NHUỘM ÂM TÍNH: CƠ SỞ LÝ LUẬN, KỸ THUẬT, ƯU NHƯỢC ĐIỂM - SINH HỌC - 2025

Các nhuộm âm là một phương pháp đặc biệt màu để làm nổi bật sự hiện diện của viên nang trong một số vi sinh vật , chủ yếu là Streptococcus pneumoniae, Klebsiella pneumoniae và Cryptococcus neoformans-, từ mẫu lâm sàng hoặc các nền văn hóa thuần túy.

Mẫu trực tiếp thường được dùng để nhuộm âm tính là dịch não tủy. Kỹ thuật này đại diện cho một giải pháp thay thế nhanh chóng cho việc chẩn đoán giả định viêm màng não, đặc biệt là Cryptococcus neoformans.

A. Cao răng được nhuộm bằng mực Ấn Độ, B. Cryptococcus neoformans var gatti được bao bọc yếu như nó xuất hiện trong tự nhiên, sử dụng nigrosin. C. Cryptococcus neoformans var gatti có vỏ dày như được tìm thấy ở dạng ký sinh, sử dụng nigrosin. D. Cryptococcus neoformans với mực India hơi loãng. Gisell Quinde, từ Wikimedia Commons / CDC, qua Wikimedia Commons / Nguồn ảnh: (Các) nhà cung cấp nội dung: CDC / Dr. Leanor Haley, qua Wikimedia Commons

Tương tự, vết này có thể được áp dụng trên đờm và chất lỏng vô trùng nói chung, cũng như trên các chủng thu được từ các mẫu cấy tinh khiết non. Kỹ thuật này sử dụng mực nigrosine hoặc India để thực hiện; do đó, nó là một phương pháp rất đơn giản và rẻ tiền để áp dụng cung cấp thông tin có giá trị chẩn đoán lớn trong một thời gian ngắn.

Theo nghĩa này, bất kỳ phòng thí nghiệm nào cũng có khả năng thực hiện việc nhuộm màu này. Tất nhiên, phòng thí nghiệm phải có nhân viên có thẩm quyền có khả năng nhận biết nấm men Cryptococcus neoformans đã phân lập hoặc đang chớm nở và phân biệt chúng với bạch cầu và các hiện vật mà mẫu có thể có.

Nền tảng

Mực Nigrosine và Ấn Độ hoạt động theo cách tương tự; do đó, một trong hai chất có thể được sử dụng thay thế cho nhau.

Kỹ thuật này được gọi là nhuộm tiêu cực vì nó hoạt động ngược lại với các kỹ thuật nhuộm còn lại. Trong điều này, những gì còn sót lại là cấu trúc đang được tìm kiếm hoặc người ta muốn thấy; tức là vi sinh vật.

Do đó, việc nhuộm màu dựa trên việc nhuộm một màu tối ở đáy vết bẩn. Trong trường hợp này, các cấu trúc bị lật ngược sẽ nổi bật với màu sáng hoặc không màu.

Nhìn chung, nấm men có dạng hình thoi, được bao quanh bởi một quầng rõ ràng tương ứng với quả nang. Điều này xảy ra bởi vì mực in Ấn Độ và nigrosin là những chất không thể xâm nhập vào polysaccharide tạo nên nang vi sinh vật sống.

Điều đáng chú ý là các cấu trúc khác có thể có trong mẫu trực tiếp, chẳng hạn như bạch cầu hoặc hồng cầu, không xâm nhập được.

Bây giờ, nếu vi sinh vật đã chết, thuốc nhuộm có thể xâm nhập vào bên trong chúng, do đó việc nhuộm này cũng hữu ích để đánh giá khả năng sống của vi sinh vật.

Kỹ thuật

nguyên vật liệu

Nigrosine

Nigrosine có tên là màu đen mà nó có. Nó là một chất tổng hợp thu được từ việc đun nóng hỗn hợp các hợp chất hữu cơ - chẳng hạn như nitrobenzine, anilin và anilin hydrochlorit-, sử dụng chất xúc tác (sắt hoặc đồng) trong phản ứng nói trên.

Mực trung quốc

Mực Trung Quốc là một chất chủ yếu được người Châu Á sử dụng để viết, làm các tác phẩm nghệ thuật và vẽ tranh đơn sắc. Nó rất phổ biến trong văn hóa Trung Quốc.

Nó được lấy từ mực ống trộn với than thành bột, sản phẩm của việc đốt cháy nhựa cây thấp.

Cũng có thể điều chế nó từ bồ hóng từ quá trình đốt các hydrocacbon (dầu thực vật), cùng với gelatin protein để tạo độ đặc thích hợp để tránh kết tủa các hạt cacbon.

Thông số kỹ thuật để lấy mẫu

- Nó không yêu cầu phải nhịn ăn.

- Dịch não tủy, đờm hoặc mẫu lỏng vô trùng phải chứa ít nhất 1 ml thể tích và phải được chuyển ngay đến phòng xét nghiệm ở nhiệt độ phòng.

