HÓA MÔ: CƠ SỞ LÝ LUẬN, XỬ LÝ, NHUỘM - SINH HỌC - 2026

Mô hóa học là một công cụ hữu ích trong việc nghiên cứu hình thái của các mô sinh học khác nhau (thực vật và động vật) do nguyên tắc phản ứng của nó với các thành phần mô như carbohydrate, lipid và protein, trong số những chất khác, thuốc nhuộm hóa học.

Công cụ có giá trị này không chỉ cho phép xác định thành phần và cấu trúc của các mô và tế bào, mà còn cả các phản ứng khác nhau xảy ra trong chúng. Tương tự như vậy, có thể chứng minh tổn thương mô do sự hiện diện của vi sinh vật hoặc các bệnh lý khác.

Các vết bẩn mô học. Virus sông Nile, vi khuẩn Gram dương và Gram âm (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Nguồn: Pixinio.com/Wikipedia.org/Nephron / CDC / Dr. George P. Kubica

Hóa mô, từ nhiều thế kỷ trước đã đóng góp quan trọng, chẳng hạn như sự chứng minh sự tồn tại của hàng rào máu não của Paul Ehrlich. Điều này có thể xảy ra vì não của động vật thí nghiệm mà Ehrlich sử dụng không bị nhuộm anilin, một loại thuốc nhuộm cơ bản.

Điều này dẫn đến việc sử dụng các loại thuốc nhuộm khác nhau như xanh methylen và indophenol, để nhuộm các loại tế bào khác nhau. Phát hiện này đã dẫn đến việc phân loại các tế bào thành ưa axit, ưa bazơ và bạch cầu trung tính, theo cách nhuộm cụ thể của chúng.

Các nghiên cứu gần đây đã áp dụng kỹ thuật này để chỉ ra sự hiện diện của các hợp chất khác nhau, bao gồm cả phenol, cũng như carbohydrate và lipid không cấu trúc, trong mô của loài Litsea glaucescens, hay còn được gọi là nguyệt quế. Tìm thấy những thứ này, cả trong lá và trong gỗ.

Tương tự như vậy, Colares và cộng sự, 2016, đã xác định loài thực vật quan tâm làm thuốc Tarenaya hassleriana, sử dụng các kỹ thuật mô hóa học. Ở loài này, người ta đã chứng minh sự hiện diện của tinh bột, myrosine, cũng như các hợp chất phenol và ưa béo.

Nền tảng

Hóa mô dựa trên sự nhuộm màu của các cấu trúc tế bào hoặc các phân tử có trong các mô, nhờ vào ái lực của chúng với thuốc nhuộm cụ thể. Phản ứng tạo màu của các cấu trúc hoặc phân tử này ở định dạng ban đầu của chúng, sau đó được hình dung trong kính hiển vi quang học hoặc kính hiển vi điện tử.

Tính đặc hiệu của sự nhuộm màu là do sự hiện diện của các nhóm nhận ion có trong tế bào hoặc phân tử mô.

Cuối cùng, mục tiêu của các phản ứng mô hóa là có thể hiển thị nó thông qua nhuộm. Từ các cấu trúc sinh học lớn nhất đến nhỏ nhất của các mô và tế bào. Điều này có thể đạt được nhờ thực tế là thuốc nhuộm phản ứng hóa học với các phân tử của mô, tế bào hoặc bào quan.

Truy tố

Phản ứng mô hóa có thể bao gồm các bước trước khi thực hiện kỹ thuật, chẳng hạn như cố định, nhúng và cắt mô. Do đó, cần phải lưu ý rằng trong các bước này, cấu trúc được xác định có thể bị hỏng, tạo ra kết quả âm tính giả, ngay cả khi nó có mặt.

Mặc dù vậy, việc cố định trước của mô được thực hiện đúng cách là rất quan trọng, vì nó ngăn chặn quá trình tự phân hủy hoặc phá hủy tế bào. Đối với điều này, các phản ứng hóa học được sử dụng với các dung môi hữu cơ như: formaldehyde hoặc glutaraldehyde, trong số những chất khác.

