PHẾT MÁU: ĐẶC ĐIỂM, LOẠI, KỸ THUẬT VÀ MÔ HỌC - SINH HỌC - 2025

Các lam máu là một xét nghiệm máu ngoại vi được sử dụng để phân tích các thành phần có mặt trong lưu thông máu. Việc quan sát lam máu cung cấp dữ liệu huyết học rất hữu ích cho việc chẩn đoán và theo dõi nhiều bệnh lý.

Phôi máu cho phép định lượng số lượng các loại bạch cầu khác nhau (công thức bạch cầu), cũng như cho phép phân tích hình thái và hình dạng của hồng cầu, bạch cầu và tiểu cầu.

Chuẩn bị lam máu. Nguồn: Máu trong ly thí nghiệm. Miền công cộngPictures.net

Trong đó, có thể phát hiện những bất thường về số lượng tế bào như: tăng bạch cầu hoặc giảm bạch cầu, tăng lympho bào hoặc giảm bạch cầu, tăng bạch cầu trung tính hoặc giảm bạch cầu trung tính, tăng tiểu cầu hoặc tăng tiểu cầu và tăng bạch cầu ái toan. Các bất thường về kích thước và hình dạng tế bào cũng có thể được nhìn thấy.

Ngoài ra, có thể phát hiện các loại bệnh thiếu máu cục bộ, bệnh bạch cầu và nhiễm trùng do vi khuẩn hoặc ký sinh trùng trong máu.

Đối với điều này, có nhiều loại phết tế bào khác nhau được thực hiện tùy thuộc vào mục đích của nghiên cứu. Có những vết mỏng và những vết dày. Những vết bẩn này khác nhau về kỹ thuật thực hiện và mục đích của nghiên cứu.

Những loại có giọt mịn được sử dụng như một chất hỗ trợ để hoàn thành huyết học. Điều này cung cấp dữ liệu về công thức bạch cầu, ngoài việc phân tích hình dạng và hình thái của ba chuỗi tế bào tạo nên máu: chuỗi đỏ, chuỗi trắng và tiểu cầu. Mặc dù chúng cũng đóng vai trò bổ sung cho việc nghiên cứu màng máu dày.

Màng dày được sử dụng để chẩn đoán các bệnh do vi khuẩn hemoparasites gây ra, chẳng hạn như bệnh sốt rét hoặc sốt rét, bệnh toxoplasma, bệnh leishmaniasis, bệnh Chagas, bệnh lê dạng trùng và bệnh vi trùng.

Đặc điểm của xét nghiệm máu

Xét nghiệm máu tốt phải đáp ứng một số đặc điểm. Trong số đó có thể kể đến:

-Mẫu phải đáp ứng các yêu cầu chất lượng tối thiểu mới được làm đại diện.

-Việc lấy mẫu phải được thực hiện tốt.

- Thực hiện kịp thời các vết bẩn.

-Nếu thực hiện với máu tĩnh mạch, sử dụng chất chống đông máu không làm biến dạng tế bào và trộn ống trước khi làm phết tế bào.

-Nếu hết máu mao mạch thì bỏ giọt đầu tiên.

-Vệ sinh phải đồng nhất. Điều này đảm bảo rằng các tế bào được phân bố đồng đều và các tế bào máu có thể được phân tích tốt về hình dạng và số lượng.

- Các mặt của vết bôi phải mịn từ đầu đến cuối.

- Vết bẩn phải cách các mặt của phiến kính từ 1 đến 2 mm.

- Lớp bôi nên giảm dần độ dày từ đầu đến cuối (bôi nhỏ giọt theo phương pháp trượt).

-Phải dán nhãn đúng cách để tránh nhầm lẫn mẫu.

-Sửa và nhuộm đúng cách để quan sát rõ ràng các yếu tố máu.

- Để vết bẩn thật khô trước khi gắn chế phẩm dưới kính hiển vi. Để dầu ngâm lên vết bẩn ướt sẽ gây ra sự hình thành các micelle khiến tế bào không thể nhìn thấy được.

Các loại phết máu

Phôi máu ngoại vi có thể được phân loại thành lam mỏng và lam dày. Những người có một lớp mỏng được sử dụng để nghiên cứu công thức bạch cầu và quan sát hình thái của tế bào máu. Các vi khuẩn ngoại bào như borrelia và vi khuẩn hemoparasites nội bào, chẳng hạn như plasmodium, trong số những vi khuẩn khác, cũng có thể được nhìn thấy.

