MEDIO MIO: NỀN TẢNG, CHUẨN BỊ VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các trung MIO là một thử nghiệm sinh hóa sử dụng để hỗ trợ trong việc xác định các loài vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae. Nó khá bổ dưỡng và được tạo thành từ glucose, chiết xuất nấm men, peptone, triptein, L-ornithine hydrochloride, bromocresol tím và thạch.

Ý nghĩa của từ viết tắt của nó (MIO) mô tả từng tham số có thể được quan sát trong phương tiện này; nhu động, indole và ornithine. Khả năng di chuyển của vi sinh vật do sự hiện diện của trùng roi. Để quan sát được đặc tính này, độ đặc của môi trường phải là bán rắn, do đó, chế phẩm chứa ít thạch hơn.

Đề cương giải thích kết quả trong môi trường MIO. Nguồn: Biên soạn bởi tác giả ThS. Marielsa gil

Việc sản xuất indole cho thấy sự hiện diện của enzym tryptophanase hoạt động trên axit amin tryptophan, yêu cầu sử dụng thuốc thử tiết lộ để có thể nhìn thấy được quá trình sản xuất indole.

Cuối cùng, ornithine xác định xem vi khuẩn có thể khử cacboxylat axit amin hay không, tức là nếu nó có enzym orinithine decarboxylase.

Nền tảng

Peptone, chiết xuất nấm men và triptein

Những yếu tố này góp phần vào sức mạnh dinh dưỡng của môi trường này. Chúng đóng vai trò là nguồn cung cấp chất dinh dưỡng và các axit amin cần thiết cho sự phát triển của vi khuẩn.

Ngoài ra, triptein là một nguồn tryptophan cho thấy sự hiện diện của enzym tryptophanase, enzym này phân hủy tryptophan bằng cách khử khử amin, giải phóng indol, axit pyruvic, amoniac và năng lượng.

Indole không màu, do đó sự hiện diện của nó được bộc lộ bằng cách thêm năm giọt thuốc thử của Ehrlich hoặc Kovacs, cả hai đều với p-dimethylaminobenzaldehyde.

Nhóm aldehyde của hợp chất này phản ứng với indole, tạo ra sản phẩm màu đỏ hoa vân anh hình vòng trên bề mặt thạch.

Bất kỳ dấu vết màu nào cũng được coi là một thử nghiệm dương tính. Cần đọc ngay bản chứng minh, vì theo thời gian, màu sắc sẽ bị suy giảm.

Hơn nữa, xét nghiệm này nên được tiết lộ sau khi ghi nhận kết quả về tính di động và khử carboxyl của ornithine.

Diễn dịch

Thử nghiệm dương tính: hình thành vòng đỏ vân hoa khi thêm từng giọt thuốc thử Kovacs.

Thử nghiệm âm tính: không hình thành vòng.

Động lực

Khả năng di chuyển của vi khuẩn sẽ rõ ràng nếu quan sát thấy môi trường có vẩn đục hoặc nếu có một đường sinh trưởng dày mở rộng xung quanh lần cấy ban đầu.

Một bài kiểm tra khả năng vận động tiêu cực sẽ được chứng minh bằng cách quan sát một đường tăng trưởng mỏng và mọi thứ xung quanh nó sẽ không có sự phát triển.

Điều quan trọng là phải đọc tính chuyển động trước khi indole được tiết lộ, vì việc thêm thuốc thử sẽ làm mờ toàn bộ môi trường.

Ở vi khuẩn di động nhưng phát triển chậm, rất khó để chứng minh khả năng di chuyển của chúng với môi trường này. Trong trường hợp này, khuyến nghị sử dụng các thử nghiệm hoặc phương pháp khác, chẳng hạn như tính di động trung bình hoặc phương pháp chờ thả.

Đường glucoza

Glucose là carbohydrate có thể lên men, ngoài việc cung cấp năng lượng, axit hóa môi trường, là điều kiện cần thiết để xảy ra quá trình khử cacbon của axit amin ornithine.

Quá trình lên men glucose luôn phải xảy ra, bắt đầu từ nguyên tắc tất cả các vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae đều lên men glucose.

L-Ornithine

Trong trường hợp vi khuẩn tạo ra enzyme ornithine decarboxylase, thì enzyme này có thể hoạt động khi môi trường đã được axit hóa bằng quá trình lên men glucose.

Enzyme ornithine decarboxylase tác động lên nhóm cacboxyl của axit amin tạo ra một amin gọi là putresine làm kiềm hóa lại môi trường.

Xét nghiệm này nên được đọc sau 24 giờ ủ, vì nếu bạn cố gắng đọc trước khi bạn có thể hiểu nhầm xét nghiệm với âm tính giả.

Cần nhớ rằng phản ứng đầu tiên xảy ra là quá trình lên men glucose, do đó môi trường chuyển sang màu vàng trong giai đoạn đầu (10 đến 12 giờ đầu). Nếu sau đó quá trình khử cacboxyl ornithine xảy ra, môi trường sẽ chuyển sang màu tím.

Điều quan trọng là phải giải thích thử nghiệm khử cacboxyl ornithine trước khi tiết lộ indole, vì việc thêm thuốc thử Kovacs làm thay đổi màu của môi trường.

Diễn dịch

Thử nghiệm âm tính: màu vàng trung bình hoặc nền vàng.

