NHUỘM NANG: CƠ SỞ VÀ KỸ THUẬT - SINH HỌC - 2026

Các viên nang nhuộm là một khác biệt kỹ thuật nhuộm màu trong đó có tài sản của cấu trúc polysaccharide căng thẳng xung quanh một số vi khuẩn và nấm men được gọi là viên nang. Nó được sử dụng trong các phòng thí nghiệm lâm sàng để giúp chẩn đoán một số bệnh lý gây ra bởi vi sinh vật có vỏ bọc.

Nó cũng được sử dụng trong các phòng thí nghiệm giảng dạy để chứng minh cấu trúc hình thái này cho sinh viên của các ngành khoa học sức khỏe, chẳng hạn như: y học, phân tích sinh học, điều dưỡng hoặc công nghệ tế bào, trong số những người khác.

Vi khuẩn Klebsiella pneumoniae nhuộm vết nang. Phương pháp mực Ấn Độ với safranin. Nguồn: А.А.В

Có một số kỹ thuật đơn giản để chứng minh sự hiện diện của viên nang trong các vi sinh vật sở hữu nó, đó là: nhuộm âm tính, nhuộm Anthony và một biến thể kết hợp hai loại trước đó.

Phương pháp nhuộm âm tính chủ yếu được sử dụng trong các mẫu dịch não tủy khi nghi ngờ sự hiện diện của nấm men Cryptococcus neoformans. Loại men này là nguyên nhân phổ biến của bệnh viêm màng não.

Kỹ thuật này sử dụng mực nigrosin hoặc Ấn Độ và dựa trên việc tạo ra sự tương phản giữa nền của chế phẩm và viên nang không thể xuyên thủng của vi sinh vật. Nền chuyển sang màu tối và viên nang không màu. Bằng cách này, cấu trúc này được tiết lộ.

Về kỹ thuật Anthony, có thể nói rằng nó hầu hết được sử dụng trong các phòng thí nghiệm giảng dạy để chứng minh cấu trúc polysaccharide ở vi khuẩn như Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae và Neisseria meningitidis.

Việc sử dụng kỹ thuật này cho mục đích chẩn đoán là rất hiếm khi có các xét nghiệm thông thường khác cho phép xác định các vi sinh vật này.

Nền tảng

Viên nang là một cấu trúc mạnh mẽ có bản chất polysaccharide. Điều này bảo vệ các vi sinh vật khỏi bị thực bào, và do đó là một cấu trúc khó xâm nhập.

Đó là lý do tại sao vết ố của viên nang dựa trên độ tương phản. Chất tạo màu nhuộm đáy chế phẩm trong khi viên nang vẫn không màu.

Do đó, với những kỹ thuật này, viên nang có thể dễ dàng nhận ra. Nếu vi sinh vật không có nang thì sẽ không phân biệt được với loại phẩm màu này, vì mọi thứ sẽ được nhuộm màu giống nhau.

Tất cả các kỹ thuật được sử dụng để tạo màu cho viên nang đều có cơ sở giống nhau mặc dù sử dụng thuốc nhuộm và quy trình khác nhau.

Kỹ thuật ngang

-Vệt màu

Vết bẩn của Anthony sử dụng màu tím pha lê làm vết bẩn. Điều này sẽ làm cơ thể vi khuẩn bị ố và màu tím nền.

Mặt khác, 20% đồng sunfat được sử dụng. Đây là dung dịch rửa, nghĩa là, nó loại bỏ tinh thể tím dư thừa khỏi chế phẩm, làm cho viên nang trong suốt nhưng không có cơ thể vi khuẩn hoặc nền bị mất màu.

nguyên vật liệu

- Sữa óng ánh.

- Cầu trượt.

- 1% tinh thể tím.

- 20% đồng sunfat.

- Kính hiển vi quang học.

- Dầu ngâm.

Quá trình

Kỹ thuật này bao gồm:

1. Nuôi cấy vi sinh trong sữa ngũ sắc trong 36 giờ.
2. Nhỏ một giọt dịch cấy vào cuối lam kính và bên cạnh nhỏ một giọt thủy tinh tím, trộn đều và phết vào đầu lam kính khác.
3. Phơi khô và không để ở nhiệt độ cao.
4. Rửa bằng dung dịch đồng sunfat 20%, để khô ngoài không khí.
5. Quan sát dưới kính hiển vi với vật kính ngâm. Tìm kiếm về phía cuối của sự lây lan.

Điều quan trọng là không được sử dụng nhiệt để cố định hoặc sấy khô, vì điều này làm hỏng viên nang. Cũng không rửa bằng nước.

Diễn dịch

Sữa óng ánh là một môi trường nuôi cấy tuyệt vời vì nó cung cấp các chất dinh dưỡng cần thiết cho vi sinh vật để phát triển một viên nang nổi bật.

Ngược lại, sữa óng ánh sẽ tạo thành một lớp đáy đặc và đặc sẽ có màu tím cùng với xác vi khuẩn, nhưng vỏ nang bao quanh vi sinh vật vẫn không màu. Do đó, có thể quan sát thấy một quầng rõ ràng xung quanh cơ thể vi khuẩn.

Biểu diễn đồ họa trên quan sát bằng kính hiển vi của một vết bẩn Klebsiella pneumoniae được nhuộm bằng vết của Anthony. Nguồn: Thực hiện bởi tác giả ThS. Marielsa Gil.