Việc bao gồm vải được thực hiện để nó duy trì độ cứng khi cắt và do đó ngăn nó biến dạng. Cuối cùng, vết cắt được thực hiện bằng microtome để nghiên cứu các mẫu bằng kính hiển vi quang học.

Ngoài ra, trước khi tiến hành nhuộm mô hóa, nên kết hợp các kiểm soát dương tính bên ngoài hoặc bên trong trong mỗi lô xét nghiệm. Cũng như việc sử dụng thuốc nhuộm cụ thể cho các cấu trúc được nghiên cứu.

Vết bẩn mô hóa

Từ sự xuất hiện của kỹ thuật mô hóa học cho đến nay, một loạt các chất nhuộm màu đã được sử dụng, trong đó có những loại được sử dụng thường xuyên nhất như: Periodic acid Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen và Gram.

Tương tự như vậy, các loại thuốc nhuộm khác ít được sử dụng hơn như mực India, orcein hoặc vết trichrome của Masson, trong số những loại khác.

Axit định kỳ Schiff (PAS)

Với màu sắc này, có thể quan sát thấy các phân tử có hàm lượng carbohydrate cao, chẳng hạn như: glycogen và mucin. Tuy nhiên, nó cũng hữu ích cho việc xác định các vi sinh vật như nấm và ký sinh trùng. Ngoài các cấu trúc nhất định (màng đáy) ở da và các mô khác.

Cơ sở cho sự nhuộm màu này là thuốc nhuộm oxy hóa các liên kết carbon giữa hai nhóm hydroxyl gần nhau. Điều này tạo ra sự giải phóng nhóm aldehyde, và điều này được phát hiện bởi thuốc thử của Schiff, tạo ra màu tím.

Thuốc thử của Schiff bao gồm bazơ fuchsin, natri metabisulfit và axit clohydric, những thành phần này chịu trách nhiệm tạo ra màu tím, khi có mặt các nhóm aldehyde. Nếu không sẽ tạo ra axit không màu.

Cường độ của màu sẽ phụ thuộc vào số lượng nhóm hydroxyl có trong monosaccharide. Ví dụ, ở nấm, màng đáy, mucin và glycogen có thể chuyển màu từ đỏ sang tím, trong khi nhân có màu xanh lam.

Grocott

Đây là một trong những vết bẩn có độ nhạy cao nhất trong việc xác định nấm trong các mô nhúng parafin. Điều này cho phép xác định các cấu trúc khác nhau của nấm: sợi nấm, bào tử, nội bào tử, trong số những loại khác. Do đó, nó được coi là một vết thường quy để chẩn đoán bệnh nấm.

Nó đặc biệt được sử dụng trong chẩn đoán các bệnh nấm phổi như bệnh bụi phổi và bệnh aspergillosis do một số loại nấm thuộc giống Pneumocystis và Aspergillus gây ra.

Dung dịch này chứa bạc nitrat và axit cromic, chất sau là chất cố định và chất tạo màu. Cơ sở lý luận là axit này tạo ra quá trình oxy hóa các nhóm hydroxyl thành aldehyde bởi mucopolyacharide có trong cấu trúc nấm, ví dụ như trong thành tế bào của nấm.

Cuối cùng, bạc có trong dung dịch bị oxy hóa bởi andehit, gây ra màu đen, phản ứng này được gọi là phản ứng argentafin. Thuốc nhuộm tương phản như xanh lá cây nhạt cũng có thể được sử dụng và do đó cấu trúc nấm sẽ được quan sát bằng màu đen với nền xanh nhạt.

Ziehl-Neelsen

Sự nhuộm màu này dựa trên sự hiện diện của tính kháng axit-cồn, một phần hoặc toàn bộ, ở một số vi sinh vật như các chi Nocardia, Legionella và Mycobacterium.

Việc sử dụng chất nhuộm màu này được khuyến khích, vì thành tế bào của các vi sinh vật đã đề cập trước đó có chứa các lipid phức tạp cản trở sự xâm nhập của thuốc nhuộm. Đặc biệt là trong các mẫu từ đường hô hấp.

