VẾT BẨN CỦA WRIGHT: CƠ SỞ, VẬT LIỆU, KỸ THUẬT VÀ CÁCH SỬ DỤNG - SINH HỌC - 2026

Các Wright vết là một kỹ thuật nhuộm màu được tạo ra bởi các nghiên cứu bệnh học người Mỹ James Homer Wright vào năm 1902, dựa trên các vết bẩn Romanowsky. Vì vết Romanowsky không ổn định, Wright đã kết hợp metanol làm dung môi và chất cố định.

Màu này là màu đa sắc, có nghĩa là nó tạo ra một số màu tùy thuộc vào cấu trúc hấp thụ thuốc nhuộm. Kỹ thuật nhuộm này đã được sử dụng rộng rãi để thực hiện số lượng bạch cầu phân biệt và nghiên cứu hình thái của các tế bào hồng cầu, tiểu cầu và bạch cầu trong máu ngoại vi và tủy xương.

Nhiều vết máu ngoại vi khác nhau được nhuộm bằng vết của Wright. A. Bệnh bạch cầu cấp B. Plasmodium vivax trong hồng cầu. C. Plasmodium falciparum, đại bào tử. D. Lympho

Ứng dụng của nó là rất quan trọng, vì các bất thường có thể được nhìn thấy trong các dòng tế bào khác nhau của máu, tạo điều kiện thuận lợi cho việc chẩn đoán các bệnh như bệnh bạch cầu hoặc nhiễm trùng do vi khuẩn hoặc ký sinh trùng.

Có lẽ đây là những ứng dụng phổ biến nhất mà kỹ thuật này được sử dụng, tuy nhiên chúng không phải là những ứng dụng duy nhất. Nó cũng hữu ích trong các mẫu khác ngoài máu và tủy xương, chẳng hạn như nước mũi, chất nhầy trong phân, đờm, mẫu da, v.v.

Cơ sở lý do cho vết bẩn của Wright

Vết bẩn của Wright được tạo ra từ vết của Romanowsky, bao gồm dung dịch rượu metylic của thuốc nhuộm có tính axit (eosin Y) và thuốc nhuộm cơ bản (xanh metylen) và các sản phẩm oxy hóa của chúng.

Hỗn hợp thuốc nhuộm được sử dụng trong vết bẩn của Wright gây ra hiệu ứng được gọi là Romanowsky, tức là nó tạo ra màu tím tuyệt đẹp cho nhân của bạch cầu và hạt bạch cầu trung tính, trong khi các tế bào hồng cầu nhuộm màu hồng.

Các thành phần chịu trách nhiệm tạo ra gam màu điển hình của màu nhuộm Wright là xanh lam B và eosin Y. Hiệu ứng quan sát được sẽ phụ thuộc vào liên kết của thuốc nhuộm với cấu trúc hóa học và tương tác của màu xanh lam B và eosin Y.

Các cấu trúc có tính axit như axit nucleic, protein nhân và tế bào chất chưa trưởng thành có phản ứng của một số loại tế bào, cố định màu xanh lam B (vết cơ bản).

Trong khi các cấu trúc cơ bản như hemoglobin, các hạt của bạch cầu ái toan phân đoạn, trong số các cấu trúc tế bào khác, liên kết eosin Y (thuốc nhuộm axit).

Kết quả nhuộm có thể bị ảnh hưởng bởi các yếu tố khác nhau, chẳng hạn như độ pH của thuốc nhuộm Wright, dung dịch đệm và dung dịch rửa; cũng như thời gian nhuộm và cố định.

Vì vậy, mỗi bước chuẩn bị thuốc thử là rất quan trọng và phải được thực hiện cẩn thận đến từng chi tiết.

nguyên vật liệu

Vết bẩn của Wright. Đối với 100 mL, nó được yêu cầu:

Cân 0,3 g vết Wright, thu được 97 ml metanol và 3 ml glixerol.

Sự chuẩn bị

Trong cối, cho một lượng lớn chất tạo màu của Wright và dần dần kết hợp glycerol cho đến khi bột được hòa tan hoàn toàn.

Sau đó, metanol được thêm vào, trộn đều và rót vào một chai màu hổ phách.

Trước khi sử dụng, dung dịch nên được lắc với các chuyển động nhẹ nhàng và lọc.