Lợi thế

Đó là một kỹ thuật đơn giản để thực hiện. Không yêu cầu sửa chữa.

Ngoài ra, cần lưu ý rằng có thể sử dụng các môi trường nuôi cấy khác, nhưng môi trường sữa được ưu tiên hơn vì nó có ưu điểm là cung cấp các viên nang nổi bật hơn.

Nhược điểm

Đây là một kỹ thuật tốn nhiều công sức hơn một chút so với nhuộm âm bản, và việc hình dung nó đòi hỏi phải đợi quá trình chuẩn bị khô hoàn toàn.

-Nhiệt độ

nguyên vật liệu

- Các slide trình chiếu.

- Môi trường nuôi cấy vi sinh vật.

- Mực Trung Quốc hoặc nigrosine.

- Kính hiển vi quang học.

- Dung dịch nước muối sinh lý.

Quá trình

Nhỏ một giọt nước muối sinh lý lên tấm bìa và hòa tan một phần nhỏ dịch cấy vi sinh vật. Điều quan trọng là pha chế không quá đặc. Sau đó nhỏ một giọt mực Trung Quốc hoặc nigrosine và trộn đều.

Sau đó, một tấm bìa cứng được đặt lên trên phần chuẩn bị mà không làm tràn chất lỏng. Nó được quan sát dưới kính hiển vi bằng cách đầu tiên tập trung vào vật kính 10X và sau đó chuyển sang 40X.

Kỹ thuật này cũng có thể được sử dụng trực tiếp trên các mẫu CSF. Tức là thay vì đặt một giọt dịch cấy vi sinh, người ta đặt một giọt dịch não tủy vào.

Lợi thế

Đây là một phương pháp đơn giản để thực hiện và đồng thời không tốn kém. Nó không yêu cầu cố định hoặc làm khô chế phẩm.

Nhược điểm

Điểm bất lợi là nó phải được quan sát dưới kính hiển vi trước khi chế phẩm khô, vì nếu điều này xảy ra, vi sinh vật sẽ co lại, gây khó khăn cho việc quan sát.

Mặt khác, dương tính giả có thể xảy ra nếu nhân viên phân tích thiếu kinh nghiệm, vì bạch cầu thường bị nhầm lẫn với nấm men.

Việc quan sát viên nang nấm men bằng kỹ thuật mực Trung Quốc hoặc nigrosin nên được coi là một chẩn đoán giả định về Cryptococcus neoformans cho đến khi nó được chứng minh bằng phương pháp nuôi cấy.

Điều này là do có những loại nấm men khác có thể là nguyên nhân gây ra viêm màng não chứ không chỉ Cryptococcus neoformans, chẳng hạn như nấm thuộc chi Candida và Rhodotorula, cũng như các loài Cryptococcus khác.

Diễn dịch

Nếu có vi sinh vật dạng viên nang, sẽ quan sát thấy nền tối, với các thể trong suốt nổi trong chất lỏng, làm nổi bật sự hiện diện của viên nang.

Viên nang Cryptococcus neoformans nhuộm bằng mực Trung Quốc. Nguồn: Tín dụng Hình ảnh: (Các) Nhà cung cấp Nội dung: CDC / Dr. Leanor haley

-Kỹ thuật mực in Ấn Độ

Kỹ thuật này cũng có thể được thực hiện với nigrosine. Nó là sự kết hợp của các kỹ thuật đã giải thích trước đó. Kỹ thuật này sử dụng pha lê tím và mực Ấn Độ hoặc nigrosine.

Cơ thể vi khuẩn có màu tím của tinh thể tím vì nó mang điện tích âm, trong khi nigrosin tạo màu cho đáy của vết bẩn. Nếu vi khuẩn có nang, nó sẽ xuất hiện như một quầng trong suốt bao quanh vi sinh vật.

Màu tím pha lê có thể được thay thế bằng bất kỳ màu nào sau đây: safranin, fuchsin cơ bản hoặc xanh metylen.

nguyên vật liệu

- Kính tím.

- Nigrosine hoặc mực Ấn Độ.

- Các slide trình chiếu.

- Kính hiển vi.

Quá trình

- Nuôi cấy vi sinh vật trong môi trường nuôi cấy.

- Nhỏ một giọt dịch cấy vào cuối một phiến kính và bên cạnh đó, đặt một giọt mực India pha lê hoặc nigrosine, trộn đều và phết lên đầu một phiến kính khác.

- Phơi khô và không cố định nhiệt.

- Đậy bằng dung dịch thuốc tím trong 1 phút, rửa bằng nước cất nhưng rất kỹ (tia mềm), để khô ngoài trời.

- Quan sát dưới kính hiển vi với vật kính ngâm. Tìm kiếm về phía cuối của sự lây lan.

Diễn dịch

Sẽ thấy một cơ thể vi khuẩn màu tím và nền tối. Viên nang, nếu có, xung quanh vi khuẩn sẽ không màu.

Người giới thiệu

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Các kỹ thuật cơ bản của Vi sinh vật học. Quan sát vi khuẩn. Reduca (Sinh học). Dòng vi sinh. Năm 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Các vết bẩn cơ bản trong phòng thí nghiệm vi sinh. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Có tại: medigraphic.com
3. Gil M. Nhuộm âm tính: cơ sở lý luận, kỹ thuật, ưu nhược điểm. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule Stain: Nguyên tắc, quy trình và kết quả. 2019. Hướng dẫn Vi sinh Y tế. Có tại: microbeonline.com