CÓ THỂ VẾT BẨN GRÜNWALD-GIEMSA: LÝ DO, KỸ THUẬT VÀ SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các tháng Grünwald-Giemsa hoặc Pappenheim vết là một kỹ thuật nhuộm màu khác biệt mà hỗn hợp Giemsa và tháng Grünwald thuốc thử. Nó được sử dụng để phân biệt các tế bào máu bình thường và bất thường trong máu ngoại vi và tế bào tủy xương, cũng như để nhuộm các phần mô học và mẫu tế bào học.

Cả hai thuốc thử -Giemsa và May Grünwald- đều có nguồn gốc từ phương pháp nhuộm kiểu Romanowsky, một kỹ thuật dựa trên sự kết hợp của thuốc nhuộm axit và bazơ.

Chất bôi trơn cho thấy một bạch cầu trung tính được phân đoạn và một tế bào dặm trong một trường hợp Bệnh bạch cầu dòng tủy mãn tính, được nhuộm bằng vết May Grünwald Giemsa. Tiến sĩ Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) thông qua Wikipedia.org.

Giemsa đã cải tiến kỹ thuật bằng cách ổn định hỗn hợp eosin, xanh methylen và các dẫn xuất của chúng, với glycerol. Thay vào đó, May Grünwald sử dụng eosin và xanh methylen, sử dụng metanol làm dung môi. Sự kết hợp chiến lược này đã mang lại kết quả xuất sắc.

Mặc dù về mặt quan sát hình thái tế bào, nó hoạt động theo cách tương tự như nhuộm Giemsa và Wright, nhưng kỹ thuật này cải thiện những kỹ thuật trước đó bằng cách tinh chỉnh khả năng nhuộm của ký sinh trùng gây ra bệnh sốt rét, bệnh Chagas, bệnh leishmaniasis và bệnh trichomonas.

Ngoài ra, nó đã được chứng minh là một kỹ thuật rất hữu ích cho nghiên cứu tế bào học của dịch tinh trùng. Nó đã nổi bật không chỉ nhờ thể hiện đặc điểm hình thái của tinh trùng mà còn cho phép nó biệt hóa bạch cầu, tế bào biểu mô và tế bào sinh tinh với hiệu quả cao.

Nền tảng

Kỹ thuật này dựa trên nền tảng của vết bẩn Romanowsky, trong đó thuốc nhuộm có tính axit có ái lực chọn lọc với các thành phần tế bào cơ bản và các thành phần có tính axit thu hút các vết bẩn cơ bản.

Giải thích theo một cách khác, cả cấu trúc tế bào và thuốc nhuộm đều có điện tích dương hoặc âm; như điện tích đẩy và các điện tích khác nhau thu hút.

Ví dụ, thuốc nhuộm cơ bản như xanh methylen mang điện tích dương và bị hút vào các cấu trúc tích điện âm. Đó là lý do tại sao thuốc nhuộm này nhuộm các hạt nhân giàu DNA và RNA có các nhóm phosphate tích điện âm.

Các hạt của basophils được phân đoạn và tế bào của tế bào bạch cầu đơn nhân chứa RNA cũng bị nhuộm màu.

Tương tự, thuốc nhuộm axit mang điện tích âm, đó là lý do tại sao nó liên kết với các cấu trúc tích điện dương như hồng cầu và các hạt của bạch cầu ái toan phân đoạn. Đối với các hạt của bạch cầu trung tính phân đoạn, chúng cố định cả thuốc nhuộm.

Nhiều loại chất tạo màu

Trong kỹ thuật này, sự kết hợp của các phản ứng giữa thuốc nhuộm chỉnh màu và metachromatic cùng tồn tại. Chất chỉnh màu (eosin và xanh methylen) liên kết với cấu trúc tế bào mà chúng có liên quan và tạo ra màu sắc ổn định không thay đổi.

Mặt khác, metachromat (các dẫn xuất của metylen xanh azure A và azure B), thay đổi màu ban đầu của chúng khi chúng được gắn vào cấu trúc cụ thể và thậm chí có thể có nhiều sắc thái khác nhau.