Trong đốm màu mịn, có thể xác định được loài ký sinh trùng, do đó, đây là một kỹ thuật cụ thể hơn so với đốm màu dày, nhưng đốm màu dày nhạy cảm hơn, vì đây là kỹ thuật tập trung được sử dụng để tìm kiếm toàn bộ các vi khuẩn ngoại bào.

Có hai loại vết nhòe nhỏ: loại được thực hiện trên các slide và loại được thực hiện trên bìa. Các vết bẩn dày được thực hiện trên các slide.

Kỹ thuật lấy mẫu máu

Phôi máu có thể được thực hiện từ chọc dò mao mạch hoặc lấy mẫu tĩnh mạch có chất chống đông máu. Nếu nó được thực hiện từ máu có chất chống đông, phết tế bào có thể được chuẩn bị trong vòng 2 giờ sau khi lấy mẫu.

Thận trọng khi dùng các thuốc chống đông máu không làm biến dạng tế bào máu. Lựa chọn tốt nhất là EDTA. Ngược lại, nên tránh sử dụng thuốc chống đông máu như trisodium citrate.

Nếu mẫu được lấy bằng cách chọc thủng mao mạch, vết phết phải được kéo dài ngay lập tức, trước khi máu đông.

Nên bỏ giọt đầu tiên, để giọt tiếp theo thoát ra một cách tự nhiên để tránh làm loãng mẫu với dịch mô. Đây là kỹ thuật được khuyến nghị nhất để quan sát hình thái tế bào, vì máu không có bất kỳ chất phụ gia nào.

Đối với việc quan sát hemoparasites, Solari và cộng sự đã kết luận trong công trình nghiên cứu của họ rằng cả hai kỹ thuật (chọc tĩnh mạch và mao mạch) đều hiệu quả như nhau.

Các hình thức lấy mẫu máu: A. Chọc dò mao mạch. B. Chọc dò tĩnh mạch. Nguồn: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Kỹ thuật chuẩn bị phết máu

Quá trình phết máu có thể được thực hiện thủ công trên các lam kính hiển vi hoặc trên một tấm bìa hoặc tấm trượt. Nó cũng có thể thông qua thiết bị tự động.

- Vết bẩn

Đây là kỹ thuật được hầu hết các phòng thí nghiệm ưa thích do dễ xử lý.

Dùng pipet Pasteur đặt một giọt máu không quá đặc hoặc rất mịn vào giữa một đầu của phiến kính sạch.

Vết bẩn được thực hiện với sự trợ giúp của một slide khác có đầu nối đất. Tấm kính tiếp đất được đặt vuông góc với đầu đối diện của nơi thả.

Nó nghiêng một góc từ 30 - 45 ° và lướt về phía giọt nước; Khi chạm vào, nó sẽ mở rộng tuyến tính qua mép của đường trượt trên mặt đất và với một chuyển động không đổi và xác định, trang tính sẽ quay trở lại; trước khi đến cuối slide được nâng lên.

Bằng cách này, một lớp đồng nhất được trải trên bề mặt của trang chiếu nhận.

Vết bẩn được phép khô. Sau đó nó được cố định và nhuộm bằng vết bẩn ưa thích. Để khô trước khi xem dưới kính hiển vi. Nhỏ một giọt dầu lên mặt có vết bẩn và quan sát dưới kính hiển vi ánh sáng.

Vết máu trên phiến kính. Hình ảnh trên cùng: vết bẩn không màu. Hình dưới: vết loang màu. Nguồn: Coinmac

Các phần của vết bẩn được tạo trên các trang trình bày

Trong kiểu bôi này, có thể phân biệt ba vùng xác định: đầu, thân và đuôi. Đầu tương ứng với khu vực bắt đầu bôi, đó là khu vực dày nhất và không tốt để quan sát.

Cơ thể là phần trung tâm hoặc trung gian của vết phết, đây là khu vực tốt nhất để quan sát dưới kính hiển vi, vì ở đó các tế bào được phân bố đồng đều và hình thái của chúng được bảo toàn.

Đuôi tương ứng với phần cuối cùng của vết bẩn; ở đây sự phân bố không còn đồng đều và hình thái hồng cầu có xu hướng mất đi.

Kiểm soát chất lượng trong kỹ thuật slide

Trong kỹ thuật này, nó đóng một vai trò cơ bản:

-Làm sạch và tẩy dầu mỡ của bản trượt: nó đảm bảo sự trượt tốt của mẫu.

