ sự hiện diện của các enzyme coagulase. Enzyme này có đặc tính làm đông tụ huyết tương. Năm 1903, Loeb là người đầu tiên mô tả loại enzyme này.

Thử nghiệm này được thực hiện trên các cầu khuẩn Gram dương, catalase dương tính, cho phép phân biệt các chủng Staphylococcus aureus với phần còn lại của các tụ cầu, vì đây là vi sinh vật duy nhất có tầm quan trọng lâm sàng tạo ra nó.

Cả hai hình ảnh đều cho thấy xét nghiệm Coagulase dương tính. Nguồn: Ảnh trái: Philippinjl. Ảnh phải: Ảnh do tác giả ThS. Marielsa Gil.

Theo nghĩa này, các thành viên của Họ Staphylococaceae có kết quả xét nghiệm âm tính thường được gọi là Staphylococcus âm tính với coagulase.

Có một số chủng khác ngoài S. aureus có thể tạo ra coagulase, chẳng hạn như Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. trung gian và S. delphini.

Tuy nhiên, ba loài đầu tiên có tầm quan trọng lâm sàng ở cấp thú y và rất hiếm khi được tìm thấy như một tác nhân gây nhiễm trùng ở người, trong khi S. delphini chỉ được tìm thấy trong môi trường biển.

Hơn nữa, chúng dễ dàng phân biệt vì S. hyicus và S. trung gian không lên men mannitol và S. schleiferi spp coagulans không lên men maltose hoặc trehalose, trong khi S. aureus không lên men các carbohydrate này.

Sự hiện diện của enzym coagulase có liên quan đến độc lực của các chủng. Tuy nhiên, lý thuyết này đã bị thất bại, vì các loài âm tính với coagulase độc ​​lực khác có khả năng gây nhiễm trùng đáng kể được quan sát thấy.

Nền tảng

Diễn dịch

Kết tụ trong vòng 5-20 giây (thử nghiệm dương tính mạnh).

Sự ngưng kết biến đổi xảy ra trong khoảng thời gian từ 20 giây đến một phút (thử nghiệm dương tính chậm).

Một số mức độ ngưng kết sau một phút (bằng chứng đáng ngờ). Nên lặp lại thử nghiệm hoặc xác nhận bằng phương pháp ống nghiệm.

Không có ngưng kết (thử nghiệm âm tính).

Kết quả với SSF. Nó phải luôn cho kết quả âm tính, nếu nó cho kết quả dương tính tự động kết quả xét nghiệm bị vô hiệu.

-Kiểm tra coagulase trên ống

nguyên vật liệu

-Ống nghiệm vô trùng

-Plasma

-Bath of Mary ở 37 ° C.

Kỹ thuật

Dùng pipet vô trùng hút 0,5 ml huyết tương cho vào ống nghiệm 12 x 75. Nạp vòng platin với 2 đến 4 khuẩn lạc tinh khiết để nghiên cứu từ môi trường nuôi cấy rắn trong 18 đến 24 giờ và hòa tan trong huyết tương trộn cẩn thận và ủ ở 37 ° C trong 4 giờ.

Kiểm tra ống trong giờ đầu tiên không lắc, chỉ cần nghiêng nhẹ. Nếu vẫn không thấy cục máu đông, có thể tiếp tục quan sát nó sau mỗi 30 phút cho đến khi hết 4 giờ. Nếu sau 4 giờ mà vẫn âm thì có thể để đến 24 giờ nhưng ở nhiệt độ phòng. Quan sát và báo cáo kết quả.

Dựa trên kinh nghiệm, một số nhà vi sinh vật học khuyên bạn nên sử dụng 500 µl huyền phù vi khuẩn từ quá trình nuôi cấy trong 18 giờ trong môi trường lỏng để thực hiện thử nghiệm.

Nó dường như cho kết quả nhanh hơn và đáng tin cậy hơn so với khi nhũ hóa khuẩn lạc từ môi trường rắn, đặc biệt nếu huyết tương người lấy từ ngân hàng máu đã được sử dụng.

Việc sử dụng các chủng từ nước dùng giúp làm loãng sự hiện diện có thể có của các kháng thể chống tụ cầu ở người trong huyết tương có thể ức chế hoạt động của coagulase.

Diễn dịch

Nếu thấy cục máu đông bao gồm toàn bộ chất lỏng (đông hoàn toàn) hoặc cục máu đông không có gì trong chất lỏng còn lại (đông một phần) thì đó được coi là xét nghiệm dương tính.

Nếu không hình thành cục máu đông, tức là huyền phù vẫn đồng nhất thì phép thử là âm tính.

-Xét nghiệm men đông bằng cách sử dụng fibrinogen

Fibrinogen được sử dụng giống như huyết tương và được sử dụng cho cả xét nghiệm phiến kính và ống nghiệm. Tiến hành như mô tả đối với huyết tương và giải thích theo cách tương tự.

Sử dụng

Nó được sử dụng để phân biệt Staphylococcus aureus với staphylococci âm tính với coagulase.

QA

Chuẩn bị sẵn các mẫu cấy mới của dòng S. aureus để sử dụng như một đối chứng tích cực. Một chủng S. epidermidis cũng có sẵn như một đối chứng âm tính.

Hạn chế

- Không nên để xét nghiệm dương tính trong 24 giờ vì S. aureus tạo ra fibrinolysin làm tan cục máu đông.

-Để thử nghiệm đáng tin cậy, nên sử dụng huyết tương tươi hoặc mới hoàn nguyên, cũng như điều quan trọng là sử dụng dịch cấy vi khuẩn tươi (18 đến 24 h). Điều này tránh âm tính giả.

- Thử nghiệm phải được thực hiện cùng với một đối chứng âm tính và dương tính.

-Một số môi trường rắn có thể gây trở ngại cho thử nghiệm coagulase. Không khuyến cáo sử dụng khuẩn lạc từ thạch mannitol mặn.

-Nếu sử dụng huyết tương đã citrate, nên đặt 5 đơn vị heparin trên mỗi ml huyết tương để tránh dương tính giả. Điều này là do một số vi sinh vật khác ngoài S. aureus có thể phân hủy citrate và làm cho huyết tương đông lại. Trong trường hợp này, nên làm xét nghiệm Gram và catalase.

-Điều quan trọng là trong ống nghiệm, theo dõi phản ứng sau mỗi 30 phút, vì có những chủng S. aureus tạo ra nồng độ fibrinolysin cao và sẽ làm loãng nhanh cục máu đông mới hình thành. Tránh phủ định sai.

-Khi theo dõi thử nghiệm, tránh lắc ống đột ngột, điều này có thể phá hủy sự khởi đầu của sự hình thành cục máu đông mà sau này sẽ không phục hồi, gây ra âm tính giả.

Người giới thiệu

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Ấn bản thứ 3. Biên tập Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Phòng thí nghiệm Pro-Lab. Thỏ đông tụ huyết tương. Có tại: pro-lab.com
5. "Coagulase." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 12 tháng 2 năm 2019, 04:23 UTC. Ngày 22 tháng 4 năm 2019, 15:50 wikipedia.org.