Cuối cùng, bước mà dung dịch May Grünwald thực hiện yêu cầu sự có mặt của nước, vì nếu không có nước, thuốc nhuộm sẽ thấm vào các cấu trúc nhưng sẽ không cố định. Để điều này xảy ra, thuốc nhuộm phải trở nên phân cực hoặc ion hóa, và do đó có thể kết tủa và liên kết với các cấu trúc liên quan.

Kỹ thuật

nguyên vật liệu

- Các slide trình chiếu.

- Cầu màu.

- Giải pháp May-Grünwald.

- Vết giemsa.

- Nước cất.

Có thể dung dịch đậm đặc thuốc nhuộm Grünwald

0,25 g eosin-metylen xanh (vết theo May Grünwald) phải được cân và hòa tan trong 100 ml metanol. Sau đó, chế phẩm được trộn trong 1 giờ và để yên trong 24 giờ. Vào cuối thời gian, nó được lọc.

Để áp dụng kỹ thuật, thuốc nhuộm May Grünwald phải được pha loãng như sau: đối với 200 ml thuốc nhuộm pha loãng, định mức 30 ml dung dịch đậm đặc, thêm 20 ml dung dịch đệm và 150 ml nước cất được điều chỉnh đến pH7,2-7,3 . Sau đó nó được trộn và lọc.

Cô đặc vết giemsa

Phải cân 0,5 g azure-eosin-metylen xanh (vết theo Giemsa), hòa tan trong 50 ml metanol và 50 ml glyxerin vào hỗn hợp.

Để thực hiện kỹ thuật, pha loãng 1:10 với dung dịch đệm và để yên trong 10 phút. Nó có thể được lọc nếu cần thiết.

Chuẩn bị dung dịch đệm ở pH 7,2

Chúng nên được cân:

- 40 mg kali di-hydro photphat (KH2PO4).

- 151 mg di-natri hydro photphat 12-hydrat (Na2HPO4).

Cả hai hợp chất được hòa tan trong 100 ml nước.

Quy trình nhuộm phết máu hoặc tủy xương

Có hai chế độ: cổ điển và nhanh.

Chế độ cổ điển

1. Che vết bẩn trong 2 đến 3 phút bằng dung dịch May-Grünwald đã pha loãng.
2. Rửa bằng nước cất có đệm để loại bỏ dung dịch trước đó.
3. Đậy bằng cùng một dung dịch rửa đệm và để trong 1 phút. Ý tưởng là thuốc nhuộm trước đó được cố định vào các cấu trúc và đồng thời, các tế bào được ngậm nước.
4. Thêm 12 giọt cồn Giemsa đã pha loãng vào nước đệm và thổi để trộn và đồng nhất. Để nó nghỉ trong 15 đến 20 phút.
5. Rửa vết bẩn bằng nước cất có đệm và để khô trong không khí.
6. Lấy nét và xem các tế bào máu đã nhuộm dưới kính hiển vi ánh sáng bằng vật kính 40X. Nếu cần, 100X có thể được sử dụng.

Chế độ nhanh

1. Che vết bẩn bằng vết May Grünwald đã pha loãng trong 1 phút.
2. Rửa bằng nước cất có đệm.
3. Đậy với nước đệm và để nó nghỉ trong 1 phút.
4. Thêm vết Giemsa đã pha loãng và để trong 5 phút.
5. Rửa bằng nước cất có đệm và để khô trong không khí.

Các kỹ thuật được mô tả ở đây là một hướng dẫn, nhưng cần lưu ý rằng quy trình và thời gian nhuộm khác nhau tùy theo công ty thương mại phân phối thuốc thử. Khuyến khích thực hiện theo đúng các bước được chỉ định bởi từng nhà thương mại.

Kỹ thuật tạo màu cho vết bẩn của dịch tinh trùng

1- Phủ một lớp mỏng dung dịch May Grünwald lên vết bẩn trong 4 phút.