-Kích thước của giọt: với những giọt rất lớn, vết bẩn sẽ dày hơn và lâu hơn, với một giọt rất nhỏ, độ lan tỏa sẽ ngắn hơn và cực kỳ mịn.

-Tốc độ áp dụng trong phần mở rộng: tốc độ càng thấp thì vết bẩn sẽ mỏng hơn, tốc độ cao hơn thì vết bẩn sẽ dày hơn.

- Góc thực hiện: góc càng nhỏ vết bẩn càng mịn, góc lớn càng dày.

-Bước trên kẹp

Nó không được sử dụng rộng rãi vì việc xử lý các miếng bìa mỏng manh là cồng kềnh, tuy nhiên nó mang lại những lợi thế lớn, vì thu được sự phân bố tốt hơn các tế bào trong suốt quá trình bôi.

Một giọt không dày, không mịn được đặt ở giữa một chiếc kẹp. Ngay lập tức một chiếc kẹp khác được đặt lên trên chiếc này sao cho các đầu của cả hai nắp nhô ra, tạo thành một ngôi sao.

Giọt sẽ tự phát lan rộng trên bề mặt của cả hai tấm bìa. Khi kết thúc phần mở rộng, mỗi trang trình bày được trượt sang phía đối diện của nhau (một bên phải và một bên trái) một cách nhanh chóng.

Kỹ thuật này cung cấp hai lần bôi thay vì một lần.

Chúng được đặt để làm khô với mặt trải lên trên. Sau khi khô, nó được cố định và nhuộm bằng kỹ thuật đã chọn. Hãy để nó khô. Một giọt dầu ngâm được đặt trên một phiến kính, vết bôi được đặt với mặt bôi trơn xuống và được quan sát dưới kính hiển vi.

Kiểm soát chất lượng trong kỹ thuật coverlip

Để có được một vết bẩn tốt cho kỹ thuật này, điều quan trọng là:

-Làm sạch các tấm bìa (giúp mẫu trượt trơn tru).

-Kích thước của giọt (ảnh hưởng đến độ dày của vết bẩn).

-Tốc độ mà các bìa được tách ra (ảnh hưởng đến tính đồng nhất của trải).

-Với thiết bị tự động

Chúng có thể được thực hiện thông qua bất kỳ nhóm nào sau đây: Spinner và Autoslide.

Spinner bao gồm việc đặt một tấm trượt có giọt máu trên một tấm ly tâm đặc biệt. Mẫu được ly tâm ở tốc độ cao; theo cách này, mẫu đồng nhất và mịn được hình thành. Nó có nhược điểm là khả năng làm tan máu mẫu.

Autoslide là một công cụ thực hiện một cách cơ học các chuyển động để thực hiện vết bẩn trên các slide. Bạn cũng có thể sửa và làm mờ vết ố. Nó thậm chí có thể được điều chỉnh cho phù hợp với một số quầy huyết học tự động.

Kỹ thuật bôi dày

Để tìm kiếm hemoparasites, nên dùng hai lần phết tế bào: một loại có giọt mịn và một loại có độ đậm đặc.

Tiến hành chọc thủng mao quản, làm sạch giọt đầu tiên. Nhỏ một giọt nhỏ lên một trang chiếu và bôi như đã giải thích trước đó. Đối với hạt dày, đặt một hạt lớn trên một phiến kính khác và trải thành hình vuông 1,55mm. Để hai vết bẩn khô.

Smear nhuộm

Các vết bẩn Giemsa hoặc Wright, trong số những vết bẩn khác, có thể được sử dụng để nhỏ giọt. Nên nhuộm Giemsa hoặc May-Grunwald Giemsa cho những vết bẩn dày.

Vết giemsa

Vết bẩn được cố định trong 3 phút bằng metanol, để ráo và để khô lại. Vết bẩn sau đó được phủ bằng vết Giemsa trong 10-15 phút. Nó được rửa bằng nước cất và để khô. Để quan sát dưới kính hiển vi người ta nhỏ một giọt dầu ngâm.

Vết bẩn của Wright

Vết bẩn được phủ lên vết bẩn của Wright trong 5 phút. Đổ bỏ và để dung dịch đệm ở pH 6,8 trong 6 phút. Thổi chế phẩm để đồng nhất. Rửa bằng nước cất và để khô. Quan sát dưới kính hiển vi.

Các loại vết bẩn bị lỗi

Nó xảy ra ở những người tập kỹ thuật thả tốt với slide.