Trong đó, các chất tạo màu mạnh như carbol fuchsin (chất tạo màu cơ bản) được sử dụng và tác dụng nhiệt để vi sinh vật có thể giữ lại chất tạo màu và nó không bị mất màu với axit và rượu. Cuối cùng, dung dịch xanh metylen được dùng để tạo màu cho các cấu trúc bị đổi màu.

Sự hiện diện của tính kháng axit-cồn được quan sát thấy trong các cấu trúc được nhuộm màu đỏ, trong khi các cấu trúc không chống lại sự phai màu có màu xanh lam.

Gram và mực Trung Quốc

Gram là một chất nhuộm màu rất hữu ích trong việc chẩn đoán các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn và nấm, trong số những bệnh khác. Sự nhuộm màu này cho phép phân biệt giữa vi sinh vật Gram dương và Gram âm, cho thấy rõ sự khác biệt tồn tại trong thành phần của thành tế bào.

Trong khi mực in Ấn Độ là một loại vết bẩn được sử dụng để tương phản các cấu trúc có chứa polysaccharides (viên nang). Điều này là do một vòng được hình thành trong môi trường, có thể có trong Cryptococcus neoformans.

Orcein

Với cách nhuộm này, các sợi đàn hồi và nhiễm sắc thể của các tế bào khác nhau có màu, cho phép đánh giá quá trình trưởng thành của tế bào sau này. Vì lý do này, nó rất hữu ích trong các nghiên cứu di truyền tế bào.

Điều này dựa trên sự hấp thụ thuốc nhuộm bởi điện tích âm của các phân tử như DNA, có trong nhân của nhiều loại tế bào. Vì vậy, chúng có màu từ xanh lam đến tím sẫm.

Masson trichrome

Vết này được sử dụng để xác định một số vi sinh vật hoặc vật liệu có chứa sắc tố melanic. Đây là trường hợp của bệnh mycoses, do nấm dematiaceous, pheohifomycosis và eumycetoma hạt đen gây ra.

Suy nghĩ cuối cùng

Trong những năm gần đây, đã có nhiều tiến bộ trong việc tạo ra các kỹ thuật chẩn đoán mới, trong đó mô hóa học có liên quan nhưng được liên kết với các nguyên tắc hoặc nguyên tắc cơ bản khác. Các kỹ thuật này có một mục đích khác, như trong trường hợp hóa mô miễn dịch hoặc hóa mô enzym.

Người giới thiệu

1. Acuña U, Elguero J. Histoquímica. An. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Có tại: are.iqm.csic.es
2. Mestanza R. Tần suất nhuộm PAS, Grocott và Ziehl-Neelsen dùng để xác định vi sinh vật, được thực hiện trong Dịch vụ Giải phẫu Bệnh học của Bệnh viện Chuyên khoa Eugenio Espejo năm 2015.. Đại học Trung tâm Ecuador, Quito; 2016. Có sẵn tại: dspace.uce.edu
3. Tapia-Torres N, de la Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Hóa mô, tổng hàm lượng phenol và hoạt tính chống oxy hóa của lá và gỗ bời lời glaucescens Kunth (họ Long não). Gỗ và Rừng. 2014; 20 (3): 125-137. Có tại: redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, Arambarri, AM. Giải phẫu và hóa mô của Tarenaya hassleriana (Cleomaceae), một loài dược liệu quan tâm. Bản tin về cây thuốc và cây thơm của Mỹ Latinh và Caribe 2016; 15 (3): 182-191. Có tại: redalyc.org
5. Bonifaz A. Cơ bản về bệnh cơ. Phiên bản thứ 4. Mexico: Nhà biên tập McGraw-Hill Interamericana, SA de CV 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Daliana Queiroga de Castro, Alves Pollianna Muniz, Nonaka Cassiano Francisco Weege. Phân tích mô miễn dịch và bệnh lý Clinico về ung thư biểu mô tế bào vảy của lưỡi: một trường hợp hiếm. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): eRC4610. Có sẵn từ: scielo.br