Dương tính: màu tím hoàn toàn trung bình.

Chỉ báo PH

Trong trường hợp này, bromocresol tím được sử dụng; người chịu trách nhiệm tiết lộ khi có sự thay đổi pH trong môi trường. Khi axit hóa, chất chỉ thị chuyển sang màu vàng và khi kiềm hóa, nó chuyển sang màu tím.

Kỹ thuật gieo hạt và phát triển

Để gieo môi trường MIO, một vòng tròn hoặc kim thẳng được sử dụng và với nó một phần khuẩn lạc cần nghiên cứu được thu thập.

Một lỗ sâu được tạo ra ở giữa MIO theo một đường thẳng. Không nên thực hiện chọc thủng đôi, vì nó có thể cho hình ảnh sai về nhu động nếu các vết thủng không được tiến hành ở cùng một nơi.

Ủ trong 24 đến 48 giờ ở 37 ° C trong môi trường hiếu khí. Xem kết quả theo thứ tự sau: tính di động, sự khử cacboxyl của ornithine và cuối cùng tiết lộ indole.

Nên vô trùng lấy 2 ml môi trường, chuyển sang ống vô trùng và tiến hành thử indol tại đó, nếu âm tính thì có thể ủ phần còn lại của ống ban đầu thêm 24 giờ, để bộc lộ indol trở lại.

Sự phát triển của indole được thực hiện như sau: 3 đến 5 giọt thuốc thử Kovacs được thêm vào môi trường MIO và nó được khuấy mạnh. Người ta quan sát thấy vòng hoa vân anh đỏ có xuất hiện hay không.

Sự chuẩn bị

MIO trung bình

Cân 31 g môi trường MIO và hòa tan trong một lít nước cất.

Đun cho đến khi hỗn hợp sôi trong một phút, lắc thường xuyên cho đến khi thạch tan hoàn toàn. Phân phối 4ml môi trường vào 13/100 ống nghiệm có nắp bông.

Khử trùng trong nồi hấp ở 121 ° C trong 15 phút. Lấy ra khỏi nồi hấp và để đứng thẳng trên giá, sao cho một khối bán rắn được hình thành.

Bảo quản trong tủ lạnh 2-8 ° C. Hãy để nó ấm lên trước khi gieo chủng vi khuẩn.

Màu của môi trường khử nước là màu be và màu của môi trường đã chuẩn bị hơi trắng đục.

PH cuối cùng của môi trường đã chuẩn bị là 6,5 ± 0,2

Môi trường chuyển sang màu vàng ở pH axit và có màu tím ở pH kiềm.

Thuốc thử Kovacs (Nhà phát triển thử nghiệm Indole)

Thuốc thử này được chuẩn bị như sau:

Đo 150 ml amyl, isoamyl hoặc butyl alcohol (bất kỳ trong ba chất này). Trong đó có 10 g p-đimetylaminobenzaldehyde bị hòa tan. Sau đó thêm từ từ 50 ml axit clohydric đậm đặc.

Thuốc thử được chuẩn bị không màu hoặc màu vàng nhạt. Nó nên được giữ trong chai màu hổ phách và giữ trong tủ lạnh. Màu nâu sẫm cho thấy sự hư hỏng của nó.

Ngoài ra, thuốc thử Kovacs có thể được thay thế cho thuốc thử Ehrlich. Loại thứ hai, nhạy hơn, được ưa thích hơn để tiết lộ indole trong vi khuẩn sản xuất nó với số lượng ít, chẳng hạn như trong một số thanh Gram âm không lên men và một số vi khuẩn kỵ khí nhất định.

Sử dụng

Môi trường này là một thử nghiệm bổ sung cho một loạt các thử nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn thuộc họ Enterobacteriaceae.

Dữ liệu về quá trình khử cacboxyl của ornithine phục vụ cho việc phân biệt Shigella sonnei có kết quả xét nghiệm dương tính với Shigella boydii, Shigella flexneri và S. dysenterieae, xét nghiệm âm tính.

Nó cũng phân biệt chi Klebsiella cho kết quả âm tính với chi Enterobacter, nơi hầu hết các loài của nó đều cho kết quả dương tính.

Nguồn: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.

QA

Mỗi khi chuẩn bị một lô môi trường MIO, có thể thực hiện thử nghiệm đối chứng. Đối với điều này, các chủng đã biết hoặc đã được chứng nhận được sử dụng để quan sát hoạt động của môi trường.

Các chủng có thể được sử dụng là Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes và Proteus mirabilis.

Kết quả mong đợi là E. coli và M. morganii. Dan M: +, I: + và O: +.

Klebsiella pneumoniae đều âm tính (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis và Enterobacter aerogenes cho M: + I: - và O: +.

Người giới thiệu

1. Mac Faddin J. (2003). Các xét nghiệm sinh hóa để xác định vi khuẩn có tầm quan trọng lâm sàng. Ấn bản thứ 3. Biên tập Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Biên tập Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Chẩn đoán vi sinh. Ấn bản thứ 5. Biên tập Panamericana SA Argentina.
4. Phòng thí nghiệm Britannia. MIO Medio 2015. Có sẵn tại: britanialab.com
5. Phòng thí nghiệm BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Trung bình. 2007. Có tại: bd.com
6. Phòng thí nghiệm Valtek. MIO Motility trung bình, Indole, Ornithine. 2010. Có tại: andinameica.com