2- Loại bỏ chất màu và rửa bằng nước cất.

3- Cho một lớp Giemsa đã pha loãng (1:10) vào nước cất trong 15 phút.

4- Loại bỏ thuốc nhuộm và rửa bằng nước cất.

5- Để khô và quan sát dưới kính hiển vi.

Màu sắc mong đợi với vết May Grünwald Giemsa

Thông số kỹ thuật quan trọng

Kỹ thuật này yêu cầu thuốc thử và dung dịch rửa có độ pH được điều chỉnh đến 7,2-7,3 để các liên kết của thuốc nhuộm đối với cấu trúc tế bào không bị biến dạng và màu sắc cuối cùng mong đợi không thay đổi.

Các ứng dụng

Kỹ thuật này được sử dụng bởi các phòng thí nghiệm lâm sàng để nhuộm máu ngoại vi và phết tế bào tủy xương, các phần mô và tế bào học.

Trong lĩnh vực huyết học, kỹ thuật này có tầm quan trọng sống còn trong việc nghiên cứu các bất thường của tế bào về hình dạng, kích thước và số lượng. Nó là một công cụ rất có giá trị để chẩn đoán một số bệnh, chẳng hạn như bệnh bạch cầu và bệnh thiếu máu cục bộ.

Ngoài ra, nó còn có công dụng nổi bật khi tìm ký sinh trùng ở các khu vực huyết học (Plasmodium sp và Trypanosoma cruzi) hoặc mô học (Leishmanias sp).

Tế bào học âm đạo

Về tế bào học âm đạo, kỹ thuật này đặc biệt thuận lợi trong việc quan sát Trichomonas vaginalis. Đây là một phát hiện quan trọng, vì sự hiện diện của nó mô phỏng hình ảnh ung thư biểu mô tại chỗ mà sau này biến mất khi loại bỏ ký sinh trùng.

Mẫu tinh trùng

Nó là một công cụ lý tưởng để nghiên cứu các mẫu tinh trùng, vì nó cung cấp thông tin có giá trị về chất lượng của tinh trùng.

Dữ liệu mà nó cung cấp chủ yếu liên quan đến số lượng và hình thái, cũng như các tế bào đồng thời có thể có và có tầm quan trọng sống còn, chẳng hạn như tế bào mầm, bạch cầu và tế bào biểu mô.

Với phân tích này, có thể mô tả những bất thường quan sát được ở tinh trùng ở đầu, cổ, mảnh giữa và mảnh chính.

Ngoài ra, chúng cũng có thể giúp chỉ ra các trường hợp tăng huyết áp (sự hiện diện của các tế bào hồng cầu trong tinh dịch) và bệnh bạch cầu hoặc piospermia (tăng số lượng bạch cầu trong tinh dịch).

Người giới thiệu

1. Costamagna S, Prado M. Xác thực xét nghiệm mới, có thể nhuộm Grünwald-Giemsa và Gram và môi trường nuôi cấy để chẩn đoán Trichomonas vaginalis. Parasitol. Năm 2001; 25 (1-2): 60-64. Có sẵn trong: scielo.
2. Phòng thí nghiệm Merck KGaA. May Grünwald eosin xanh methylen để soi kính hiển vi.
3. "Vết May-Grünwald-Giemsa." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 15 tháng 11 năm 2018, 14:37 giờ UTC. 8 tháng 1 năm 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Phòng thí nghiệm Panreac Hóa chất Thủy tinh. Thuốc thử kỹ thuật mô học, huyết học và vi sinh. Có sẵn tại: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Khuyến nghị nhuộm lam máu để đọc huyết đồ. Phòng thí nghiệm Y sinh Quốc gia và Tham khảo. Viện Y tế Công cộng Chile.
6. Sarabia L. Spermiogram theo tiêu chuẩn của WHO. Chương trình Giải phẫu và Sinh học Phát triển. Trường Y. Đại học Chile. Có tại: pp.centramerica.com