- Dịch não tủy và các mẫu dịch vô trùng phải được lấy bởi bác sĩ chuyên khoa.

- Nó cũng có thể là một mẫu cấy thuần chủng của một dòng nghi ngờ có liên quan đến các tác nhân gây bệnh nói trên.

Thực hiện kỹ thuật với mẫu trực tiếp

- Các mẫu phải được ly tâm, sau đó loại bỏ phần nổi phía trên và lấy phần lắng.

- Một giọt vật liệu đã ly tâm (cặn) và một giọt mực India hoặc nigrosine được đặt trên một phiến kính sạch.

- Nên trộn đều hỗn hợp và đậy lại bằng một tấm bìa cứng, để giọt bột lan ra như một lớp màng mỏng mà không bị tràn ra ngoài mép.

- Sau đó, chuẩn bị được gắn trên kính hiển vi.

- Nếu pha chế quá đậm, có thể pha loãng với nước.

Thực hiện kỹ thuật với các chủng từ nuôi cấy

- Một phần rất nhỏ của mẫu cấy non được lấy bằng kim cấy và hòa tan trong một giọt mực India đã đặt trước đó trên một phiến kính sạch.

- Một chiếc kẹp được đặt trên đầu trang.

- Nó được quan sát trong kính hiển vi ở 10X và sau đó là 40X.

Bạn cũng có thể hòa tan một phần khuẩn lạc trong nước cất, từ đó lấy một giọt và trộn với mực India. Bằng cách này, việc chuẩn bị sẽ không quá dày, giúp bạn có thể quan sát các cấu trúc một cách cô lập; nếu có đám đông, nó sẽ không được quan sát tốt.

Một phương pháp khác như sau:

- Nhỏ một giọt dịch nuôi cấy huyền phù vào một đầu của phiến kính.

- Nhỏ một giọt nigrosine vào cùng một đầu và trộn đều.

- Với sự trợ giúp của một phiến kính khác, trải mẫu như thể làm phết máu huyết học.

- Để khô và quan sát dưới kính hiển vi.

Quan sát bằng kính hiển vi

Đầu tiên bạn phải lấy nét bằng vật kính 10X để có tầm nhìn bao quát về trường. Sau đó, nó nên được tìm kiếm nếu có khoảng trống rõ ràng; nếu có, hãy lấy nét 40X để xem chi tiết.

Lợi thế

- Nó rất dễ thực hiện.

- Đó là một kỹ thuật rẻ tiền.

- Phương pháp này không yêu cầu vết bẩn phải được cố định bằng nhiệt hoặc bằng hóa chất; do đó, vi sinh vật được quan sát mà không bị biến dạng.

- Chế phẩm tươi không cần sấy khô nên có thể quan sát ngay, cho kết quả nhanh chóng.

Bất lợi

Sau khi lắp ráp, các chế phẩm mới phải được quan sát ngay lập tức; nếu chúng được để khô thì không thể quan sát được nữa và phải lắp đặt một cái mới.

Nhuộm mô bằng mực Ấn Độ

Một chức năng khác mà mực in Ấn Độ có thể đáp ứng là trong các phòng thí nghiệm bệnh học. Điều này được áp dụng cho các mẫu mô được chiết xuất bằng phẫu thuật để đánh dấu các biên cắt bỏ của khối u.

Các mô được đánh dấu được phun bằng axit axetic. Điều này hoạt động như một chất kết dính và ngăn mực rò rỉ ra ngoài khi mô được xử lý thông thường để chuẩn bị sinh thiết.

Quy trình bao gồm tắm khăn giấy trong cồn và xylen, sau đó ngâm nó trong sáp parafin. Việc đánh dấu này hướng dẫn bác sĩ giải phẫu bệnh khi quan sát mô, chỉ ra đâu là ranh giới phẫu thuật cắt bỏ hoặc điểm quan tâm khác.

Người giới thiệu

1. «Nigrosina». Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. 11 tháng 7 năm 2017, 22:46 giờ UTC. Ngày 6 tháng 1 năm 2019, 16:56: en.wikipedia.org
2. "Mực Trung Quốc". Wikipedia, Bách khoa toàn thư miễn phí. Ngày 1 tháng 10 năm 2018, 03:08 giờ UTC. Ngày 6 tháng 1 năm 2019, 18:20: es.wikipedia.org/
3. Silva L, Silva C, Fernández N, Bueno C, Torres J, Rico M, Macías J và các cộng tác viên. (2006). Nhân viên lao động của cộng đồng tự trị Extremadura. Chương trình cụ thể Tập IV. Biên tập MAD. Seville-Tây Ban Nha, trang 211-212.
4. Silva M, García M, Corrales J, Ponce E. (2006) Kỹ thuật viên phòng thí nghiệm chuyên khoa, Dịch vụ Y tế Galicia (SERGAS). Chương trình nghị sự môn học cụ thể tập 2. MAD biên tập. Seville-Tây Ban Nha, trang 79-80.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Chẩn đoán vi sinh Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Biên tập Panamericana SA