Dung dịch đệm đệm

Trong một lít nước cất, 3,76 g dinatri hydrophosphat (Na ₂ HPO ₄ 2H ₂ 0) cộng với 2,1 g dihydro kali photphat (KH ₂ PO ₄ ) được thêm vào.

Trộn rất kỹ cho đến khi tất cả các thuốc thử kết hợp được hòa tan. Điều chỉnh pH đến 7,2. Đổ vào lọ thủy tinh và giữ ở nhiệt độ phòng.

Vật liệu bổ sung cần thiết để thực hiện màu

Ngoài ra, các vật liệu khác được yêu cầu để có thể thực hiện kỹ thuật tạo màu, đó là: các tấm hoặc bìa vật thể, cầu tô màu, áo thun có nước hoặc đệm để giặt, đồng hồ bấm giờ để giữ thời gian tô màu và một số vật liệu làm khô (giấy thấm, gạc hoặc bông).

Các thành phần của vết bẩn Wright

Metanol

Rượu (metanol) đóng vai trò là chất cố định vết máu trên phiến kính.

Về cơ bản nó là một thuốc thử giảm đông tụ, khử nước và cố định. Do đó, chức năng của nó là làm đông tụ protein và làm cho chúng không hòa tan, nhưng không thực sự làm biến tính chúng.

Metanol là thuốc thử cố định vết bẩn được sử dụng rộng rãi nhất trong tất cả các phòng thí nghiệm, vì nó cho kết quả tốt hơn etanol. Nồng độ lý tưởng là 99%.

Bộ giảm chấn

Dung dịch đệm (dung dịch đệm) có chức năng điều chỉnh hoặc duy trì độ pH của thuốc nhuộm, vì độ pH được điều chỉnh đến 7,2 là điều cần thiết để cấu trúc tế bào có thể hấp thụ thuốc nhuộm đúng cách.

Mặt khác, bước cố định methanol làm mất nước của tế bào và chất đệm giúp bù nước cho chúng.

Eosin (Y)

Eosin có ái lực với các khối xây dựng vì nó là thuốc nhuộm axit. Hai loại eosin được biết là rất giống nhau, đến nỗi có thể sử dụng một trong hai loại eosin, thu được cùng một kết quả.

Một loại được gọi là eosin Y, eosin vàng, hoặc tetrabromofluorescein, và loại còn lại được gọi là eosin B, erythrosin B, hoặc dibromodinitrofluorescein. Tuy nhiên, eosin Y được sử dụng phổ biến nhất.

Đặc tính quan trọng nhất của loại thuốc nhuộm này là tính phân cực âm, điều này khiến nó bị thu hút bởi các cấu trúc tế bào tích điện dương.

Xanh metylen

Nó là màu cơ bản. Thuộc tính chính của nó là metachromasia, tức là không phải tất cả các cấu trúc sẽ được nhuộm cùng một màu, nó phụ thuộc vào thành phần hóa học của các cấu trúc được nhuộm màu.

Một số sẽ chuyển sang màu xanh nhạt hoặc xanh đậm, và một số sẽ chuyển sang màu tím sẫm hoặc màu hoa cà nhạt.

Kỹ thuật

1-Thực hiện việc trải mẫu sao cho vẫn còn một màng mỏng, trên phiến kính hoặc tờ bìa.

2-Để khô trong không khí khoảng 2 giờ.

3-Đặt vết bẩn khô lên cầu nhuộm hoặc khay nhuộm với dàn mẫu hướng lên trên.

4-Phủ lên tấm giấy với vết Wright từng giọt một cho đến khi phủ kín toàn bộ bề mặt. Để trong 5 - 8 phút.

5-Vết bẩn phải bao phủ hoàn toàn trang trình bày, không tràn ra các cạnh. Nếu trong thời gian màu nó bắt đầu bay hơi, hãy thêm một vài giọt bổ sung.

6-Sau đó cho một lượng xóc đều vào, thổi một ít cho đến khi xuất hiện ánh kim loại đặc trưng. Thời gian 10 đến 15 phút.

7-Rửa bằng vòi nước, đặt dòng chảy nhẹ cho đến khi tấm giấy có màu hồng.

8-Với một miếng gạc ngâm trong rượu, loại bỏ thuốc nhuộm dính ở mặt sau của phiến kính.