Vôi với các khu vực có độ dày khác nhau (mỏng và dày xen kẽ)

Đó là do chuyển động được thực hiện không liên tục trong suốt quá trình spread, khiến cho việc dừng và khởi động lại.

Vết bẩn rất ngắn

Chúng có 2 nguyên nhân: một là do máng trượt mặt đất đã được nâng lên trước khi đến đầu kia của đường trượt. Trong trường hợp này, nó cực kỳ dày và ngắn.

Mặt khác, nếu vết bẩn ngắn nhưng mỏng, đó là do kích thước của giọt rất nhỏ.

Bôi trơn với một khu vực được cào về cuối vết bẩn

Nó có một số nguyên nhân: một là mép tiếp đất bị lỗi, áp lực tác dụng lên tấm tiếp nhận tăng lên tại thời điểm lan truyền hoặc mép đất của tấm trượt bị mòn.

Bôi trơn với sự hình thành không bào hoặc các khu vực hình elip hoặc tròn rõ ràng

Đó là do sử dụng các chất bôi trơn nhờn (rửa và tẩy dầu kém).

Vết bẩn rất dày hoặc rất mỏng

Những giọt quá lớn sẽ tạo ra vết bẩn rất dày từ đầu đến cuối và những giọt rất nhỏ sẽ tạo ra vết bẩn rất mịn.

Mô học

Tế bào máu có thể được nhìn thấy trong phết máu. Trong số đó có:

-Erythrocytes hoặc hồng cầu

Máu người, hồng cầu hoặc hồng cầu và hai bạch cầu. Lấy và chỉnh sửa từ: Viascos. Sự quan sát của bạn là vô cùng quan trọng. Ở mức độ này, có thể phát hiện được các bệnh thiếu máu não, bệnh thalassemia, bệnh tủy xương,….

Số lượng hồng cầu hoặc hồng cầu xấp xỉ 5 x 10 ⁶ mm3 ở nam và 4,5 x 10 ⁶ ở nữ. Các tế bào hồng cầu có hình dạng giống như đĩa hai lõm, với tâm sinh lý xanh xao. Chúng có thể được nhìn thấy riêng biệt (bình thường) hoặc tạo thành các ngăn xếp rouleaux (bất thường).

Smears cũng cho thấy chứng mất bạch cầu (các tế bào hồng cầu có nhiều hình dạng khác nhau), mất tế bào (các tế bào hồng cầu có kích thước khác nhau), anisopoikilocytosis (nhiều hình dạng và kích thước), dị sắc tố (các màu khác nhau), nguyên bào hồng cầu (các tế bào hồng cầu chưa trưởng thành), microcytosis (các tế bào hồng cầu nhỏ hơn) ) và tế bào vĩ mô (hồng cầu lớn hơn).

Khi họ bị thiếu hụt lượng hemoglobin và trung tâm xanh xao tăng lên, người ta nói rằng có chứng giảm sắc tố. Khi quan sát thấy một chuỗi màu đỏ bình thường, nó sẽ được báo cáo là không tế bào và không sắc tố.

- Tế bào máu trắng hoặc bạch cầu

Tế bào bạch cầu

Lượng thông thường nằm trong khoảng từ 5.000 đến 10.000 mm ³ . Chúng bị thay đổi trong quá trình lây nhiễm, dị ứng và bệnh bạch cầu. Một số loại có thể được phân biệt trong phết máu, được giải thích dưới đây.

Bạch cầu trung tính phân đoạn

Chúng đại diện cho 55-65% tổng số bạch cầu. Chúng đo trong khoảng 10-15 μm. Chúng có một nhân phân đoạn hoặc phân thùy có các hình thái khác nhau, do đó nó được gọi là đa nhân.

Chúng có nhiều hạt bạch cầu trung tính trong tế bào chất và một số azurophil. Chúng tăng trong các bệnh nhiễm trùng do vi khuẩn (bạch cầu trung tính), giảm trong các bệnh nhiễm trùng do virus (giảm bạch cầu trung tính).

Có thể quan sát thấy các bất thường về hình thái như tăng bạch cầu đa nhân (nhân tăng phân đoạn), hình cung (tế bào chưa trưởng thành) hoặc cực lớn (hình bầu dục và lớn).

Các thay đổi khác:

-Các hạt độc hại

- Bạch cầu đa nhân trung tính Pseudo Pelger (nhân không xuất hiện các lỗ hổng hoặc chúng có hai lớp).

-Các cơ quan của thể: thể vùi tế bào chất màu xanh đậm.

-Tăng basophilia tế bào chất.

-Không bào sống trong tế bào chất.

-Phim tế bào (mất cầu liên nhân).

Bạch cầu ái toan phân đoạn

Chúng đại diện cho 1-3% tổng số bạch cầu. Chúng đo được 9-10 μm. Chúng được đặc trưng bởi sự hiện diện của nhiều hạt tế bào chất ưa axit và một ít azurophile. Hạt nhân của nó có hai lỗ hổng. Số lượng của chúng tăng lên trong các bệnh dị ứng và bệnh có nguồn gốc ký sinh trùng.

Basophils phân đoạn

Chúng cực kỳ hiếm, chiếm 0-1% bạch cầu. Chúng có kích thước 10-12μm. Nhân thường có đường viền không đều và có thể có hai lớp, nhưng nó không được nhìn thấy do số lượng lớn các hạt ưa bazơ thô trong tế bào chất của nó. Rất hiếm khi có thể thấy bệnh basophilia.

Tế bào bạch huyết

Chúng là những tế bào nhỏ với tế bào chất ưa bazơ, có nhân, hình tròn, xác định rõ, với chất nhiễm sắc đặc. Nhân bao gồm gần như toàn bộ tế bào. Chúng đại diện cho 26-40% bạch cầu trong máu. Chúng gia tăng trong các bệnh nhiễm trùng do virus (lymphocytosis). Có thể nhìn thấy các tế bào lympho phản ứng.

Bạch cầu đơn nhân

Tế bào lớn hơn tế bào lympho, với tế bào chất lớn hơn và nhân nhiễm sắc hình bầu dục lỏng lẻo hơn. Chúng có kích thước 9-12μm. Tế bào chất nhiều và thường có màu xanh xám nhạt với kỹ thuật nhuộm tiêu chuẩn. Có thể quan sát thấy bạch cầu đơn nhân không được tiêm phòng và bạch cầu đơn nhân trong số những thay đổi.

-Tiểu cầu

Chúng đo trong khoảng 1,5-3 μm. Hình dạng của nó là hình tròn hoặc hình bầu dục. Giá trị bình thường từ 150.000 đến 350.000 tiểu cầu / mm3. Chúng có thể giảm trong một số bệnh nhiễm vi-rút. Chúng không có nhân và có màu tím. Các bất thường có thể gặp trong loạt bài này, chẳng hạn như tiểu cầu vĩ mô hoặc vi mô, tăng tiểu cầu hoặc giảm tiểu cầu và các mảnh tiểu cầu.

Yếu tố bệnh lý

Ký sinh trùng máu

Hemoparasites, chẳng hạn như tác nhân gây bệnh sốt rét hoặc sốt rét (ký sinh trùng thuộc giống Plasmodium), có thể được nhìn thấy trong lam máu. Vì lý do này, điều quan trọng là vết bẩn phải được phân tích thủ công, vì thiết bị tự động bỏ sót phát hiện này.

Vi khuẩn

Trong các bệnh lý như sốt tái phát hoặc bệnh Lyme, tác nhân gây bệnh của nó có thể được quan sát thấy. Trong trường hợp này, nó tương ứng với xoắn khuẩn Borrelia recurrenti và Borrelia burgdorferi trong lam máu.

Tế bào chưa trưởng thành

Các trường hợp nghiêm trọng được quan sát thấy trong bệnh bạch cầu, phản ứng bạch cầu và phản ứng bạch cầu, trong số những trường hợp khác. Trong trường hợp nhiễm trùng do vi khuẩn có thể có những sai lệch nhỏ về bên trái (sự hiện diện của kẻ gian). Erythroblasts cũng có thể được nhìn thấy trong một số bệnh thiếu máu não.

Người giới thiệu

1. Máu và mô tạo máu. Có tại: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Thiên thần. Phiên dịch phòng thí nghiệm lâm sàng. Phiên bản thứ 8. Biên tập Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Tài khoản A. So sánh mật độ ký sinh trong giọt máu tĩnh mạch dày so với bấm huyệt trong chẩn đoán Sốt rét vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Có tại: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Tầm quan trọng của việc nghiên cứu phết máu ngoại vi ở người cao tuổi. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Có tại: scielo.sld
5. Grinspan S. Nghiên cứu về lam máu ngoại vi. Tiếp tục giáo dục y tế. Có tại: bvs.hn/RMH