9-Để vết phết thật khô trước khi cho dầu ngâm vào để soi dưới kính hiển vi.

Tiện ích

Huyết học

Nó lý tưởng cho việc nhuộm các vết máu ngoại vi, để kiểm tra các vết máu dày và để nghiên cứu các tế bào từ các mẫu tủy xương.

Do tính chất hóa học của sự kết hợp thuốc nhuộm này, các cấu trúc tế bào có thể dễ dàng được nhận ra và có thể phân biệt được các loại tế bào khác nhau.

Sổ mũi

Kỹ thuật này rất hữu ích để xác định các tế bào của dịch mũi (tế bào biểu mô, bạch cầu ái toan phân đoạn, tế bào đa nhân trung tính) trong chẩn đoán viêm mũi dị ứng.

ký sinh trùng

Theo nghĩa này, nó rất hữu ích cho việc nghiên cứu Leishmania sp trong các mô bào của mô tế bào dưới da trong bệnh loét da. Tương tự như vậy, nó được sử dụng để xác định bạch cầu trong mẫu phân (bạch cầu trong phân).

Trong trường hợp này, người thầy thuốc cần quan tâm đến việc biết bạch cầu có trong phân là bạch cầu đa nhân hay đơn nhân. Phát hiện này trong bạch cầu phân sẽ cho biết đó là nhiễm trùng do vi khuẩn hay vi rút.

Mặt khác, ký sinh trùng lưu hành trong máu có thể được tìm thấy trong hồng cầu hoặc tự do trong huyết tương. Các ký sinh trùng được tìm kiếm là Plasmodium spp, Trypanosoma cruzii và filariae, và trong y học thú y, nó rất hữu ích trong việc tìm kiếm Theileria equi và Babesia caballi, tác nhân gây bệnh bebesiosis, đặc biệt ở ngựa.

Vết Wright và cũng như vết Giemsa giúp phân biệt các vi khuẩn haemoparasite với các thành phần tế bào bình thường. Hai loại spread có thể được sử dụng cho việc này:

Trải mỏng

Máu được trải ra như một lớp màng mỏng trên phiến kính. Nó được nhuộm bằng vết Wright, để lộ các đặc điểm của nhân và tế bào chất.

Thả dày

Phương pháp này được sử dụng để điều tra sự hiện diện của ký sinh trùng trong một số lượng lớn hơn của máu.

Để làm điều này, một giọt máu lớn được đặt trên một tấm trượt. Khi đó, nó phải được khử rung tim, tạo ra các vòng tròn lớn hơn và lớn hơn từ tâm ra ngoài, sử dụng cạnh của một trang trình bày khác.

Cuối cùng, để có thể quan sát được ký sinh trùng trong vết bẩn dày, hồng cầu phải được ly giải bằng nước.

Nhiễm trùng đường hô hấp

Ở cấp độ hô hấp, kỹ thuật này cũng hữu ích, vì các tế bào hiện diện trong các mẫu đờm, dịch rửa phế quản hoặc phế quản phế quản, rất quan trọng để thiết lập chẩn đoán.

Tương tự, có thể phân biệt tế bào đa nhân trung tính và tế bào đơn nhân ở đây.

Vi khuẩn học

Việc sử dụng kỹ thuật này trong vi khuẩn học bị hạn chế, vì nó không tốt cho việc nhuộm vi khuẩn, đó là lý do tại sao các kỹ thuật nhuộm chuyên dụng khác được sử dụng để nhuộm chúng.

Tuy nhiên, nó đã được sử dụng để tìm kiếm các tế bào biểu mô có các thể chứa Chlamydia trachomatis trong phết tế bào niêm mạc niệu đạo hoặc nội mạc cổ tử cung, mặc dù phải công nhận rằng nó không phải là phương pháp tốt nhất cho việc này.

Cũng có thể quan sát thấy các vi khuẩn dạng xoắn ốc như Borrelia burgdorferi trong các tế bào hồng cầu ở những bệnh nhân bị nhiễm bệnh, cũng như các thể phôi dâu hoặc bao thể của Ehrlichia sp trong tế bào chất của tế bào lympho, bạch cầu đơn nhân hoặc bạch cầu trung tính trong lam máu.

Thần học

Histoplasma capsulatum là một loại nấm gây bệnh thường được chẩn đoán bằng cách quan sát bằng kính hiển vi các mẫu mô khác nhau, được nhuộm bằng vết của Wright.

Cấu trúc của mẫu máu được quan sát như thế nào với vết bẩn của Wright?

Nguồn: Retamales E, Mazo V. Institute of Public Health, Chính phủ Chile. Các khuyến nghị về nhuộm lam máu để đọc huyết đồ.

Khuyến nghị để nhuộm tốt

Các lam mẫu máu sẽ tự khô trong không khí. Smears phải càng mỏng càng tốt để thuốc nhuộm được cố định tốt hơn và tránh nhuộm quá nhiều.

Đối với màu nhuộm chất lượng cao, bạn nên nhuộm trong vòng hai giờ sau khi chuẩn bị vết bẩn. Mặt khác, mẫu lý tưởng là máu mao mạch, không có chất chống đông.

Tuy nhiên, nếu dùng máu tĩnh mạch thì nên dùng EDTA chống đông máu chứ không phải heparin, vì sau này có thể làm biến dạng cấu trúc tế bào.

Để tránh làm biến chất màu đã pha chế, nên bảo quản ở những nơi khô ráo.

Trong quá trình giặt, nên sử dụng nước được điều chỉnh đến độ pH trung tính.

Cuối cùng, nên thử nghiệm các phương pháp nhuộm màu được sử dụng trong phòng thí nghiệm theo thời gian.

Điều này được thực hiện bằng cách nhuộm các mẫu hoặc các mẫu mở rộng, như một biện pháp kiểm soát chất lượng. Bước này rất quan trọng, vì nó đảm bảo rằng màu nhuộm được chuẩn bị đúng cách và thời gian nhuộm được chuẩn hóa tốt.

Nếu tấm hoa văn có màu sắc kém, thì có vấn đề phải được giải quyết.

Những lỗi thường gặp khi nhuộm Wright

Màu rất nhạt

Các vết bẩn rất nhạt thường do thời gian nhuộm rất ngắn hoặc do rửa quá nhiều. Nó được khắc phục bằng cách kéo dài thời gian tiếp xúc với thuốc nhuộm hoặc giảm thời gian giặt.

Chất tạo màu kết tủa

Sự hiện diện của kết tủa thuốc nhuộm trong vết bẩn có thể do một số nguyên nhân, tuy nhiên, những nguyên nhân thường gặp nhất là: sử dụng thuốc nhuộm chưa lọc, nhuộm trên các cầu nhuộm không đồng đều, sử dụng khăn trải giường bị bẩn với bụi hoặc dầu mỡ, giặt không kỹ. nhuộm hoàn toàn.

Rất nhiều vết bẩn màu đỏ hoặc xanh

Chất đệm chịu trách nhiệm về độ pH của thuốc nhuộm. Thuốc nhuộm có độ pH dưới mức chỉ định (có tính axit) sẽ tạo ra vết bẩn rất đỏ.

Nếu độ pH của thuốc nhuộm cao hơn (kiềm) thì sẽ thu được vết bẩn hơi xanh.

Chế độ lưu trữ

Thuốc thử nên được bảo quản ở nhiệt độ phòng.

Người giới thiệu

1. Gutiérrez V. Nghiên cứu so sánh giữa phương pháp nhuộm Wright và xét nghiệm Elisa để chẩn đoán bệnh Ehrlichiosis ở chó ở thành phố San Pedro Sula, Honduras. 2008. Bằng Luận văn để đủ điều kiện cho Bằng cấp Thú y. Đại học San Carlos của Guatemala.
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas F. Vết bẩn cơ bản trong phòng thí nghiệm vi sinh. Nghiên cứu về người khuyết tật. 2014; 3 (1): 10-18.
3. "Vết bẩn của Wright." Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 18 tháng 5 năm 2018, 12:05 giờ UTC. Ngày 8 tháng 12 năm 2018, 20:37
4. Calderón A, Cardona J, Vergara Ó. Tần suất của Babesia spp. ở ngựa săn, Córdoba (Colombia). Rev. udcaactual divulg cient. Năm 2013; 16 (2): 451-458.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA
6. Retamales E, Mazo V. Viện Y tế Công cộng của Chính phủ Chile. Các khuyến nghị về nhuộm lam máu để đọc huyết đồ.